儀器使用方法

1、常用儀器使用方法1、旋蒸儀擦凈借口套上蒸餾燒瓶（小卡在上，大卡在下）開冷凝水開旋蒸儀調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速幾分鐘后關(guān)閉真空閥旋蒸，結(jié)束開真空閥關(guān)旋蒸儀關(guān)冷凝水。2、pH計根據(jù)測定物質(zhì)的pH大致范圍，選擇合適的校正溶液（確定上下限），再測定樣品。3、高速分散器轉(zhuǎn)速：數(shù)顯*1000rpm，時間：0-9.9min4、紫外掃譜配置合適濃度的藥物PBS溶液，并用PBS溶液作為空白，并在確定范圍，檢測樣品，print桌面新建image粘貼圖譜。5、小型ATS(高壓均質(zhì)機)紅色開關(guān)RUN低壓（0/-xbar）排空乙醇用蒸餾水沖洗2遍加樣品（料斗中藥液不得低于凹槽，防止進空氣）循環(huán)逐步加壓中途取樣，必須關(guān)注料斗中的液面，藥

2、液體積40ml.6、薄層色譜薄層板的制備1玻璃板用一塊玻璃板涂上很薄的吸附劑，如硅膠或氧化鋁等，玻璃板要求薄厚一致，大小相同，表面光滑平整，一般玻璃只要合乎這些要求就可。如果找不到平整均一的，將舊光學(xué)照像底片截成同樣大小也可以。用前先將玻璃用肥皂和水洗干凈，必要時浸泡在清洗液中，然后水洗烤干，用紗布擦光。玻璃板大小有各種規(guī)格，一般有2020、2010、205厘米，也有更小的，可根據(jù)需要自行設(shè)計。寬度要求至少能點開兩三個樣品，每兩點之間相隔至少1.5厘米，玻板長度一般要滿足展開10厘米的距離。點樣的起點應(yīng)距底邊至少1.5厘米的距離。2吸附劑應(yīng)用最廣泛的為硅膠和氧化鋁，市場上有專供薄層色譜用的吸附

3、劑，規(guī)格分不含粘合劑的硅膠H，氧化鋁H和含有粘合劑熟石膏的硅膠G，氧化鋁G，如市售硅膠G含13熟石膏，氧化鋁分中性、酸性、堿性三種。吸附劑的粒度范圍最好在180200目之間，太小了流速慢，太大則影響分離效果。如不合要求，應(yīng)過篩。3薄層板的涂布最簡單的涂布方法是用兩條比玻璃板厚025毫米的玻璃條或有機玻璃條（或在同樣厚度的玻璃條下粘一層膠布），將玻璃板夾住，把調(diào)好的吸附劑漿液平鋪在薄層板上，然后用一有機玻璃條或直尺，迅速均勻地向前推進，就象推血片一樣，只要推進的速度均勻一致，即可得到薄厚均勻的薄層板，如在一塊玻璃板末端再接一塊相同的玻璃板，把剩余的裝液接過去，可使涂層邊緣整齊，厚度一致，吸附劑漿

4、液的加水量和攪拌時間是涂布成敗的關(guān)鍵，像128平方厘米的玻璃板需要23克硅膠G，加46毫升水即可，只要技術(shù)熟練即能涂成厚薄一致，光滑平整的一塊薄層板。不同性質(zhì)不同批號的吸附劑，加水量和攪拌時間有時可有差異，應(yīng)根據(jù)情況摸出規(guī)律。為了達到涂布的各板厚度均勻一致，最好采用涂布器進行薄層的涂布。為了增加薄層的牢固性及易于保存，可在涂布過程中加入某些粘合劑以增加薄層的硬度。一般采用添加劑羧甲基纖維素鈉（CMCNa），應(yīng)用方法是取CMC-Na 1克溶于100毫升水中，加熱煮沸溶解，按比例與硅膠攪勻，鋪板。涂成之后先把玻板放在平面上，室內(nèi)干固，再對光檢查，看是不是均勻，有無氣泡，平整光潔度如何，合格的上烤箱

