消毒劑消毒效果的驗證報告

消毒劑消毒效果的驗證 組長 組員 編號 201412151135 版次 2014 年 第 1 版 精品文檔 2歡迎下載 目錄目錄 1 1 概述 概述 3 3 1 1 消毒劑 3 1 2 消毒劑使用說明 3 2 2 驗證目的 驗證目的 3 3 3 3 驗證內容 驗證內容 4 4 4 4 驗證組織 驗證組織 4 4 4 1 驗證小組 4 4 2 驗證委員會 4 5 5 驗證實施步驟 驗證實施步驟 5 5 5 1 驗證前準備 5 5 2 驗證所需文件資料 5 5 3 懸液法定量殺滅試驗 6 5 4 對裸手消毒效果試驗 7 5 5 消毒劑對佩戴手套后的消毒效果驗證 9 5 6 消毒劑對物體表面消毒效果驗證 11 5 7 消毒劑消毒效果驗證結論 15 6 6 驗證主要依據 驗證主要依據 1515 7 7 驗證合格標準 驗證合格標準 1515 7 1 判斷標準 15 7 2 現場考察試驗合格標準 15 8 8 再驗證周期再驗證周期 1515 附錄附錄 1616 附錄一 驗證方案會審記錄 16 附錄二 驗證方案修改申請及批準書 17 附錄三 漏項和偏差處理記錄 18 附錄四 懸液法定量殺滅試驗記錄 19 附錄五 消毒劑對佩戴手套后人員手現場試驗記錄 22 精品文檔 3歡迎下載 1 1 概述 概述 1 1 消毒劑 消毒劑的作用原理 破壞細胞膜類 阻斷細胞食物攝取和廢物排泄 鈍化關鍵酶 以 下是幾種常用的消毒劑 1 新潔爾滅 苯扎溴銨 是一種常用的季銨鹽類消毒劑 在濃度較低時即可有抑菌 的作用 當濃度較高時 可以殺滅多種細菌繁殖體和部分的病毒 但是不能殺滅細菌芽孢 屬于低效消毒劑 2 75 乙醇 適用于一般物體表面消毒以及手和皮膚的消毒 它無法殺滅細菌芽孢 和病毒 3 優(yōu)潔 屬于長效 強效 廣譜殺菌劑 是一種新型消毒劑 其有效成分為復合季 銨鹽和六亞甲基四胺 可有效快速地殺滅細菌繁殖體 芽孢 真菌和部分病毒等 各種微 生物對其均無抗藥性 抑菌時間較長 可用于一般物體表面消毒 穩(wěn)定性好 無腐蝕性 無毒無害 并且由于殺菌時不受蛋白質及有機物的干擾 故使用衰減周期長 可循環(huán)使用 相對使用成本低 本次驗證以優(yōu)潔消毒劑的殺滅效果為主 同時也可根據此驗證方案對 75 乙醇 新潔 爾滅等消毒劑的殺滅效果進行評價 1 2 消毒劑使用說明 對于不同的消毒對象 應使用不同的消毒劑 并制訂消毒程序 消毒程序中應明確規(guī) 定 1 消毒劑的濃度及配制方法 2 消毒劑使用的條件 3 消毒使用的設備 設施 4 消毒操作的詳細步驟 5 消毒周期 5 消毒效果的監(jiān)測方法 制訂的消毒程序的消毒效果應經過驗證后 才能批準使用 本驗證具體規(guī)定了評價消毒劑消毒效力的生物學檢測方法及其效果評價方法 2 2 驗證目的 驗證目的 藥品在生產過程中會遭到來自微生物的污染 因此必須要采取一定措施使微生物污染 處于受控狀態(tài)或者完全被消除 這就需要對消毒劑消毒效果進行驗證以確定相應的方案來 處理這些問題 在對消毒劑進行消毒效果驗證的過程中 主要是要用特定的微生物與消毒 劑在規(guī)定的使用濃度下接觸規(guī)定的時間后 對微生物進行培養(yǎng)計數 考察該消毒劑的消毒 效果 確定消毒劑消毒后的最長有效時間 并對消毒劑對微生物的殺滅效果進行評價 確認潔凈區(qū)按照規(guī)定的清潔 消毒程序進行清潔消毒后 能夠達到防止交叉污染的目 精品文檔 4歡迎下載 的 并在消毒有效期內能確保達到生產工藝所需要的效果 本次驗證以優(yōu)潔消毒劑的殺滅效果為主 同時也可根據此驗證方案對75 乙醇 新潔 爾滅等消毒劑的殺滅效果進行評價 3 3 驗證內容 驗證內容 消毒劑消毒效果驗證包括兩項考察 實驗室考察和現場考察 實驗室考察通常以懸液 定量法為主 且試驗須重復3次 而現場考察可用來評估消毒劑對相應設施的實際消毒效果 在消毒劑消毒效果試驗中 消毒方法和消毒對象有很多 常用的方法有 噴灑法 浸 泡法 擦拭法等 常見的對象有 皮膚 潔凈區(qū)的地面 墻面 設備表面等 此次試驗我 們采用的消毒方法為噴灑法 消毒對象為人員裸手皮膚 人員佩戴無菌手套后的手套表面 和物體表面 根據消毒對象所制定相應的試驗方案有 懸液法定量殺滅試驗 消毒劑對裸手消毒現 場試驗 載體噴霧定量殺菌試驗 消毒劑對佩戴手套后的手消毒現場試驗以及消毒劑對物 體表面現場鑒定試驗 通過以上幾種試驗來對消毒劑消毒的效果進行驗證 4 4 驗證組織 驗證組織 4 1 驗證小組 表表 4 14 1 驗證小組及職責驗證小組及職責 人員人員部部 門門職職 務務職職 責責 組 長 質保部部門負責人 1 負責成立驗證小組 明確各驗證成員職責 2 負責組織起草驗證方案 驗證記錄和驗證報告 3 負責驗證方案 驗證記錄和驗證報告的審核工作 驗證管理員 1 負責起草驗證方案 2 負責對試驗結果進行統計分析 3 負責起草驗證報告質保部 質保員 1 負責現場取樣 2 負責驗證過程在線監(jiān)督 質檢部部門經理 1 負責組織對樣品的檢驗 2 負責驗證所需試劑 試液等的準備 質檢部質檢員 1 負責樣品的檢驗 2 負責檢驗數據的收集 整理 部門經理負責組織現場操作 確保驗證按進度進行 