中期陳素雨

學(xué)生姓名： 陳素雨指導(dǎo)老師： 楊金煜專業(yè)學(xué)位： 普外科（專業(yè)型）,1,2014級研究生中期考核報(bào)告,2,主要內(nèi)容,01 思想道德 02 課程學(xué)習(xí) 03 課題及論文發(fā)表 04 臨床工作小結(jié),3,氧化應(yīng),4,思想道德,5,氧化應(yīng),6,課程學(xué)習(xí),修完學(xué)校規(guī)定的所有課程,2014.09-2015.01,2015.12,取得國家職業(yè)醫(yī)師資格證書,7,課程學(xué)習(xí),氧化應(yīng),8,氧化應(yīng),課題及綜述,9,課題名稱,CO2氣腹壓對大鼠重癥急性胰腺炎胰腺病理、腦脊液S-100B蛋白、腦NF-B表達(dá)的影響,10,研究背景,重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis SAP）是常見的急腹癥，其病情兇險(xiǎn)，發(fā)展迅速，常因并發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS）和多臟器功能障礙綜合征(MODS)而病死率高。SAP免疫炎性細(xì)胞產(chǎn)生的眾多炎性因子使遠(yuǎn)處器官損傷，出現(xiàn)循環(huán)、呼吸、泌尿和神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重?fù)p害。1923年Lowll最早報(bào)道了急性胰腺炎可并發(fā)精神異常，但直到1941年Rothermich和Haam才首次提出了“胰性腦病(pancreatic encephalopathy, PE)”這個(gè)概念。文獻(xiàn)報(bào)道國內(nèi)胰性腦病多見于SAP，約占90% 。,11,研究目的,,我們通過動物實(shí)驗(yàn)，建立大鼠重癥急性胰腺炎模型，創(chuàng)建CO2氣腹，動態(tài)觀察腦組織損傷、腦NF-B的活性、腦脊液中S-100B蛋白的影響，為臨床SAP患者的診斷及治療提供參考。為腹腔鏡在SAP治療中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。,12,研究內(nèi)容,S-100B蛋白：近來的研究發(fā)現(xiàn)，腦損傷早期腦脊液和血清中的S-100B蛋白的含量和腦損傷的程度呈正相關(guān)，同時(shí)由于S-100B半衰期短，如其持續(xù)升高則表明腦組織有持續(xù)性損傷(王成東,武麗麗,王玉亭,等.S-100蛋白與顱腦損傷預(yù)后的關(guān)系.中國臨床神經(jīng)外科雜志,2005.10:25-26.)。S-100B蛋白己成為目前對腦損傷程度、預(yù)后評估預(yù)測的一個(gè)靈敏可靠指標(biāo)。NF-B:是炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)過程中一個(gè)至關(guān)重要的轉(zhuǎn)錄因子，NF-B的活化可通過激起腫瘤壞死因子-和白介素-1等促炎因子的表達(dá)，近而加重腦損傷。,13,實(shí)驗(yàn)方法,研究對象：健康雄性SPF級SD大鼠；選用健康雄性SPF級SD大鼠60只，周齡6-7周，體重 21020g,隨機(jī)分為3組：假手術(shù)（F）組（20只），重癥急性胰腺炎（SAP）組（20只），SAP+8mmHg（CO2氣腹）組（20只）；,14,實(shí)驗(yàn)方法,大鼠術(shù)前禁食12h,禁水4小時(shí)。3%戊巴比妥鈉注射液（2mg/100g體重）腹腔注射麻醉，F(xiàn)組：僅開腹輕柔翻動十二指腸及胰腺后關(guān)腹；SAP組：使用4.5號TB針頭，5%牛黃膽酸鈉（5mg/100g體重）胰腺被膜下均勻注射造模；SAP+8mmHg組：造模后，使用自動氣腹機(jī)向腹腔內(nèi)充氣，壓力維持在8mmHg。（大鼠氣腹壓力為5-8mmHg時(shí)相當(dāng)于人體腹腔鏡手術(shù)12-15mmHg參考文獻(xiàn)：Avital S, Itah R, Szomstein S, Rosenthal R, mbar R, Sckornik Y, Weinbroum A.Correlation of C02 pneumoperitoneal pressures between rodents and humans. Surg Endosc. 2009； 23(1):50-54.）