月季的花藥培養(yǎng)-精校版(人教版).ppt

月季的花藥培養(yǎng) 1 被子植物定義 凡是種子有果皮包被著 胚珠有子房壁包被著的植物 就叫做被子植物 一 被子植物和裸子植物 2 裸子植物定義 凡是胚珠裸露 外面沒有子房壁包被 種子外面沒有果皮包被的植物稱為裸子植物 實例 玉米 大豆 梨 杏 實例 松 杉 柏 3 花的結(jié)構(gòu) 花的結(jié)構(gòu) 花梗 花托 萼片 花瓣 雌蕊和雄蕊 4 花的作用 被子植物的有性生殖是在花里進行的 雌蕊和雄蕊是進行有性生殖的主要部分 二 被子植物花粉粒的形成 1 雄蕊的結(jié)構(gòu) 雄蕊 2 花藥的結(jié)構(gòu) 3 花藥的發(fā)育 花粉是小孢子母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的 因此 花粉是單倍體的生殖細胞 4 被子植物的花粉發(fā)育 花粉粒的形成 經(jīng)歷時期 四分體時期 單核期 雙核期 兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同 花粉粒類型 一個成熟的花粉粒即為雄配子體 有兩種情況 二核花粉粒 成熟的花粉粒中 只含花粉管細胞核和生殖細胞核 精子在花粉管中形成 三核花粉粒 有些植物的花粉 在成熟前 生殖細胞進行一次有絲分裂 形成兩個精子 這樣的花粉在成熟時 含有一個營養(yǎng)核和兩個精子 三 被子植物胚囊的形成 1 雌蕊的組成 柱頭 花柱 子房 2 子房的結(jié)構(gòu) 被子植物子房的結(jié)構(gòu) 胚珠的結(jié)構(gòu) 花粉管 精子 卵細胞 極核 子房壁 珠被 珠孔 胚珠的外層是珠被 里面是胚囊 胚囊是由胚珠內(nèi)的胚囊母細胞 大孢子母細胞 發(fā)育而成 胚囊母細胞經(jīng)過減數(shù)分裂 產(chǎn)生四個細胞 稱為大孢子 每個大孢子內(nèi)的染色體數(shù)目都比胚囊母細胞減少一半 這4個細胞排成一行 其中靠近珠孔的3個細胞退化 最里面的發(fā)育為胚囊細胞 胚囊細胞的核連續(xù)進行三次有絲分裂 但是每次核分裂后 并不接著進行細胞質(zhì)分裂 就形成了8個細胞核的胚囊 開始 這8個細胞核分別位于胚囊的兩端 每端4個 接著 每端各有1個細胞核移到胚囊的中央 這就是極核 所以再胚囊中的8個核中遺傳物質(zhì)是一樣的 3 卵細胞的形成 以后靠近珠孔端的3個細胞核發(fā)育成3個細胞 其中最大的一個是卵細胞 其余的是2個助細胞 另一端3個細胞核也發(fā)育成3個細胞 成為反足細胞 花粉落到雌蕊柱頭上以后 在柱頭上黏液的刺激下 花粉開始萌發(fā)并形成花粉管 花粉管沿著花柱向胚珠方向生長 到達胚珠后從珠孔繞過卵細胞進入胚囊 到達胚囊中卵細胞和極核之間 這時花粉管的前端破裂 兩個精子釋放出來 其中一個精子與兩個極核結(jié)合形成受精極核 另一個精子與卵細胞結(jié)合形成受精卵 這是被子植物特有的雙受精現(xiàn)象 4 受精過程 5 發(fā)育結(jié)果 四 產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑 五 影響花藥培養(yǎng)的因素 1 材料的選擇 接種的花藥時期 不同植物的誘導(dǎo)成功率很不相同 就同一種植物來說親本的生理狀況對誘導(dǎo)成功率也有直接影響 選擇合適的花粉發(fā)育時期是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素 因為并不是任何時期的花粉都可以經(jīng)過培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體 花粉發(fā)育的過程中 只有某一個時期對離體刺激敏感 選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵 選材 一般來說 在單核期 細胞核由中央移向細胞一側(cè)的時期 花藥培養(yǎng)的成功率最高 即 最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期為單核靠邊期 選擇單核期以前的花藥接種 質(zhì)地幼嫩 極易破碎 選擇單核期之后的花藥接種 花瓣已有些松動 又給材料的消毒帶來困難 