衛(wèi)生員負責消毒液的配制和發(fā)放 生產部 各工序 操作人員 1 負責潔凈廠房的清潔 2 負責按消毒程序進行消毒 組 員 設備部部門經理 1 負責儀器 儀表 量具的校正 2 負責驗證所用儀器 設備的安裝 調試 并做好相應的記錄 3 負責純化水的供給 精品文檔 5歡迎下載 4 2 驗證委員會 4 2 1人員組成 由企業(yè)質量副總 生產副總及生產部 質量保證部 質量檢驗部 設備動 力部經理或主管組成 4 2 2職責 負責驗證方案的審批 負責驗證的協調工作 以保證驗證方案的順利實施 負責驗證數據及結果的審核 負責驗證報告的審核 負責確定該項驗證的再驗證周期 負責驗證證書的發(fā)放 5 5 驗證實施步驟 驗證實施步驟 5 1 驗證前準備 在進行消毒劑消毒效果驗證前 潔凈廠房空氣凈化系統應經驗證合格并正常運行 設 備動力部應提供潔凈廠房空氣凈化系統的驗證報告 空氣凈化系統操作程序 與驗證相關 的各種設備 儀器均需通過相應驗證 所需儀表 計量器具均需校驗合格并具備校驗證書 5 2 驗證所需文件資料 表表5 15 1 驗證所需的文件資料及存放處驗證所需的文件資料及存放處 資料名稱資料名稱編號編號存放處存放處 活菌數檢測操作規(guī)程 ZL 03 066 GMP 辦公室 菌落計數操作規(guī)程 ZL 03 070 GMP 辦公室 培養(yǎng)基配制操作規(guī)程 ZL 03 073 GMP 辦公室 培養(yǎng)基配制 使用管理規(guī)程 ZL 03 110 GMP 辦公室 消毒劑配制操作規(guī)程 WS 04 029 GMP 辦公室 消毒劑的使用操作規(guī)程 WS 04 030 GMP 辦公室 致病菌陽性菌株傳代操作規(guī)程 ZL 03 075 GMP 辦公室 實驗器具清洗操作規(guī)程 ZL 03 087 GMP 辦公室 實驗器具滅菌 消毒及使用操作規(guī)程 ZL 03 088 GMP 辦公室 進出微生物限度實驗室操作規(guī)程 ZL 03 259 GMP 辦公室 CHK 型顯微鏡操作規(guī)程 SB 03 153 GMP 辦公室 厭氧罐操作規(guī)程 SB 03 156 GMP 辦公室 MS1 型振蕩器操作規(guī)程 SB 03 381 GMP 辦公室 BL610 型電子天平操作規(guī)程 SB 03 324 GMP 辦公室 SKP 02B 型電熱恒溫箱操作規(guī)程 SB 03 375 GMP 辦公室 SKP 02B 型電熱恒溫箱清潔規(guī)程 SB 03 376 GMP 辦公室 微生物實驗室清場操作規(guī)程 ZL 03 064 GMP 辦公室 破傷風桿菌檢測操作規(guī)程 ZL 03 220 GMP 辦公室 DELTA 320PH 計操作規(guī)程 SB 03 234 GMP 辦公室 精品文檔 6歡迎下載 致病菌陽性菌管理規(guī)程 ZL 03 112 GMP 辦公室 微波爐的操作規(guī)程 SB 03 177 GMP 辦公室 潔凈區(qū)情場操作規(guī)程 ZL 03 112 GMP 辦公室 設備清潔操作規(guī)程 SB 03 187 GMP 辦公室 5 3 懸液法定量殺滅試驗 5 3 1 試驗所需要用的試劑 中和劑 0 1M硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液 0 9 N S 活菌計數用培養(yǎng)基 TSA培養(yǎng)基 稀釋液 磷酸鹽緩沖液 PBS 0 03mol L 消毒劑配制用水 純化水 有機干擾物質 5 3 2 試驗所需要用的儀器 移液器 電動混勻器 計時器 生化培養(yǎng)箱 5 3 3 試驗所需要用的菌種 可根據 消毒技術規(guī)范 2008年版 4 細菌定量殺滅試驗 中指導 本次試驗選擇金 黃色葡萄球菌 大腸埃希菌 銅綠假單胞菌 白色念珠菌 黑曲霉 再增加車間常見的菌 洋蔥伯克霍爾德菌 5 3 4 試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間 根據優(yōu)潔消毒液說明書建議濃度為1 3 作用時間為1 2min 但根據廠家驗證報告 0 1 及0 2 的濃度作用5min和15min也能符合規(guī)定 因此本次試驗濃度選擇0 2 作用時間 選擇2 5min 5min以及7 5min的條件進行確認 又因車間裸手消毒作用時間可能只有30s 故本次試驗同時對0 2 消毒劑作用15s 30s以及45s的條件進行確認 5 3 5 試驗所需要用到的場所 微生物實驗室陽性間 5 3 6 懸液定量殺菌試驗操作程序 1 菌懸液 濃度為1 108cfu ml 5 108cfu ml 2 消毒液的配制 用純化水按體積比配制濃度為0 2 的消毒液500ml 3 磷酸鹽緩沖液的配制 磷酸鹽緩沖液 PBS 0 03mol L 稱取無水磷酸氫二鈉 2 83g 磷酸二氫鉀1 36g加入到1000ml蒸餾水中 待完全溶解后 調PH至7 2 7 4 滅菌后 使用 4 有機干擾物質的配制 按30g牛血清白蛋白中加入1000ml蒸餾水的比例配制約 100ml 溶解后用0 45um的無菌濾膜進行過濾除菌后使用 