5、110加熱30分鐘進行活化，冷卻后貯于干燥器內(nèi)備用。在進行實驗時，應(yīng)盡量可能采用同批號涂布活化的薄層板，以減少因活化不一致引起的Rf值發(fā)生差異，目前國內(nèi)市場已有成品供應(yīng)，如黃巖化學(xué)分析材料廠即有各種類型的薄層板出售。三、薄層板的使用1點樣將樣品溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲校☉?yīng)盡量避免有水），取微量注射器或玻璃毛細(xì)管截齊后，吸取一定量的檢樣，輕輕接觸到薄層上，使樣品自動吸到薄層上，點的直徑不要超過0.3厘米，一次不能點完，待干后再點，稍有過分就會損傷板面，影響展開后的斑點形狀。每兩個樣點之間相距至少1.5厘米。點樣的起點距薄板底邊至少1.5厘米，以免樣點浸入展開溶劑中，同塊薄板上各樣點應(yīng)保持在與底邊平行的一

6、條直線上，為控制好點樣距離，應(yīng)用薄層點樣尺架。2展開根據(jù)薄層板大小，自行選用適當(dāng)玻璃標(biāo)本缸，長方形，如17106厘米的標(biāo)本缸可容納下159厘米的玻璃板。采用較大的玻璃缸和玻璃板時，在缸內(nèi)沿周圍缸壁襯一層預(yù)先浸有溶劑的濾紙，以便缸內(nèi)展開溶劑易達到飽和，防止邊緣效應(yīng)（即兩邊緣的點走得快）和同一物質(zhì)Rf值不一致現(xiàn)象。一般將薄層板斜置展開容器內(nèi)，密閉。先不使溶劑浸濕薄層板，飽和1015分鐘后再進行展開，展開溶劑沿著薄層板向上移動。對加粘合劑的涂板可以近于垂直的狀態(tài)進行展開，而對未加粘合劑的薄層板則必須以傾斜狀態(tài)（15度角）進行展開。為了防止產(chǎn)生“邊緣效應(yīng)”和展開溶劑不飽和現(xiàn)象。還可采用夾心式展開容器，

7、其方法是將薄層板的左右兩側(cè)各刮去510毫米，墊上條狀玻璃或塑料，蓋一塊與薄層板同樣大小的玻璃，用夾子將兩邊夾好，插入展開溶劑中進行展開，并能取得良好效果。3顯色薄層展開后，涼干。如含粘合劑，即可直接噴顯色劑，使之顯色，有的還需經(jīng)紫外線（254nm）照射后方能顯色；對不含粘合劑的薄板，在噴顯色劑時應(yīng)盡量遠(yuǎn)離薄層板，否則會連吸附劑一起吹掉，應(yīng)予以注意。TLC操作要點CMC-Na溶液制備：羧甲基纖維素納溶液一般濃度為0.30.5，配制時先稱取適量CMC-Na，然后用相應(yīng)濃度體積的熱蒸餾水溶解，抽濾，濾液中加入幾滴甲醛，標(biāo)記常溫保存。（注意點：1. cmc-Na在熱水中也很難一下子溶解，要煮沸大概30

8、分鐘或更久的，其實這個過程很慢。2.如CMC-Na溶解后未抽濾，則用時應(yīng)取上清液；3.長期不用會發(fā)黃，并可能有霉菌生長，因此需加幾滴甲醛以防霉變；4.最好提前幾天配好，以澄清透明為宜。）硅膠和CMC-Na溶液的比例：根據(jù)所分離物質(zhì)的不同，以及所需薄層板的軟硬程度不同，可自我靈活加以調(diào)節(jié)。（注意點：1. 一般溶液體積和硅膠重量的比例為2.53:1(v/g)；2.千萬不要太粘稠，要不鋪板時會馬上固化，不易鋪平；最好有一定的流動性，這樣不易馬上干掉，而且鋪好后水平放置時他會自然變得平整。3. 如果顯色劑中含濃硫酸，建議不要用羧甲基纖維素鈉配制，或用低濃度的羧甲基纖維素鈉配制，以免影響薄層展開效果。4

