5－周紅—APS血栓形成機(jī)制.ppt

抗磷脂綜合征血栓形成機(jī)制 周紅江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院 內(nèi)容提要 APS概念A(yù)PS診斷標(biāo)準(zhǔn)抗磷脂抗體及b2糖蛋白IAPS血栓形成機(jī)制b2GPI受體及其信號(hào)通路APS研究展望 抗磷脂綜合征 antiphospholipidsyndrome APS APSisanautoimmunedisease linksimmunologywiththrombosisandvasculardisease alsonamedHughesSyndrome由Hughes等命名于1980 是一種非器官特異性的自身免疫性疾病 APS臨床表現(xiàn) 自身免疫病 APS APS的診斷 血栓 反復(fù)流產(chǎn) APS 狼瘡樣抗凝物 抗心磷脂抗體 anti b2GPI 至少同時(shí)符合一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)和一項(xiàng)臨床指標(biāo)才能診斷為APS 以癲癇為首發(fā)癥狀的抗磷脂抗體綜合征1例報(bào)道 患者 女 42歲 發(fā)作性四肢抽搐兩年 發(fā)作時(shí)意識(shí)不清 診斷為 癲癇 實(shí)驗(yàn)室檢查 抗核抗體 抗 RNP 抗 Sm 抗 SSA 抗 SSB 抗 JO 1 抗 SCL 70及抗雙鏈DNA均為陰性 抗心磷脂抗體 ACA 兩次均為強(qiáng)陽性 狼瘡抗凝物 LA 陽性 頭顱CT 左側(cè)顳葉放射冠區(qū)腦梗死 右側(cè)半卵圓中心軟化灶 頭顱CTA 左側(cè)大腦中動(dòng)脈多條分支狹窄 部分分支閉塞 右側(cè)大腦中動(dòng)脈側(cè)裂池段節(jié)段性狹窄 心臟彩超 二尖瓣增厚 后葉贅生物 10mm 6mm 并中度關(guān)閉不全 診斷 根據(jù)患者臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果 診斷為抗磷脂抗體綜合征 血栓與止血學(xué) 2008 14 2 93 94 抗磷脂抗體及b2糖蛋白I 狼瘡抗凝物 LA 1952年 Conley和Hartman發(fā)現(xiàn)約10 的SLE患者體內(nèi)存在一種循環(huán)抗凝物 1972年 Feinstein和Rapaport正式命名LA 一類能夠干擾磷脂依賴性的凝血試驗(yàn)的免疫球蛋白 可分為IgG IgM及IgG IgM混和型 抗心磷脂抗體 ACL 1983年 由Harris等發(fā)現(xiàn) 為一種標(biāo)志抗體 這類抗體與LA是二組不同的物質(zhì) 且與之存在著交叉反應(yīng) 研究發(fā)現(xiàn)ACL是診斷APS更敏感的指標(biāo) 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)ACL與陰性電荷的磷脂 如磷脂酰絲氨酸 PS 以及磷脂酰甘油酯 PG 等存在交叉反應(yīng) 故將ACL稱為抗磷脂抗體 APL 將與這類抗體有關(guān)的疾病稱為抗磷脂綜合征 APS ACL 二磷酸?；?心磷脂 乙酰心磷脂 二甲基心磷脂 抗 2GPI抗體 1990年McNeil發(fā)現(xiàn)用離子交換及磷脂親和純化的ACL不能在無小牛血清的ELISA反應(yīng)系統(tǒng)中與反應(yīng)板上的心磷脂結(jié)合 當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)恢復(fù)血清成分后 ACL也恢復(fù)與心磷脂結(jié)合的活性 成分分析表明起這種作用的是血清中的磷脂結(jié)合蛋白 2糖蛋白I 2 glyooproteinI 2GPI 近年來研究表明 抗 2GPI抗體與APS血栓形成強(qiáng)相關(guān) beta2糖蛋白I b2GPI 別稱 APOH 1961年發(fā)現(xiàn)基因 17q23 mRNA約112kb部位 血漿 平均含量約0 2mg ml組成 326氨基酸殘基 分子量約為50kD功能 凝血及免疫 APS等自身免疫性疾病及一些感染性疾病相關(guān) 生理學(xué)功能尚未完全闡明 b2GPI結(jié)構(gòu) 形狀 魚鉤狀組成 4個(gè)補(bǔ)體調(diào)控蛋白序列 CCP1 CCP4 和一個(gè)V區(qū)組成 側(cè)鏈 4個(gè)糖基側(cè)鏈 CCP3 3 CCP4 1 b片層 藍(lán) CCP2 6 CCP1 3 4 7 V區(qū) 4 螺旋 紅 V區(qū) 2 a螺旋 263 266 