未用完的可于2 8 冰箱中保存 5 試驗過程 以濃度為0 2 優(yōu)潔消毒劑對金黃色葡萄球菌作用2 5min為例 試驗組 取無菌大試管加入0 5ml金黃色葡萄球菌菌懸液 再加入0 5ml的有機干擾物 質 分別用無菌吸管吸取0 2 的優(yōu)潔消毒液4 0ml 加入試管中 迅速混勻并立即計時 待 金黃色葡萄球菌與0 2 的優(yōu)潔消毒液相互作用2 5min時 吸取0 5ml試驗菌與消毒劑的混合 精品文檔 7歡迎下載 液 加于4 5ml經滅菌的0 1M硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液中 混勻 金黃色葡萄球菌與消毒 劑混合液經硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液作用10min后 吸取1 0ml樣液 按活菌培養(yǎng)計數測定 方法測定存活菌數 每管樣液接種2個平皿即可 如果菌液濃度較高時 可進行10倍系列稀 釋后 在進行活菌培養(yǎng)計數 作為試驗組 其計數結果為CX 陽性對照組 用4 0ml磷酸鹽緩沖液代替4 0ml0 2 的優(yōu)潔消毒液與0 5ml金黃色葡萄球 菌菌懸液 0 5ml有機干擾物質混合2 5min后 取0 5ml混合液與4 5ml0 1M硫代硫酸鈉 生 理鹽水溶液反應 作用10min后 計數方法同試驗組 計數結果為C0 陰性對照組 吸取此次試驗用的純化水0 5ml 0 5ml有機干擾物質 4 0ml磷酸鹽緩沖 液混勻 混勻后取0 5ml混合液與4 5ml0 1M硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液作用10min后 吸取 1 0ml混合液 按活菌培養(yǎng)計數測定方法測定存活菌數 作為陰性對照 培養(yǎng) 所有用細菌試驗的樣品均放入30 35 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 培養(yǎng)48小時觀察結果 用 真菌試驗的樣品放入23 28 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 培養(yǎng)72小時觀察結果 5 3 7 試驗要求 作用于不同試驗菌不同作用時間后的消毒效果試驗均須進行3次 每次進行時應注意所 用的試劑等物品均應重新配制 防止系統誤差的發(fā)生 5 3 8 活菌計數結果應換算為對數值 N 按計算公式殺滅對數值KL 陽性對照組平均濃度對數值 N0 試驗組活菌濃度對數值 NX 計算殺滅對數值的時候 取小數點后兩位值 可以進行數字修約 如果消毒試驗組 消毒處理后平均生產菌落數小于等于1時 其殺滅對數值 即大于等于試驗前對照組平均活 菌濃度的對數值 5 3 9 判斷標準 陰性對照應無菌生長 細菌各次試驗的殺滅對數值均應 5 00 可判斷為對細菌消毒合 格 真菌各次試驗的殺滅對數值為 4 00 可判定該產品對真菌污染物消毒合格 5 3 10 試驗記錄 附件四附件四 懸液法定量殺滅試驗記錄懸液法定量殺滅試驗記錄 第一次第一次 表表5 25 2 第二次第二次 表表5 35 3 第三次第三次 表表5 45 4 5 3 11 試驗結 作用于不同試驗菌不同作用時間后的消毒效果試驗進行了3次 且每次試驗結果均符合 標準 所以判定0 2 優(yōu)潔消毒劑通過懸液定量殺滅試驗 對細菌 真菌消毒合格 5 4 對裸手消毒效果試驗 5 4 1 試驗所需要用的試劑 Rodac 碟培養(yǎng)基平板 5 4 2 試驗所需要用的儀器 計時器 生化培養(yǎng)箱 5 4 3 試驗所需要用的消毒液 濃度為0 2 的優(yōu)潔消毒劑作用0 5min 精品文檔 8歡迎下載 5 4 4 試驗所需要用到的場所 抗腫瘤粉針車間 5 4 5 試驗的操作程序 從車間抽取6名生產人員 均按照標準洗手操作規(guī)程進行洗手 將手烘干 用0 2 的優(yōu) 潔消毒劑對雙手進行噴灑消毒 自然晾干 于消毒后的0 5min將一手五指尖在Rodac平板上 按壓取樣 于30 35 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)三天 觀察最終結果 5 4 6 試驗的判斷標準 在消毒劑作用0 5min后6份樣品的菌落數均須 5cfu 皿 可判為合格 本次試驗應重 復進行三次 用來判斷該方法是否穩(wěn)定 5 4 7 試驗記錄 表表5 55 5 對裸手消毒效果試驗第一次試驗記錄對裸手消毒效果試驗第一次試驗記錄 培養(yǎng)時間 培養(yǎng)時間 cfu cfu 皿 皿 試驗人員試驗人員 第一天第一天第二天第二天第三天第三天 可接受標準可接受標準 cfu cfu 皿 皿 結果判斷結果判斷 8001029 5 不合格 800203939 5 不合格 8003013 5 合格 800404040 5 不合格 800501614 5 不合格 8006024 5 合格 QA 左手 0000 合格 QA 右手 0000 合格 表表5 65 6 對裸手消毒效果試驗第二次試驗記錄對裸手消毒效果試驗第二次試驗記錄 