維生素B1的測定.ppt

1、維生素B1的測定,營養(yǎng)0901 徐燕萍 張晶熒 趙莎莎 趙小娟,. 結構與性質,嘧啶 亞甲基 噻唑 連成的季銨鹽化合物,維生素B1，又稱硫胺。分子式C12H17ClN4OS。它是人體必需的13種維生素之一，是一種水溶性維生素，屬于維生素B族，為無色結晶體，溶于水，在酸性溶液中很穩(wěn)定，在堿性溶液中不穩(wěn)定，易被氧化和受熱破壞。,測定意義,由于人體不能自行合成維生素B1，必須從食物中攝取。因此，人體需依賴食物提供足夠的維生素B1，測定各種食品維生素B1含量多少將對食品營養(yǎng)價值評價十分重要。如果由于食物攝入量不足，或因食物的加工、運輸、儲存、烹飪不當，使維生素B1受到破壞或損失，都會造成維生素B1的缺

2、乏。因此，食品中的維生素B1測定對指導食品加工、保存、膳食營養(yǎng)配比等都有一定的意義。,維生素B1是人體能量代謝，特別是糖代謝所必需的，故人體對它的需要量通常與攝取的熱量有關。當人體的能量主要來源于糖類時，維生素B1的需要量最大。 成人的建議每日攝取量是1015mg。妊娠、哺乳期每天攝取1516mg；在生病、生活緊張、接受手術時，要增加必要用量。,來源簡介 維生素B1廣泛存在于天然食物中，含量較豐富的有：動物內臟(肝、心及腎)、肉類、豆類、花生及精細加工的谷物類。谷物類是我國人民的主食，也是維生素B1的主要來源。但過分去除麩皮與糠，維生素B1損失很多，烹調加堿可使維生素B1損失增高。,維生素B1

3、的測定方法： 分光光度法; HPLC法; 熒光分光光度法等。,分光光度法,分光光度法是將維生素B1生成游離型后，與重氮化試劑對氨基苯乙酮反應，生成紫紅色色素，移至二甲苯中測定其濃度。 本法靈敏度差，只適用于食品中維生素B1含量高的試樣。,高效液相色譜法,把維生素B1衍生化后導入高效液相色譜儀，經(jīng)柱分離，通熒光檢測器測定。 本法適用于體系復雜的樣品，干擾嚴重時采用此法。,熒光法,這里我們主要介紹熒光法 參考GB/T 5009.84-2003 食品中硫胺素(維生素B1)的測定,方法原理,試樣在酸性溶液中加熱，提取維生素B1，經(jīng)蛋白分解酶處理，使維生素B1成為游離型。再經(jīng)層析柱純化，去除熒光淬滅物質

4、，同時濃縮，用堿性鐵氰化鉀溶液將其氧化成硫色素，在紫外線下，硫色素發(fā)出熒光，再給定的條件下以及沒有其他物質干擾時，此熒光之強度與硫色素量成正比即與溶液中維生素B1量成正比。,操作步驟,1.樣品處理 樣品采集后用勻漿機打成勻漿于低溫冰箱中冷凍保存，用時將其解凍后使用。,2.樣品提取,3.凈化,a.脫脂棉鋪于鹽基交換管的交換柱底部，再加約1g活性人造浮石使之達到交換柱的1/3高度。 b.用移液管加入提取液2060ml。 c.加入約10ml熱蒸餾水沖洗交換柱，棄去洗液，重復三次。 d.加入20ml50g/L酸性Kcl,收集此液于25ml刻度試管內。涼至室溫，用250g/L酸性Kcl定容至25ml，即

5、為凈化液。,做空白試驗 重復上述操作，將20ml維生素B1標準使用液加入鹽基交換管以代替試樣提取液，即得到標準凈化液。,4.氧化,將5ml試樣凈化液分別加入A、B兩個反應瓶； 同時將5ml標準凈化液分別加入A1、B1兩個反應瓶中。,Maizel-Gerson 反應瓶,氧化流程,反應瓶要同時振搖，準確計時90s.,5、測定,熒光測定條件： 激發(fā)波長365nm；發(fā)射波長435nm；激發(fā)波狹縫5nm；發(fā)射波狹縫5nm。 依次測定下列熒光強度： a. 樣品空白熒光強度（樣品反應瓶A）； b. 標準空白熒光強度（標準反應瓶A1）； c. 樣品熒光強度（樣品反應瓶B）； d. 標準熒光強度（標準反應瓶B1

6、）；,6.計算,式中：X樣品中硫胺素含量，mg/100g； U樣品熒光強度； Ub樣品空白熒光強度； S標準熒光強度； Sb標準空白熒光強度； c硫胺素標準工作液濃度，g/ml； V用于凈化的硫胺素標準工作液體積，ml； V1樣品水解后定容之體積，ml； V2樣品用于凈化的提取液體積，ml； m樣品質量，g；,試劑作用,1、蛋白分解酶：用于試樣的蛋白分解。 2、鹽酸：水解樣品。 3、氯化鉀：該熱溶液可從鹽基交換管中的浮石里解析出維生素B1。 4、鐵氰化鉀堿性溶液：氧化游離的維生素B1，生成硫色素。 5、正丁醇：溶解紫外熒光物質硫色素試劑。,注意事項,1 、加熱酸性Kcl時不能使其沸騰，熱Kcl濾速較快，而不沸則是使其不至因過飽和而在洗滌中結晶析出阻塞交換柱。 2、 紫外線會分解破壞維生素B1