培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化ppt課件

.,培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化,.,探究：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化,目的要求1、學(xué)習(xí)利用血球計數(shù)板進(jìn)行微生物計數(shù)的方法2、實驗探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化3、注意樣方法的應(yīng)用4、體會影響種群數(shù)量變化的因素,.,1、酵母菌的繁殖方式主要是:,2、酵母菌的呼吸方式是:,兼性厭氧(可進(jìn)行有氧呼吸和無氧呼吸),回顧思考:,出芽生殖,3、酵母菌的培養(yǎng)條件要注意那些問題?,比如要用適宜的溫度培養(yǎng),調(diào)節(jié)好PH值,溶氧量的控制等。,.,一、血球計數(shù)板,.,1、血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu),血球計數(shù)板是一種專門用于計算較大單細(xì)胞微生物數(shù)量的儀器，由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四條下凹的槽，構(gòu)成三個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面刻有一個方格網(wǎng)。,.,大方格,中方格,小方格,.,方格網(wǎng)上刻有9個大方格，其中只有中間的一個大方格為計數(shù)室，供微生物計數(shù)用。,大方格的長和寬各為1mm，深度為0.1mm，即1mm1mm0.1mm，其容積為0.1mm3；大方格的長和寬各為2mm，深度為0.1mm，即2mm2mm0.1mm，其容積為0.4mm3,.,計數(shù)室通常也有兩種規(guī)格,1625型：即大方格內(nèi)分為16中格，每一中格又分為25小格,2516型：即大方格內(nèi)分為25中格，每一中格又分為16小格。,不管計數(shù)室是哪一種構(gòu)造，其每一大方格都是由1625=2516=400個小方格組成。,.,2、計數(shù),1625型：一般取四角的四個中方格（100個小方格）計數(shù),2516型：一般計數(shù)四個角和中央的五個中方格（80個小方格）的細(xì)胞數(shù)。,.,3、計算,以1mm1mm0.1mm型為例,計數(shù)室容積為0.1mm3，則每個小方格的容積為1/4000mm3。,100個小方格細(xì)胞總數(shù)/10040010000稀釋倍數(shù),酵母細(xì)胞個數(shù)1mL=,80個小方格細(xì)胞總數(shù)/8040010000稀釋倍數(shù),.,例1通常用血球計數(shù)板對培養(yǎng)液中酵母菌進(jìn)行計數(shù)，若計數(shù)室為1mm1mm0.1mm方格，由400個小方格組成。若多次重復(fù)計數(shù)后，算得每個小方格中平均有5個酵母菌，則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有個。,2108,.,例2檢測員將1mL水樣稀釋10倍后，用抽樣檢測的方法檢測每毫升藍(lán)藻的數(shù)量；將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計數(shù)室，并用濾紙吸去多余液體。已知每個計數(shù)室由2516400個小格組成，容納液體的總體積為01mm3。,現(xiàn)觀察到圖中該計數(shù)室所示a、b、c、d、e5個中格80個小格內(nèi)共有藍(lán)藻n個，則上述水樣中約有藍(lán)藻個mL。,5n105,.,4、血球計數(shù)板的使用方法步驟,計數(shù)：稍待片刻（約5min），待酵母菌細(xì)胞全部沉降到計數(shù)室底部后，將計數(shù)板放在載物臺的中央，先在低倍鏡下找到計數(shù)室所在位置后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察、計數(shù)并記錄。,鏡檢計數(shù)室：在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計數(shù)。,加樣品：將清潔干燥的血球計數(shù)板的計數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，一次性充滿計數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，充入細(xì)胞懸液的量以不超過計數(shù)室臺面與蓋玻片之間的矩形邊緣為宜。多余培養(yǎng)液可用濾紙吸去。