培養(yǎng)時間 培養(yǎng)時間 cfu cfu 皿 皿 試驗人員試驗人員 第一天第一天第二天第二天第三天第三天 可接受標準可接受標準 cfu cfu 皿 皿 結果判斷結果判斷 800103331 5 不合格 8002086 5 不合格 80030100105 5 不合格 800405551 5 不合格 800503336 5 不合格 8006043 5 合格 QA 左手 0000 合格 QA 右手 0000 合格 表表5 75 7 對裸手消毒效果試驗第三次試驗記錄對裸手消毒效果試驗第三次試驗記錄 培養(yǎng)時間 培養(yǎng)時間 cfu cfu 皿 皿 試驗人員試驗人員 第一天第一天第二天第二天第三天第三天 可接受標準可接受標準 cfu cfu 皿 皿 結果判斷結果判斷 80010107105 5 不合格 800206060 5 不合格 8003045 5 合格 800406361 5 不合格 精品文檔 9歡迎下載 800503636 5 不合格 800602832 5 不合格 QA 左手 0000 合格 QA 右手 0000 合格 5 4 8 試驗結論 對車間人員進行了三次 每次6名 裸手消毒試驗 試驗結果顯示基本不符合標準 因 此判定0 2 濃度優(yōu)潔消毒劑對人員裸手消毒0 5min試驗不合格 5 5 消毒劑對佩戴手套后的消毒效果驗證 5 5 1 無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗 1 試驗所需要用的試劑 中和劑 0 1M 硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液 0 9 N S 活菌計數用培養(yǎng)基 TSA 培養(yǎng)基 稀釋液 磷酸鹽緩沖液 PBS0 03mol L 消毒劑配制用水 純化水 2 試驗所需要用的儀器 刻度吸管 數字可調移液器 電動混勻器 計時器 培養(yǎng)箱 無菌手套及無菌剪刀 3 試驗所需要用的菌種 本次試驗主要是驗證該消毒劑對手部微生物的消毒效果 故選擇金黃色葡萄球菌 大 腸埃希菌 白色念珠菌作為試驗菌 4 試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間 濃度為0 2 優(yōu)潔消毒劑作用0 5min 5 試驗所需要用到的場所 微生物實驗室陽性間 6 試驗的操作步驟 菌懸液 濃度為1 108cfu ml 5 108cfu ml 消毒液 用純化水按體積比配制濃度為0 2 的消毒液500ml 稀釋液 磷酸鹽緩沖液 PBS0 03mol L 試驗組 取無菌剪刀從無菌手套上剪取三個手指樣品 大小為10mm 10mm以三角形陣列 均勻排布于一塊未沾有任何消毒劑的無菌平皿內 逐片滴加10d的金黃色葡萄球菌 必要時 用無菌接種環(huán)涂布均勻 使制備后樣品上的菌片濃度在5 105cfu 片 5 106cfu 片 用 0 2 的優(yōu)潔消毒劑對制備好含有金黃色葡萄球菌的樣本進行均勻噴霧 噴霧的距離約為 10cm 以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數量一致 噴霧量以不使樣本濕透 流液為度 計時 待金黃色葡萄球菌與消毒劑相互作用至0 5min 取出樣本1片 放入一含有 5 0ml0 1M硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液的無菌試管中 將試管用電動混勻器混合20s 使菌片 上的細菌被洗脫進入0 1M硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液中 吸取1 0ml上述洗液 按活菌培養(yǎng) 計數法測定存活菌數 每管接種2個平皿 精品文檔 10歡迎下載 陽性對照組 取無菌剪刀從無菌手套上剪取3個大小為10mm 10mm的手指樣品 均勻排 布于一塊未沾有任何消毒劑的無菌平皿內 用制備好的符合菌液濃度的金黃色葡萄球菌滴 加進去 必要時用涂布棒涂布均勻 用磷酸鹽緩沖液代替0 2 的優(yōu)潔消毒劑對制備好的金 黃色葡萄球菌的樣本進行均勻噴霧 噴霧的距離約為10cm 以盡量使噴到樣本上的霧粒大 小和數量一致 噴霧量以不使樣本濕透 流液為度 計時 待金黃色葡萄球菌與磷酸鹽緩 沖液相互作用至0 5min 取出樣本1片 放入一含有5 0ml0 1M硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液的 無菌試管中 將試管用電動混勻器混合20s 使菌片上細菌被洗脫進入0 1M硫代硫酸鈉 生 理鹽水溶液中 吸取1 0ml上述洗液 按活菌培養(yǎng)計數法測定存活菌數 每管接種2個平皿 陰性對照組 取無菌剪刀從同批無菌手套上剪取三個手指樣品 大小為10mm 10mm均 勻排布于一塊未沾有任何消毒劑的無菌平皿內用 用純化水代替0 2 的優(yōu)潔消毒劑對手套 樣本進行均勻噴霧 噴霧的距離約為10cm 以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數量一致 噴霧量以不使樣本濕透 