9、. CMC-Na溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，濃度高了將來顯色時如果有加熱過程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低了鋪出來的板子不結(jié)實，輕輕一碰就掉渣，不好保存，而且點樣時會很緊張，容易出洞，或者晾干時會出現(xiàn)許多裂縫。）研磨：研磨時要順著一個方向，速度不宜快，要順著研缽的邊緣，觀察仔細(xì)，一定要把氣泡趕盡殺絕。研磨好的因改是均勻的，沒有氣泡，沒有固體的粉末類異物，溶液有一定的粘性。（注意點：如果有氣泡除不去，可以加入少量的乙醇或者丙酮。）鋪板：倒時要注意不能引入小氣泡，可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上；可以雙手10個指頭拖住玻璃板，有節(jié)奏的顛，使得硅膠分?jǐn)倓蚍Q。尤其是4個角，容易高出玻璃板其他部

10、位，所以要格外注意。顛好的板，表面看上去要光滑平整，沒有氣孔。不宜久顛，以保證顛好后硅膠還有一定的流動性，放置到平臺時仍可以靠自身流動修正顛板及移動所產(chǎn)生的不均。（注意點：1.玻璃板應(yīng)該很干凈，沒有劃痕，沒有缺口，4個角要“健全”；2.如果下邊緣不齊，則可適當(dāng)刮去部分以使下邊緣整齊。3.制備板一般應(yīng)適當(dāng)鋪厚些，分析板應(yīng)適當(dāng)薄些；化學(xué)藥一般要適當(dāng)增加厚度；中藥一般較難分離，需要薄板，以增加分離度。5. 載板要求平滑清潔，在使用前一定要處理干凈，用洗滌液或肥皂水洗滌，再用水沖洗干凈，烘干；）活化：鋪好的板，要找個干凈的地方放置自然晾干，這個過程也是耐心的等著，不可過急，干燥后再活化，否則板會開裂。

11、自然干燥后，最好先于5060攝氏度烘12h，然后升溫于105攝氏度左右烘0.51h，干燥器中保存?zhèn)溆?。點樣：除另有規(guī)定外，按規(guī)定用微升毛細(xì)管(或其它符合要求的點樣的工具)分別吸取供試液或?qū)φ找阂源怪狈较蛐⌒慕佑|薄層板面，做點狀點樣或條帶狀點祥。點樣基線與底邊距離，現(xiàn)所用板的大小，相距l(xiāng)一2cm，多數(shù)品種采用長度為10cm的板，故點樣距底邊1cm為宜。樣品原點之間的距離視情況為1、15或2cm，原點宣徑應(yīng)不太子3mm(高效板原點宜徑應(yīng)更小)；如點樣量較大或為了改善分離度，也可點成12mm狹細(xì)的窄長條帶(長度視情況而不同)，點樣時須注意盡量不要損傷薄層板面，如條帶點樣，應(yīng)注意條帶的均勻；預(yù)制板或加

12、固的自制板，用專門的條帶點樣器械(如噴霧狀條帶點樣器)，可保證點佯的質(zhì)量。展開劑配制：第一、某種樣品在這種展開劑中只顯示一個點，并不等于在別的展開劑中也只顯示一個點。因此在尋找展開劑時，多嘗試幾種比例不同，成分不同的展開劑。展開劑的極性太小，點分不開，極性太大，也分不開.一般以目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值在0.3左右為最佳。第二、點不能點得太濃,否則容易重疊,不易判斷,因為如果兩個點相近的話,一濃就變成一個點了。第三、板上點的展開的清晰程度和溶劑的極性和物質(zhì)在該溶劑中的溶解性有關(guān)，只有兩者比較合適才能有一個交好的分離效果。選擇適當(dāng)?shù)恼归_劑是首要任務(wù).一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷己烷