310螺旋 320 322 b2GPI結(jié)構(gòu)的二種形式 電鏡圖像PhotoscourtesyofDr MatthiasM rgelin UniversityofLund Sweden 模式圖像 JThrombHaemost 2011 9 7 1275 84 b2GPI可能的生理功能 參與免疫防衛(wèi)參與凝血調(diào)節(jié)參與纖溶調(diào)節(jié)清除凋亡細(xì)胞血管生成調(diào)節(jié) APL的產(chǎn)生機(jī)制 凋亡細(xì)胞清除障礙假說b2GPI自身反應(yīng)性T細(xì)胞假說TLRs假說分子模擬假說 Blood 2007 109 422 430 凋亡細(xì)胞清除障礙假說 SLE病人的凋亡細(xì)胞清除出現(xiàn)問題遺傳學(xué)易感個(gè)體針對(duì)凋亡細(xì)胞表面結(jié)合的分子產(chǎn)生免疫反應(yīng)APS中凋亡細(xì)胞的PS結(jié)合b2GPI和凝血酶原和AnnexinA2凋亡細(xì)胞清除出現(xiàn)問題 凋亡細(xì)胞增多抗b2GPI和凝血酶原和AnnexinA2抗體產(chǎn)生 b2GPI自身反應(yīng)性T細(xì)胞假說 APS的抗體主要為低親和力的IgG2型抗體APS和健康人存在b2GPI自身反應(yīng)性T細(xì)胞b2GPI PS復(fù)合物被抗原遞呈細(xì)胞遞呈隱蔽表位凋亡清除障礙時(shí)b2GPI結(jié)合PS可能抗原遞呈提供基礎(chǔ)b2GPI自身反應(yīng)性CD4 HLAII被抗原遞呈細(xì)胞活化IL6和CD40 CD40L的相互作用介導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生抗b2GPI TLRs假說 Oxi b2GPI結(jié)合DC細(xì)胞并誘導(dǎo)其活化成熟繼而啟動(dòng)未致敏的T細(xì)胞和Th1細(xì)胞的極化DC活化導(dǎo)致TLRs觸發(fā)的信號(hào)級(jí)聯(lián)放大Oxi b2GPI或抗b2GPI Oxi b2GPI復(fù)合物作為內(nèi)源性免疫佐劑通過TLR4導(dǎo)致更多的抗體產(chǎn)生 抗b2GPI b2GPI復(fù)合物可能通過結(jié)合和交聯(lián)TLR4導(dǎo)致自身抗體的產(chǎn)生及放大 A 抗b2GPI自身抗體的產(chǎn)生第一步 自身抗原b2GPI 與磷脂結(jié)合的形式或者是氧化的形式 的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn) 機(jī)制不明 第二步 b2GPI隱蔽表位遞呈 活化的DC 給自身反應(yīng)性CD4 HLAIIT細(xì)胞 活化成熟的DC細(xì)胞釋放因子誘導(dǎo)未致敏的T細(xì)胞和Th1細(xì)胞的極化 第三部 活化的自身反應(yīng)性CD4 T細(xì)胞輔助自身反應(yīng)性B細(xì)胞 該B細(xì)胞通過BCR也接收了信號(hào)第四步 b2GPI與自身反應(yīng)性B細(xì)胞BCR結(jié)合第五步 抗b2GPI自身抗體產(chǎn)生B 信號(hào)放大假說認(rèn)為Oxi b2GPI或抗b2GPI b2GPI復(fù)合物作為內(nèi)源性免疫佐劑通過DC細(xì)胞 圈A B細(xì)胞 圈B TLR4提供協(xié)同刺激信號(hào)導(dǎo)致信號(hào)級(jí)聯(lián)放大 綠的粗線條表示步驟1到5的放大 分子模擬假說 細(xì)菌流感 嗜血 桿菌奈瑟 氏 菌屬破傷風(fēng)內(nèi)毒素免疫小鼠產(chǎn)生的抗b2GPI注射給小鼠可以導(dǎo)致小鼠的胚胎吸收 沒有證明顯示這些毒素和有機(jī)體的導(dǎo)致人抗b2GPI的升高抗b2GPI抗體麻風(fēng)病人針對(duì)b2GPIV區(qū) 無血栓表現(xiàn)APS患者針對(duì)b2GPII區(qū)細(xì)菌感染導(dǎo)致的非致病性抗b2GPI V區(qū) 的產(chǎn)生的機(jī)制與APS的致病性的抗b2GPI I區(qū) 的產(chǎn)生機(jī)制不同 APS血栓形成機(jī)制 血小板活化 ApoER2 GPIb 內(nèi)皮細(xì)胞活化 AnnexinA2 TLRs TLR2和TLR4 單核細(xì)胞活化 AnnexinA2 干擾抗凝系統(tǒng) 活化的蛋白C FX AnnexinA5 干擾纖溶系統(tǒng) AnnexinA2 tPA和抗纖容酶 血小板活化 激動(dòng)劑如凝血酶和膠原對(duì)血小板的預(yù)刺激是抗b2GPI