流液為度 計時 0 5min后取出樣本一片 放入一含5 0ml0 1M硫 代硫酸鈉 生理鹽水溶液的無菌試管中 將試管用電動混勻器混合20s 吸取1 0ml上述洗液 按活菌培養(yǎng)計數方法測定存活菌數 每管接種2個平皿 作為陰性對照 培養(yǎng) 所有細菌試驗用樣本均在30 35 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 培養(yǎng)至48h 觀察最終結果 真菌試驗用樣本在23 28 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 培養(yǎng)至72h 觀察最終結果 7 試驗要求及計算 試驗重復3次 計算各組的活菌數 cfu 片 并換算為對數值 N 然后按計算公式 殺滅對數值KL 陽性對照組平均濃度的對數值 N0 試驗組活菌濃度的對數值 NX 8 試驗的判斷標準 陰性對照組應無菌生長 消毒劑作用于各菌的不同作用時間的殺滅對數值 3 00 即 判定結果合格 9 試驗的記錄 表表5 85 8 無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第一次試驗記錄無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第一次試驗記錄 驗證菌種驗證菌種 C C0 0 cfu cfu 片片 N N0 0 C CX X cfu cfu 片片 N NX XKL NKL N0 0 N NX X 接受標準接受標準結果判斷結果判斷 金黃色葡萄球菌 5 8 1055 76005 76 3 00 合格 大腸埃希菌 1 1 1066 04221 344 70 3 00 合格 白色念珠菌 5 4 1044 73004 73 3 00 合格 表表5 95 9 無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第二次試驗記錄無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第二次試驗記錄 驗證菌種驗證菌種 C C0 0 cfu cfu 片片 N N0 0 C CX X cfu cfu 片片 N NX XKL NKL N0 0 N NX X 接受標準接受標準結果判斷結果判斷 金黃色葡萄球菌 5 8 1055 76005 76 3 00 合格 大腸埃希菌 1 1 1066 04111 045 00 3 00 合格 白色念珠菌 5 4 1044 73004 73 3 00 合格 表表5 105 10 無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第三次試驗記錄無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗第三次試驗記錄 精品文檔 11歡迎下載 驗證菌種驗證菌種 C C0 0 cfu cfu 片片 N N0 0 C CX X cfu cfu 片片 N NX XKL NKL N0 0 N NX X 接受標準接受標準結果判斷結果判斷 金黃色葡萄球菌 6 2 1044 79004 79 3 00 合格 大腸埃希菌 2 0 1055 30121 084 22 3 00 合格 白色念珠菌 2 7 1044 43004 43 3 00 合格 10 試驗的結論 濃度為0 2 優(yōu)潔消毒劑 三次對無菌手套載體噴霧定量殺菌試驗均符合標準 判定手 套載體噴霧定量殺菌試驗合格 5 5 2 消毒劑對佩戴手套后人員手現場消毒試驗 1 試驗所需要用的試劑 Rodac 碟培養(yǎng)基平板 2 試驗所需要用的儀器 計時器 生化培養(yǎng)箱 3 試驗所需要用的消毒液的濃度及取樣時間 取5 5 1中符合規(guī)定的消毒劑濃度對人員手套消毒后0 5min 15min 35min分別取樣 4 試驗所需要用到的場所 抗腫瘤分針車間或普通分針車間 5 試驗的操作步驟 從車間抽取12名生產人員 分別在A級區(qū)安排6名 B級區(qū)安排6名 各自按照標準洗手 操作規(guī)程進行洗手 將手烘干 用試驗濃度的優(yōu)潔消毒劑對雙手進行噴灑消毒 自然晾干 分別于消毒后0 5min 15min 35min將五指手指尖在Rodac平板上按壓取樣 取樣后于30 35 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)三天 觀察最終結果 0 5min取樣后生產人員對雙手重新進行消毒 之 后應盡量模擬生產時的動作進行手部活動 15min取樣后無需重新消毒 6 試驗的判斷標準 在消毒劑作用不同時間后的菌落數的合格標準見下表5 11 每個時間段的6份樣品必須 全部符合標準 才可判斷合格 本次試驗應重復進行三次 用來判斷該方法是否穩(wěn)定 表表5 115 11 菌落數的合格標準菌落數的合格標準 潔凈度級別潔凈度級別5 5 指手套指手套 A 104cfu ml 涂抹于不銹鋼設備表面 地面 墻面及呼吸袋 選擇回收率較高的載體作為物體表面消毒效果試驗室部分的試驗載體 判斷標準 回收菌 