09T-I604-01薄層色譜法(二部)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.doc

文件類別：技術(shù)標(biāo)準(zhǔn) 4/4文件名稱：薄層色譜法(二部)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 文件編號(hào)：09T-I604-01分發(fā)部門(mén)：質(zhì)量控制科1. 目的：建立薄層色譜法(二部)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，并按規(guī)程進(jìn)行檢驗(yàn)，保證檢驗(yàn)操作規(guī)范化。2. 依據(jù)： 2.1. 中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部。3. 范圍：適用于所有用薄層色譜法(二部)測(cè)定的供試品。4. 責(zé)任：檢驗(yàn)員、質(zhì)量控制科主任、質(zhì)量管理部經(jīng)理對(duì)本規(guī)程負(fù)責(zé)。5. 正文：5.1. 簡(jiǎn)述：薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)樣于薄層板上，經(jīng)展開(kāi)、檢視后所得的色譜圖，與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖作對(duì)比，用于藥品的鑒別或雜質(zhì)檢查的方法。 5.2 . 儀器與材料。5.2.1. 薄層板。5.2.1.1. 自制薄層板：除另有規(guī)定外，玻璃板要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾 干。最常用的固定相有硅膠 G、硅膠 GF254、硅膠 H和硅膠 HF254，其次有硅藻 土、硅藻土 G、氧化鋁、氧化鋁 G、微晶纖維素、微晶纖維素 F254 等。其顆粒大 小，一般要求粒徑為 540m。5.2.1.2. 薄層涂布，一般可分為無(wú)黏合劑和含黏合劑兩種。前者系將固定相直接涂布 于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的黏合劑，一般常用 10%15煅石膏（CaSO42H2O 在 140加熱 4小時(shí)），混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液（0.2%0.5）適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。使用涂布器涂布應(yīng)能使固定相在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。5.2.1.3. 商品薄層板：分普通薄層板和高效薄層板，如硅膠薄層板、硅膠 GF254 薄層板、聚酰胺薄膜和鋁基片薄層板等。高效薄層板的粒徑一般為 57m。5.2.2. 點(diǎn)樣器：同紙色譜法項(xiàng)下。常用具支架的微量注射器或定量毛細(xì)管，應(yīng)能使點(diǎn)樣位置正確、集中。5.2.3. 展開(kāi)容器：應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開(kāi)缸，并有嚴(yán)密的蓋子，底部應(yīng)平整光滑，或有雙槽。5.2.4. 顯色劑：見(jiàn)各品種項(xiàng)下的規(guī)定?？刹捎脟婌F顯色、浸漬顯色或置適宜試劑的蒸氣中熏蒸顯色，用以檢出斑點(diǎn)。5.2.5. 顯色裝置：噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出；浸漬顯色可用專用玻璃器皿或用適宜的玻璃缸代替；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸 或適宜大小的干燥器代替。5.2.6. 檢視裝置：為裝有可見(jiàn)光、短波紫外光（254nm）、長(zhǎng)波紫外光（365nm）光源及相應(yīng)濾片的暗箱，可附加攝像設(shè)備供拍攝色譜用，暗箱內(nèi)光源應(yīng)有足夠的光照度。5.3. 操作方法。5.3.1. 薄層板制備。5.3.1.1. 自制薄層板：除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中按同一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為 0.20.3mm），取下涂好薄層的玻璃板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干后，在 110活化 30 分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過(guò)透射光和反射光檢視）。5.3.1.2. 商品薄層板：臨用前一般應(yīng)在 110活化 30分鐘。聚酰胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據(jù)需要剪裁，但須注意剪裁后的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如在貯放期間被空氣中雜質(zhì)污染，使用前可用適宜的溶劑在展開(kāi)容器中上行展開(kāi)預(yù)洗，110活化后，置干燥器中備用。5.3.2. 