13、苯乙醚THF乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇 使用單一溶劑，往往不能達到很好的分離效果，往往使用混合溶劑通常使用一個高極性和低級性溶劑組成的混合溶劑，高極性的溶劑還有增加區(qū)分度的作用，常用的溶劑組合有：Petroleum ether/Ethyl acetate, Petroleum ether/Acetone, Petroleum ether/Ether, Petroleum ether/CH2Cl2, CH2Cl2/ethyl acetate, ethyl acetate/ MeOH, CHCl3/ ethyl acetate展開劑的比例要靠嘗試.一般根據(jù)文獻中報道的該類化合物用什么樣的展開劑，就首先嘗

14、試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個分離效果好的展開劑。很多時候,展開劑的選擇要靠自己不斷變換展開劑的組成來達到最佳效果。我在實驗中，為了實現(xiàn)一個配體與其他雜質(zhì)有效分離，曾經(jīng)嘗試了所有的溶劑用來兩兩組合后，最后才找到petroleum ether/THF這類不常見的混合溶劑。一般把兩種溶劑混合時,采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開的跡象,再調(diào)整比例,達到最佳效果，如果沒有分開的跡象，最好是換溶劑。對于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的物質(zhì)，在展開劑里 在利用TLC跟蹤反應(yīng)時，在點板的時候往往是反應(yīng)體系的混和溶液點一個點A，每種 難揮發(fā)的原料各點一個點B,C, D等

15、等，然后所有的原料和反應(yīng)體系的混合溶劑再共同點 一個混合點X，這些點在板上的位置如圖所示： A X B C D 這樣的好處是展開后可以清楚地看見每個點的位置，把A這個點展開后的各個層份的 點與B,C,等原料比較，從而判斷原料消失沒有，點混合點X的目的在于，方便觀察，因為 有時候，板展開后，各點的位置有些變形，或者由于邊緣效應(yīng)等等，使得判斷不易。利用TLC判斷物質(zhì)的純度時，往往要和NMR相結(jié)合，因為某種樣品在這種展開劑中只 顯示一個點，并不等于在別的展開劑中也只顯示一個點。但有趣的是，由于H NMR可鑒別 的純度也就在95%左右，有時候H NMR現(xiàn)示較純的東西，一點板就會發(fā)現(xiàn)有幾個點。所以，兩者

16、要結(jié)合使用。但是自己以前的樣品，則可以只通過點板來判斷純度。標(biāo)準(zhǔn)品購買在目前研發(fā)狀態(tài)下，雜志譜的研究要求越來越嚴(yán)，幾乎成為了藥物研發(fā)中最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，這就涉及到各種雜質(zhì)、各種雜質(zhì)中間體等對照品的使用。但是基于歷史原因和研發(fā)水平，目前在國內(nèi)能購買到的對照品很少?，F(xiàn)就工作中購買對照品/標(biāo)準(zhǔn)品的渠道做一下總結(jié)，希望大家補充。一、直接從中檢所購買直接從中檢所購買，也包括一些省一級的藥檢所，如上海藥檢所，南京藥檢所等。對于對照品的有效期，一般當(dāng)中檢所新出批號時，上一批號對照品基本可認(rèn)為已過期。二、UPS/EP/BP對照品可以直接從UPS/EP等官方網(wǎng)站上訂購；USP對照品可發(fā)電子郵件至custsvcus

17、詢問和訂購；EP/BP對照品可發(fā)電子郵件至詢問和訂購。三、國外精細(xì)化學(xué)公司處購買對于英語比較好的同學(xué)，可直接從國外精細(xì)化學(xué)公司網(wǎng)站詢問和訂購，如：3.1 西格瑪奧德里奇 sigma-aldrich，網(wǎng)址/china-mainland.html3.2 美國國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院National Institute of Standards and Technology（NIST），網(wǎng)址為/index.html3.3 加拿大國家研究委員會 National Research Council Canada（NRC），網(wǎng)址為http:/www.nrc-cnrc.gc.ca/index.html3.4 德國ABCR公司，網(wǎng)址為http:/www.abcr.de/四、從國內(nèi)對照品經(jīng)銷商處購買此種途徑為國內(nèi)研究單位普遍采取的渠道，現(xiàn)介紹幾家聲譽和品種較多的公司：4.1國藥集團化學(xué)試劑有限公司（國企）Tel：021-4.2 百靈威化學(xué)技術(shù)有限公