液濃度 103cfu ml 1 試驗所需要用的試劑 中和劑 0 1M硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液 0 9 N S 活菌計數用培養(yǎng)基 TSA培養(yǎng)基 消毒劑配制用水 純化水 2 試驗所需要用的儀器 刻度吸管 移液器 電動混勻器 計時器 培養(yǎng)箱 規(guī)格板 用不銹鋼材料制備 中 央留一5 0cm 5 0cm的空格作為采樣部位 無菌棉簽 無菌接種環(huán) 3 試驗所需要用的菌種 本次試驗主要是驗證該消毒劑對物體表面微生物的消毒效果 故選擇金黃色葡萄球菌 大腸埃希菌作為試驗菌 4 試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間 0 2 的優(yōu)潔消毒液作用30s 5 試驗所需要用到的場所 微生物實驗室陽性間 6 試驗的操作步驟 以濃度為0 2 的消毒劑對金黃色葡萄球菌作用30s為例 菌懸液 濃度為5 105cfu ml 5 106cfu ml 試驗組 取大小合適的無菌呼吸袋作為試驗樣本 將無菌規(guī)格板按壓在樣本上 用無 菌棉簽沾以菌懸液均勻涂抹被試驗表面的6區(qū)塊 各區(qū)塊25cm2 用0 2 的消毒劑對三個區(qū) 塊表面進行噴霧消毒 噴霧的距離約為10cm 以盡量使噴到樣本上的霧粒大小和數量一致 消毒后 將無菌棉簽在5ml的中和劑試管中沾濕 分別對3個消毒區(qū)塊進行涂抹采樣 每區(qū) 塊橫豎往返各8次 采樣后以無菌操作方式將棉簽剪入原中和劑試管中 電動混勻器上混勻 20s 吸取1 0ml上述洗液 按活菌培養(yǎng)計數方法測定存活菌數 每管接種2個平皿 作為試 驗組 必要時進行稀釋 陽性對照組 從6個區(qū)塊中選取其他3個區(qū)塊 用磷酸鹽緩沖液代替消毒劑對三個區(qū)塊 表面同法操作 之后將無菌棉簽在5ml的中和劑試管中沾濕 分別對3個區(qū)塊進行涂抹采樣 每區(qū)塊橫豎往返各8次 采樣后以無菌操作方式將棉簽剪入原中和劑中 電動混勻器上混勻 20s 吸取1 0ml上述洗液 按活菌培養(yǎng)計數法測定存活菌數 每管接種2個平皿 作為陽性 對照組 必要時進行稀釋 陰性對照組 用一只棉簽 分別蘸取同批純化水 以無菌方式將棉簽采樣端剪入0 1M 硫代硫酸鈉 生理鹽水溶液中 在混勻器上震蕩20s 做適當稀釋后 按活菌培養(yǎng)計數方法 測定存活菌數 每管接種2個平皿 作為陰性對照 精品文檔 13歡迎下載 培養(yǎng) 所有試驗樣本均在30 35 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 培養(yǎng)48h觀察最終結果 7 試驗要求及計算 試驗須重復三次 計算各組的活菌數 cfu 片 并換算為對數值 N 然后按計算公 式殺滅對數值KL 對照組平均濃度的對數值 N0 試驗組活菌濃度對數值 NX 8 試驗的判斷標準 陰性對照組應無菌生長 陽性對照組菌數符合要求 所有樣本的殺滅對數值均 3 00 即判定結果合格 9 試驗的記錄 表表5 145 14 消毒劑對物體表面模擬現場鑒定試驗第一次試驗記錄消毒劑對物體表面模擬現場鑒定試驗第一次試驗記錄 驗證菌種驗證菌種 C C0 0 cfu cfu 片片 N N0 0 C CX X cfu cfu 片片 N NX XKL NKL N0 0 N NX X 可接受標準可接受標準結果判斷結果判斷 金黃色葡萄球菌 8 1 105 5 9 1 121 084 83 3 00 合格 大腸埃希菌 8 4 105 5 9 2 005 92 3 00 合格 表表5 155 15 消毒劑對物體表面模擬現場鑒定試驗第二次試驗記錄消毒劑對物體表面模擬現場鑒定試驗第二次試驗記錄 驗證菌種驗證菌種 C C0 0 cfu cfu 片片 N N0 0 C CX X cfu cfu 片片 N NX XKL NKL N0 0 N NX X 可接受標準可接受標準結果判斷結果判斷 金黃色葡萄球菌 8 2 105 5 9 1 105 91 3 00 合格 大腸埃希菌 7 9 105 5 8 8 451 654 23 3 00 合格 表表5 165 16 消毒劑對物體表面模擬現場鑒定試驗第三次試驗記錄消毒劑對物體表面模擬現場鑒定試驗第三次試驗記錄 驗證菌種驗證菌種 C C0 0 cfu cfu 片片 N N0 0 C CX X cfu cfu 片片 N NX XKL NKL N0 0 N NX X 可接受標準可接受標準結果判斷結果判斷 金黃色葡萄球菌 3 2 105 5 5 1 005 51 3 00 合格 大腸埃希菌 4 8 105 5 6 8 331 524 16 3 00 合格 10 試驗結論 濃度為0 2 優(yōu)潔消毒劑三次物體表面模擬現場鑒定試驗 作用0 5min 均符合標準 故判定合格 5 6 2 消毒劑對物體表面消毒現場鑒定試驗 1 試驗所需要用的試劑 Rodac 碟培養(yǎng)基平板 無菌生理鹽水 TSA培養(yǎng)基 純化水 2 試驗所需要用的儀器 計時器 培養(yǎng)箱 3 試驗所需要用的消毒液的濃度及作用時間 精品文檔 