點(diǎn)樣：除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊 2.0cm，樣點(diǎn)直徑為 24mm（高效薄層板為 12mm），點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜，一般為 1.02.0cm（高效薄層板可不小于5mm）。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層板表面。5.3.3. 展開(kāi)：展開(kāi)缸如需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開(kāi)劑， 必要時(shí)在壁上貼兩條與缸一樣高的寬濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封頂蓋，使 系統(tǒng)平衡或按各品種項(xiàng)下的規(guī)定操作。5.3.3.1. 將點(diǎn)好供試品的薄層板放入展開(kāi)缸中，浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板邊0.51.0cm（切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中），密封頂蓋，待展開(kāi)至適宜的展距（如：20cm的薄層板，展距一般為1015cm，10cm高效薄層板，展距一般為5cm左右），取出薄層板，晾干，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。5.3.3.2. 展開(kāi)可以單向展開(kāi)，即向一個(gè)方向進(jìn)行；也可以進(jìn)行雙向展開(kāi)，即先向一個(gè) 方向展開(kāi)，取出，待展開(kāi)劑完全揮發(fā)后，將薄層板轉(zhuǎn)動(dòng) 90，再用原展開(kāi)劑或另一種展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)；亦可多次展開(kāi)。5.3.4. 顯色與檢視：熒光薄層板可用熒光猝滅法；普通薄層板，有色物質(zhì)可直接檢視，無(wú)色物質(zhì)可用物理或化學(xué)方法檢視。物理方法是檢出斑點(diǎn)的熒光顏色及強(qiáng)度；化學(xué)方法一般用化學(xué)試劑顯色后，立即覆蓋同樣大小的玻璃板，檢視。5.4. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：按各品種項(xiàng)下要求對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，使斑點(diǎn)的檢測(cè)靈敏度、比移值（Rf）和分離效能符合規(guī)定。5.4.1. 檢測(cè)靈敏度：系指雜質(zhì)檢查時(shí)，供試品溶液中被測(cè)物質(zhì)能被檢出的最低量。一般采用對(duì)照溶液稀釋若干倍的溶液與供試品溶液和對(duì)照溶液在規(guī)定的色譜條件下，在同一塊薄層板上點(diǎn)樣、展開(kāi)、檢視，前者應(yīng)顯示清晰的斑點(diǎn)。5.4.2. 比移值（Rf）：系指從基線至展開(kāi)斑點(diǎn)中心的距離與從基線至展開(kāi)劑前沿的距離的比值。鑒別時(shí)，可用供試品溶液主斑點(diǎn)與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)的比移 值進(jìn)行比較，或用比移值來(lái)說(shuō)明主斑點(diǎn)或雜質(zhì)斑點(diǎn)的位置。Rf=除另有規(guī)定外，比移值（Rf）應(yīng)在0.20.8之間。5.4.3. 分離效能：鑒別時(shí)，在對(duì)照品與結(jié)構(gòu)相似藥物的對(duì)照品制成混合對(duì)照溶液的色譜圖中，應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。雜質(zhì)檢查的方法選擇時(shí)，將雜質(zhì)對(duì)照品用供試品自身稀釋對(duì)照溶液溶解制成混合對(duì)照溶液；也可將雜質(zhì)對(duì)照品用待測(cè)組分的對(duì)照品溶液溶解制成混合對(duì)照溶液；或者采用供試品以適當(dāng)?shù)慕到夥椒ǐ@得的溶液。上述溶液點(diǎn)樣展開(kāi)后的色譜圖中，應(yīng)顯示清晰分離的斑點(diǎn)。5.5. 測(cè)定法。5.5.1. 鑒別：可采用與同濃度的對(duì)照品溶液，在同一塊薄層板上點(diǎn)樣、展開(kāi)與檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色（或熒光）與位置（Rf）應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)一致，而且主斑點(diǎn)的大小與顏色的深淺也應(yīng)大致相同?；虿捎霉┰嚻啡芤号c對(duì)照品溶液等體積混合，應(yīng)顯示單一、緊密的斑點(diǎn)；或選用與供試品化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的藥物對(duì)照品與供試品溶液的主斑點(diǎn)比較，兩者Rf 應(yīng)不同，或?qū)⑸鲜鰞煞N溶液等體積混合，應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。5.5.2. 雜質(zhì)檢查：可采用雜質(zhì)對(duì)照品法、供試品溶液的自身稀釋對(duì)照