,.,5、血球計數(shù)板的使用注意事項,從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾下，這樣使酵母菌分布均勻，防止酵母凝聚沉淀，提高計數(shù)的代表性和準(zhǔn)確性，求得的培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量誤差小。,如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)對培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋以便于酵母菌的計數(shù)。具體方法是：搖勻試管，取1mL酵母菌培養(yǎng)液，加入成倍的無菌水稀釋，稀釋n倍后，再用血球計數(shù)板計數(shù)，所得數(shù)值乘以稀釋倍數(shù)。以每小方格內(nèi)含有45個酵母細(xì)胞為宜。特別是在培養(yǎng)后期的樣液需要稀釋后計數(shù)。,.,對于壓在方格界線上的酵母菌應(yīng)當(dāng)計數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的菌體數(shù)，一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理，另兩邊不計數(shù)。,對每個樣品可計數(shù)三次，再取其平均值。,計數(shù)時應(yīng)不時調(diào)節(jié)焦距，才能觀察到不同深度的菌體。,血球計數(shù)板使用后，用自來水沖洗，切勿用硬物洗刷，以免損壞網(wǎng)格。,.,1、研究過程,測定,定期取樣,測細(xì)胞數(shù)目,2、測定方法,測重量,濕重,干重,（一）研究方法,二、微生物的種群數(shù)量變化,在恒定容積液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),.,細(xì)菌數(shù)目的對數(shù),時間,0,1,2,3,4,細(xì)菌的生長曲線,（二）種群數(shù)量變化規(guī)律,1：調(diào)整期,2：對數(shù)期,3：穩(wěn)定期,4：衰亡期,.,細(xì)菌生長曲線,細(xì)菌生長速率曲線該怎樣畫呢？,.,目的：使微生物的生長較長時間的維持在穩(wěn)定期。,優(yōu)點：縮短了培養(yǎng)周期,提高設(shè)備利用率,便于自動化管理。,連續(xù)培養(yǎng),.,例2（08江蘇卷）為研究酵母菌種群密度的動態(tài)變化，某同學(xué)按下表所列條件進(jìn)行了A、B、C和D共4組實驗，用1000mL錐形瓶作為培養(yǎng)器皿，棉塞封口，在25下靜置培養(yǎng)，其他實驗條件均相同，定時用血球計數(shù)板計數(shù)。根據(jù)實驗結(jié)果繪出的酵母菌種群密度變化曲線圖如下，請分析回答以下問題。,1）圖中曲線、和分別是_組、_組和_組的結(jié)果。,D,B,A,2）B組和A組的實驗結(jié)果不同的原因是B組_。,培養(yǎng)液較多，與空氣接觸面積較小，故供氧較少,3）D組和B組的實驗結(jié)果不同的原因是D組_。,葡萄糖濃度較低，故營養(yǎng)物供應(yīng)較少,4）在整個實驗過程中，直接從靜置的培養(yǎng)瓶中取培養(yǎng)原液計數(shù)的做法是錯誤的，正確的方法是和。,搖勻培養(yǎng)液后再取樣培養(yǎng)后期的樣液稀釋后再計數(shù),5）實驗結(jié)束后，用試管刷蘸洗滌劑擦洗血球計數(shù)板的做法是錯誤的，正確的方法是,浸泡和沖洗,.,細(xì)菌細(xì)胞數(shù)目的測定,待測樣品,等量的已知含量的紅細(xì)胞,混勻,涂抹,紅細(xì)胞,細(xì)菌,測定：,計算單位體積內(nèi)的細(xì)菌數(shù)目,.,細(xì)菌重量的測定,取樣：取一定體積的培養(yǎng)液,離心分離、反復(fù)洗滌,稱濕重,烘干稱干重,.,1、調(diào)整期,采用對數(shù)期的菌體作為菌種、增加接種量、,代謝活躍；體積增大；分裂遲緩。,適應(yīng)新環(huán)境,1）主要特征：,2）原因：,3）人工控制（縮短調(diào)整期）：,.,個體：代謝旺盛；分裂最快；個體形態(tài)和生理特征穩(wěn)定。群體：繁殖死亡,1）主要特征：,2）應(yīng)用：,作生產(chǎn)菌種，科研材料。,2、對數(shù)期,.,3、穩(wěn)定期,個體：積累有害代謝產(chǎn)物；有些出現(xiàn)芽孢。群體：活菌數(shù)量最多；繁殖死亡,1）主要特征：,2）原因：,生存條件相對惡化：營養(yǎng)物質(zhì)消耗；有害代謝產(chǎn)物積累；PH改變,種內(nèi)斗爭最激烈。,.,個體：細(xì)胞形態(tài)多樣群體：活菌數(shù)急劇下降；繁殖死亡,1）主要特征：,2）原因：,生存環(huán)境極度惡化（營養(yǎng)物質(zhì)消