14歡迎下載 0 2 的優(yōu)潔消毒劑作用0 5min 4 試驗所需要用到的場所 抗腫瘤粉針車間 5 試驗操作的步驟 以彩鋼板為例 選擇抗腫瘤粉針車間的潔凈區(qū)表面的彩鋼板 選擇不易清潔的部位 取一塊潔凈區(qū)醫(yī) 用無菌抹布 用試驗濃度的消毒劑 對其表面進行噴灑消毒 按車間消毒規(guī)程進行 消毒 后 使用Rodac碟進行取樣 對于消毒后的不同時間的采樣 應于首次采樣的部位比較接近 培養(yǎng) 所有試驗樣本均在30 35 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 培養(yǎng)三天觀察最終結果 6 試驗的判斷標準 不同級別區(qū)域內的不同消毒對象 每次采樣三個點 本次試驗重復進行3次 結果與下 表進行對比 見表5 11 表表5 175 17 菌落數的合格標準菌落數的合格標準 潔凈級別潔凈級別表面菌落數 非地面 表面菌落數 非地面 表面菌落數 地面 表面菌落數 地面 設備表面標準設備表面標準 A 級 3cfu 皿 5cfu 皿 1cfu 皿 B 級 5 cfu 皿 5 cfu 皿 5 cfu 皿 C 級 25 cfu 皿 25 cfu 皿 25 cfu 皿 D 級 50 cfu 皿 50 cfu 皿 50 cfu 皿 7 試驗結果的記錄 表表5 185 18 消毒劑對表面消毒現場鑒定試驗第一次試驗記錄消毒劑對表面消毒現場鑒定試驗第一次試驗記錄 培養(yǎng)時間 采樣區(qū)域及象采樣區(qū)域及象取樣點取樣點 第一天第二天第三天 判斷標準結果判斷結果判斷 取樣點 1 000 合格 取樣點 2 000 合格 A 級 面 取樣點 3 000 3 合格 取樣點 1 002 合格 取樣點 2 001 合格 A 級 地面 取樣點 3 000 5 合格 取樣點 1 000 合格 取樣點 2 000 合格 A 級設備 取樣點 3 000 1 合格 取樣點 1 000 合格 取樣點 2 000 合格 B 級墻面 取樣點 3 000 5 合格 取樣點 1 002 合格 取樣點 2 001 合格 B 級地面 取樣點 3 001 5 合格 B 級設備取樣點 1 000 5 合格 精品文檔 15歡迎下載 取樣點 2 010 合格 取樣點 3 000 合格 取樣點 1 101 合格 取樣點 2 110 合格 C 級墻面 取樣點 3 011 25 合格 取樣點 1 101 合格 取樣點 2 01414 合格 C 級地面 取樣點 3 01414 25 合格 取樣點 1 100 合格 取樣點 2 110 合格 C 級設備 取樣點 3 023 25 合格 取樣點 1 333 合格 取樣點 2 010 合格 D 級墻面 取樣點 3 000 50 合格 取樣點 1 000 合格 取樣點 2 010 合格 D 級地面 取樣點 3 000 50 合格 取樣點 1 000 合格 取樣點 2 100 合格 D 級清洗 取樣點 3 000 50 合格 由于第二次 第三次試驗結果相同 均合格 故此處略去表格 8 試驗的結論 濃度為0 2 優(yōu)潔消毒劑對物體表面消毒 作用0 5min 現場鑒定試驗共進行三次 結 果均符合規(guī)定 5 7 消毒劑消毒效果驗證結論 經過本次確認 濃度為0 2 濃度優(yōu)潔消毒劑可用于車間無菌手套表面和物體表面消毒 作用0 5min 0 2 優(yōu)潔消毒劑作用0 5min不可用作人員裸手消毒 6 6 驗證主要依據驗證主要依據 6 1 藥品生產驗證指南 2003年版 6 2 消毒技術規(guī)范 2008年版 6 3 中國藥典 2010年版 7 7 驗證合格標準驗證合格標準 7 1 判斷標準 在試驗結束后 通過判定標準來確定是否合格 判定標準是 在懸液定量殺滅試驗中 細菌各次試驗的殺滅對數值均應 5 00時 可判定細菌消毒合格 真菌各次試驗的殺滅對數 值均應 4 00 可判定真菌污染物消毒合格 在載體定量殺滅試驗中 各次試驗的殺滅對數 值均 3 00 可判定消毒合格 精品文檔 16歡迎下載 7 2 現場考察試驗合格標準 表表7 17 1 菌落數的合格標準菌落數的合格標準 潔凈級別潔凈級別表面菌落數 非地面 表面菌落數 非地面 表面菌落數 地面 表面菌落數 地面 設備表面標準設備表面標準 A級 3cfu 皿 5cfu 皿 1cfu 皿 B級 5 cfu 皿 5 cfu 皿 5 cfu 皿 C級 25 cfu 皿 25 cfu 皿 25 cfu 皿 D級 50 cfu 皿 50 cfu 皿 50 cfu 皿 8 8 再驗證周期再驗證周期 8 1當消毒劑的使用濃度和清潔消毒程序發(fā)生變更時應進行再驗證 8 2當環(huán)境中出現新類型的微生物時 應以該微生物為挑戰(zhàn)菌進行再驗證 8 3當有新的消毒劑被使用時應進行驗證 附錄附錄 附錄一 驗證方案會審記錄 會審日期 年 月 日 驗證方案名稱 驗證方案編號 姓 名部 門職 務會審意見修改內容 質量副總同意 不同意 精品文檔 17歡迎下載 生產副總同意 不同意 質保部部門負責人同意 不同意 質保部質保員同意 不同意 質檢部部門主管同意 不同意 生產二部部門經理同意 不同意 設備部部門經理同意 