b2GPI導(dǎo)致細(xì)胞活化的必要條件血小板的預(yù)先刺激除了導(dǎo)致PS外翻以外也可能導(dǎo)致血小板表面ApoER2 的表達(dá)上調(diào)和結(jié)構(gòu)修飾抗b2GPI b2GPI復(fù)合物首先在細(xì)胞表面的PS上形成抗b2GPI b2GPI復(fù)合物通過血小板ApoER2 受體導(dǎo)致活化 Blood 2007 109 422 430 最近 PierangeliSS Texas 研究組通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 鼠模型 證明了細(xì)胞表面受體ApoER2參與了APS的致病機(jī)制 Blood 2011 27 117 4 1408 14 Blood 2007 109 422 430 內(nèi)皮細(xì)胞活化 KeithMcCrae 俄亥俄 研究組證明抗b2GPI b2GPI可以與內(nèi)皮細(xì)胞表面AnnexinA2和TLR TLR2和TLR4 家族受體作用介導(dǎo)細(xì)胞的活化 Blood2005 105 1964 1969 J Biol Chem 2000 Lupus2008 17 943 951 ArthritisRheum2009 60 559 568 Blood Online April11 2011 單核細(xì)胞活化 抗b2GPI b2GPI復(fù)合物體外可以刺激單核細(xì)胞表達(dá)TF以及其他炎癥分子 YasudaS Japan Immunobiology 2005 210 775 780 本課題組研究發(fā)現(xiàn) APSIgG及抗b2GPI b2GPI復(fù)合能夠刺激單核細(xì)胞表達(dá)TF 細(xì)胞表面受體AnnexinA2于此相關(guān) ZhouH etal Blood 2004 104 2353 2358ZhouH etal CellRes2007 17 737 739 Antibody InducedMonoctyeTFActivityIsNotFc Mediated WesternBlotAnalysisofTHP 1CellLysatesbyAnti ANX2Antibody DecreasedTFExpressioninTHP 1CellswithANX2RNAi 本課題組深入研究發(fā)現(xiàn) TLR4及其轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在抗b2GPI b2GPI刺激單核細(xì)胞表達(dá)TF中具有重要作用 ZhouHetal IntJMolMed 2009 24 557 56ZhouHetal ClinExpImmunol 2011 163 189 198 TLR4 MyD88 MD 2被誘導(dǎo)表達(dá)增加 TLR4 MyD88 MD 2 IRAKs被誘導(dǎo)表達(dá)并活化 TRAFs被誘導(dǎo)表達(dá)并活化 IRAKs抑制物及蛋白酶體抑制劑阻斷抗b2GPI b2GPI對(duì)TF表達(dá)的刺激效應(yīng) ZhouHetal Thromb Hemost 2011 accepted 致謝 課題組各位協(xié)力研究 最近 FurieB研究組 哈佛 通過活體顯微鏡檢測的方法發(fā)現(xiàn) 來自伴發(fā)血栓的APS患者血漿中的抗 2GPI抗體大大增強(qiáng)活體小鼠激光介導(dǎo)的血管壁損傷 促進(jìn)血栓形成 除去抗 2GPI以外的自身抗體對(duì)血栓形成無影響 Blood 2011 24 117 12 3453 3459 干擾抗凝系統(tǒng) 馮瑩等 血栓與止血學(xué) 2009 15 219 221 吳競生等 中華血液學(xué)雜志 2000 39 97 99 抗b2GPI b2GPI與APC 抗b2GPI b2GPI復(fù)合物與APC復(fù)合物的組分競爭有限的磷脂結(jié)合位點(diǎn)抗b2GPI b2GPI復(fù)合物干擾APC復(fù)合物內(nèi)部的相互作用含有磷脂的氧化的PE可以使抗b2GPI b2GPI復(fù)合物選擇性的干擾APC的功能 AnnexinA5 AnnexinA5是一種與陰性PS具有高度親和力的蛋白 可以在血管細(xì)胞表面形成保護(hù)層發(fā)揮抗凝功能抗b2GPI b2GPI復(fù)合物可能會(huì)破壞這種保護(hù)層 因此誘發(fā)胎盤血栓和流產(chǎn) b2 GPI及抗b2 GPI競爭抑制AnnexinA5抗凝作用 干擾其他PS依賴的抗凝血途徑 通過蛋白Z 蛋白Z依賴的抑制劑和組織因子通路抑制劑抑制活化的FX解決這些PS依賴的促凝過程的干擾機(jī)制將為體內(nèi)