且難以挑選到單核期的花藥 花藥培養(yǎng)時期的選擇 其它時期選擇的缺點 花藥培養(yǎng)時間 為了挑選到單核期的花藥 通常選擇完全未開放的花蕾 盛開的或略微開放的花 都不宜選作實驗材料 選擇完全未開放花蕾的原因 完全未開放的花蕾 可挑選到單核期的花藥 菌少 易消毒 單核期花藥的挑選 一般月季的花藥培養(yǎng)時間選在五月初到五月的中旬 即月季的初花期 初花期的花蕾營養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會比較好 可能提高花粉的誘導(dǎo)成功率 月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是 A 四分體時期B 單核居中期C 單核靠邊期D 二核或三核花粉粒 C 2 培養(yǎng)基 花藥培養(yǎng)基所采用的培養(yǎng)基可能因植物的不同而有所變化小麥中為N6 馬鈴薯 月季中為MS 油菜中為B5培養(yǎng)基 3 其他因素親本植株的生長條件 材料的低溫預(yù)處理以及接種的密度等對誘導(dǎo)成功都有一定的影響 六 實驗操作 一 材料的選取 某些植物的花粉細胞核不易著色 需采用焙花青 鉻礬法 這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色 最常用的方法有醋酸洋紅法 1 方法 醋酸洋紅法染色機理 醋酸洋紅為堿性染色劑 而花粉細胞內(nèi)有染色體 染色體主要成分是DNA和蛋白質(zhì) 易被堿性染料著色染成紅色 將體積分數(shù)45 的醋酸100ml煮沸 緩緩加入1g洋紅 在加熱回流8h 冷卻至50 過濾即可 醋酸洋紅的配置 2 醋酸洋紅法 將花藥放在載玻片上 加一滴質(zhì)量分數(shù)1 的醋酸洋紅 用鑷柄將花藥搗碎 蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查 染色操作 3 焙花青 鉻釩法 將無水酒精與冰醋酸按體積比為3 1的比例混勻 卡諾氏固定液的配制方法 花藥應(yīng)該在卡諾氏固定液中固定20min 然后取出放在載玻片上 加焙花青 鉻釩溶液染色 蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查 將5g鉻明礬 K2SO4Cr2 SO4 24H2O 加入90ml蒸餾水中 溶解后加入0 1g焙花青 混勻并加熱至沸騰 煮沸5分鐘后冷卻至室溫 過濾 加蒸餾水定容至100ml 焙花青 鉻釩溶液的配制方法 染色操作 二 材料的消毒 1 酒精處理 花蕾用體積分數(shù)為70 的酒精浸泡30秒 立即取出 無菌水清洗 無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分 2 消毒液處理 三 接種和培養(yǎng) 放入質(zhì)量分數(shù)為0 1 的氯化汞溶液中2 4分鐘 也可質(zhì)量分數(shù)為1 的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液 無菌水沖洗3 5次用于培養(yǎng)花藥 實際上多數(shù)未熟 由于它的外面有花萼 花瓣或穎片保護 通常處于無菌狀態(tài) 所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可 在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥 要徹底去除花絲 因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成 立即將花藥接種于培養(yǎng)基上 通常每瓶接種花藥7 10個 1 剝?nèi)』ㄋ?勿損傷花藥 以免誘導(dǎo)出非花粉愈傷組織 2 接種 注意 培養(yǎng)條件 溫度控制在25 左右 不需要光照 幼小植株形成后才需要光照 3 培養(yǎng) 培養(yǎng) 一般經(jīng)過20 30天培養(yǎng)后 會發(fā)現(xiàn)花藥開裂 長出愈傷組織或釋放出胚狀體長出愈傷組織則將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上 以便進一步分化出再生植株 注意 如果花藥開裂釋放出胚狀體 則一個花藥內(nèi)就會