不同意 附錄二 驗證方案修改申請及批準書 驗證方案名稱 驗證方案編號 修改內容 精品文檔 18歡迎下載 修改原因及依據 修改后方案 起草人 部門經理 年 月 日 驗證委員會審批 驗證委員會 年 月 日 附錄三 漏項和偏差處理記錄 驗證方案名稱 驗證方案編號 漏項和偏差內容 精品文檔 19歡迎下載 漏項和偏差原因 漏項和偏差修改后內容 驗證委員會審批 附錄四 懸液法定量殺滅試驗記錄 表表5 25 2 懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄 驗證菌種驗證菌種作用時間作用時間 C C0 0 cfu ml cfu ml N N0 0C Cx x cfu ml cfu ml N Nx xKL NKL N0 0 N Nx x 接受標準接受標準判斷標準判斷標準 15s006 43 合格 30s006 43 合格 45s006 43 合格 2 5min006 43 合格 5min006 43 合格 金黃色 葡萄球菌 7 5min 2 7 1066 43 006 43 5 00 合格 15s006 67 合格 30s006 67 合格 45s006 67 合格 大腸 埃希菌 2 5min 4 7 1066 67 006 67 5 00 合格 精品文檔 20歡迎下載 表表5 35 3 懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄 驗證菌種驗證菌種作用時間作用時間 C C0 0 cfu ml cfu ml N N0 0C Cx x cfu ml cfu ml N Nx xKL NKL N0 0 N Nx x 接受標準接受標準判斷標準判斷標準 15s006 36 合格 30s006 36 合格 45s006 36 合格 2 5min006 36 合格 5min006 36 合格 金黃色 葡萄球菌 7 5min 2 3 106 6 3 6 006 36 5 00 合格 15s006 75 合格 30s006 75 合格 45s006 75 合格 大腸 埃希菌 2 5min 5 6 106 6 7 5 006 75 5 00 合格 5min006 67 合格 7 5min006 67 合格 15s106 49 合格 30s301 485 01 合格 45s20 306 19 合格 2 5min006 49 合格 5min006 49 合格 銅綠 假單胞菌 7 5min 3 1 1066 49 006 49 5 00 合格 15s006 57 合格 30s006 57 合格 45s006 57 合格 2 5min006 57 合格 5min006 57 合格 洋蔥伯克 霍爾德菌 7 5min 3 7 1066 57 006 57 5 00 合格 15s005 45 合格 30s005 45 合格 45s005 45 合格 2 5min005 45 合格 5min005 45 合格 白色 念珠菌 7 5min 2 8 1055 45 005 45 4 00 合格 15s004 34 合格 30s20 304 04 合格 45s004 34 合格 2 5min004 34 合格 5min004 34 合格 黑曲霉 7 5min 2 2 1044 34 004 34 4 00 合格 陰性對照組 00 合格 精品文檔 21歡迎下載 5min006 75 合格 7 5min006 75 合格 15s006 72 合格 30s006 72 合格 45s006 72 合格 2 5min006 72 合格 5min006 72 合格 銅綠 假單胞菌 7 5min 5 2 106 6 7 2 006 72 5 00 合格 15s006 15 合格 30s006 15 合格 45s006 15 合格 2 5min006 15 合格 5min006 15 合格 洋蔥伯克 霍爾德菌 7 5min 1 4 106 6 1 5 006 15 5 00 合格 15s005 32 合格 30s005 32 合格 45s005 32 合格 2 5min005 32 合格 5min005 32 合格 白色 念珠菌 7 5min 2 1 105 5 3 2 005 32 4 00 合格 15s004 34 合格 30s20 304 04 合格 45s004 34 合格 2 5min004 34 合格 5min004 34 合格 黑曲霉 7 5min 2 2 104 4 3 4 004 34 4 00 合格 陰性對照組 00 合格 表表5 45 4 懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄懸液法定量殺滅試驗第一次試驗記錄 驗證菌種驗證菌種作用時間作用時間 Co cfu ml Co cfu ml NoNoCx cfu ml Cx cfu ml NxNxKL No Nx KL No Nx 接受標準接受標準判斷標準判斷標準 15s006 36 合格 30s006 36 合格 45s006 36 合格 2 5min006 36 合格 5min006 36 合格 金黃色 葡萄球菌 7 5min 2 3 1066 36 006 36