；,15,實(shí)驗(yàn)方法,所有大鼠均在3h后處死，采集標(biāo)本(血液，胰腺組織、腦組織，腦脊液)；a.腦脊液：腹臥位固定消毒，鋪無菌洞巾，俯于三角形棒上用膠帶固定其頭部，使其頭下垂與體位形成45。角，以充分暴露枕頸部。從頭至枕骨粗隆作中線切開2cm，再至肩部1cm，鈍性分離，用虹膜剪剪去枕骨至寰椎肌肉，可見白色硬腦膜。用針在椎骨和寰椎2mm處刺入硬腦膜，抽取腦脊液約50l-100l，置于去酶處理凍存管中于-20冰箱中，待用ELISA測定S-1OOB蛋白含量。,16,實(shí)驗(yàn)方法,b.血液：將抽取腦脊液的后的大鼠仰臥位固定消毒，鋪無菌巾原切口進(jìn)腹。分離顯露腹主動脈，用lOml無菌注射器抽取動脈血約5-7m1后低溫離心取血清分為2份，取其中1份全自動生化分析儀檢測血淀粉酶，一份置于-20冰箱中備用。c.胰腺組織：10%中性福爾馬林溶液固定標(biāo)本,以備鏡下病理組織學(xué)檢查；d.腦組織:將鼠頭自枕骨和寰椎之間切下后剝離腦組織后將其分為4份，1份浸泡10%中型福爾馬林溶液中，以備鏡下病理組織學(xué)檢查；1份免疫組化法檢測NF-B；另2份置于去酶處理凍存管中于液氮罐中保存?zhèn)溆谩?17,實(shí)驗(yàn)方法,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示(x士S)，采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行均數(shù)差別的檢驗(yàn)和相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取0.05，P表示差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。,18,胰腺病理評分標(biāo)準(zhǔn),胰腺炎病變程度病理評分（Grewal法）組織 評分標(biāo)準(zhǔn)病變 0 1 2 3 4水腫 無 輕度葉間隙 重度葉間隙 腺泡間隙 細(xì)胞間隙增寬 增寬 增寬 增寬壞死 無 壞死面積 壞死面積 壞死面積 壞死面積 10% 20% 30%炎癥 每5個(gè)炎癥細(xì)胞計(jì)0.5分，大于30個(gè)計(jì)4分 出血 無 有出血 - - - 水腫+壞死+炎癥+出血=得分,技術(shù)路線,健康雄性SPF級SD大鼠60只,3h后處死大鼠，標(biāo)本采集,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,假手術(shù)組（F組）,SAP組,SAP+8mmHg組,血液（全自動生化分析儀檢測血淀粉酶）,胰腺組織（病理組織學(xué)檢查HE染色）,腦組織（HE染色）、免疫組化法檢測NF-B,腦脊液(ELISA測定S-1OOB蛋白含量),20,統(tǒng)計(jì)方法,采用SPSS 1.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示(x士S)，采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行均數(shù)差別的檢驗(yàn)和相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取0.05，P表示差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。,21,實(shí)驗(yàn)圖片,大鼠 被膜下注射 鈣化 鈣化、出 鈣化、出血、壞死 胰腺HE染色 胰腺HE染色,22,綜述發(fā)表情況,題目：重癥胰腺炎死亡相關(guān)因素的臨床分析已發(fā)表于現(xiàn)代養(yǎng)生,23,氧化應(yīng),課題計(jì)劃表,完成實(shí)驗(yàn),2015年11月-2016年12月完成重癥急性胰腺炎（SAP）造模，氣腹干預(yù)，采集標(biāo)本，完成胰腺、腦組織病理切片等,數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),撰寫論文,2016年12月-2017年2月數(shù)據(jù)整理與分析,2017年2月-2017年5月撰寫論文,24,臨床工作小結(jié),25,轉(zhuǎn)科時(shí)間安排,2015.03-2016.03 腔鏡外科2016.03-2016.05 肝膽外科2016.05-2016.07 胃腸外科2016.07-2016.09 CT室,在普外科手術(shù)方面，