基因工程的基本操作程序習(xí)題.doc

5:33:03 上午5:33:03 上午5:33:03 上午3/10/2020 143/10/20205:33:03 上午基因工程的基本操作程序習(xí)題一、選擇題（每小題3分，共39分）1.下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是( )A目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)物、植物或微生物B限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性D載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)2.下列有關(guān)基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶的描述，錯(cuò)誤的是()。A一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列B限制性核酸內(nèi)切酶的活性受溫度影響C限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別和切割RNAD限制性核酸內(nèi)切酶可從原核生物中提取3.如圖是利用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因植物，生產(chǎn)可食用疫苗的部分過(guò)程示意圖，其中Pst 、Sma 、EcoR、Apa為四種限制性核酸內(nèi)切酶。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()。A圖示過(guò)程是基因工程的核心步驟B表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)需要用到限制酶 SmaC抗卡那霉素基因的存在有利于將含有抗原基因的細(xì)胞篩選出來(lái)D除圖示組成外，表達(dá)載體中還應(yīng)該含有啟動(dòng)子和終止子等結(jié)構(gòu)4.下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過(guò)程示意圖，有關(guān)敘述正確的是()A過(guò)程獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚基因組測(cè)序B將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白C過(guò)程構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因，需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達(dá)5下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是()A B C D6下列關(guān)于基因工程的敘述，不正確的是(多選)()A基因工程經(jīng)常以抗菌素抗性基因?yàn)槟康幕駼細(xì)菌質(zhì)粒是基因工程常用的運(yùn)載體C通常用一種限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的DNA，用另一種處理運(yùn)載體DNA D為培育成抗除草劑的作物新品種，導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體7天然的玫瑰沒(méi)有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B，而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰，下列操作正確的是（ ）A.提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA，再擴(kuò)增基因BB.利用限制性核酸內(nèi)切酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞D.將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞9.將ada（腺苷酸脫氨酶基因）通過(guò)質(zhì)粒pET28b導(dǎo)人大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含一個(gè)重組質(zhì)粒B每個(gè)重組質(zhì)粒至少含一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)C每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)至少插入一個(gè)adaD每個(gè)插入的ada至少表達(dá)一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子 10下列敘述符合基因工程概念的是()。AB淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，雜交瘤細(xì)胞中含有B淋巴細(xì)胞中的抗體基因B將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C用紫外線照射青霉菌，使其DNA發(fā)生改變，通過(guò)篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DNA整合到細(xì)菌DNA上11在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草過(guò)程中，下列操作錯(cuò)誤的是()。A用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸B用DNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體C將重組DNA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體D用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞13下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是()。A目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物B限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性D載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)二、填空題（共51分）1.科學(xué)家將動(dòng)物體內(nèi)的能夠合成胰島素的基因與大腸桿菌的DNA分子重組，并且在大腸桿菌體內(nèi)表達(dá)成功。請(qǐng)根據(jù)圖回答問(wèn)題:(1)此圖表示的是采取 合成基因的方法獲取 基因的過(guò)程。 (2)圖中DNA是以 為模板， 形成單鏈DNA，在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得了所需要的基因。 (3)圖中代表 DNA，含 基因。 (4)圖中表示 。2.下圖表示利用基因工程培育抗蟲棉的過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答下列有關(guān)問(wèn)題。(1)若限制酶的識(shí)別序列和切點(diǎn)是GATC，限制酶識(shí)別序列和切點(diǎn)是GGATCC，那么在過(guò)程中，應(yīng)用限制酶_切割質(zhì)粒，用限制酶_切割抗蟲基因。(2)將通過(guò)過(guò)程得到的大腸桿菌涂布在含有_的培養(yǎng)基上，若能夠生長(zhǎng)說(shuō)明已導(dǎo)入了普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒，反之則說(shuō)明沒(méi)有導(dǎo)入。(3)要確定抗蟲基因?qū)牒螅欠衲芊€(wěn)定遺傳并表達(dá)，需進(jìn)行檢測(cè)和鑒定工作，則在個(gè)體水平上的鑒定過(guò)程可簡(jiǎn)述為：_。經(jīng)篩選分析，該植株細(xì)胞中含有一個(gè)攜帶抗蟲基因的DNA片段，因此可以把它看作是雜合子。理論上，該轉(zhuǎn)基因植株自交產(chǎn)生的F1代中，仍具有抗蟲特性的植株占總數(shù)的_。(4)過(guò)程所用的現(xiàn)代生物技術(shù)稱為_(kāi)，從遺傳學(xué)角度來(lái)看，據(jù)細(xì)胞通過(guò)過(guò)程，能形成棉植株的根本原因是細(xì)胞具有_。3干擾素是病毒侵入人體后由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一種免疫活性物質(zhì)，它具有廣譜抗病毒的作用。利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)干擾素的流程如下：(1)過(guò)程產(chǎn)生的物質(zhì)A是_，cDNA文庫(kù)_(大于/小于)人的基因組文庫(kù)。(2)過(guò)程用到的工具酶是_，過(guò)程需先用_處理受體細(xì)胞，過(guò)程通常采用_技術(shù)。(3)過(guò)程和的關(guān)鍵技術(shù)分別是_、_。(4)基因工程的核心步驟是圖中的_(填標(biāo)號(hào))。4.(2011安徽理綜31)家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可提取干擾素用于制藥。(1)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用_酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。(2)為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的_和_之間。(3)采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。該P(yáng)CR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含：擴(kuò)增緩沖液(含Mg2)、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、_和_。(4)利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以_，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換。5(2010天津理綜，7)下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamH、Hind、Sma直線所示為三種限制酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答問(wèn)題。(1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用_限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含_的培養(yǎng)基上進(jìn)行。(2)能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是_(填字母代號(hào))。A啟動(dòng)子 BtetR C復(fù)制原點(diǎn) DampR(3)過(guò)程可采用的操作方法是_(填字母代號(hào))。A農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 B大腸桿菌轉(zhuǎn)化C顯微注射 D細(xì)胞融合(4)過(guò)程采用的生物技術(shù)是_。(5)對(duì)早期胚胎進(jìn)行切割，經(jīng)過(guò)程可獲得多個(gè)新個(gè)體。這利用了細(xì)胞的_性。(6)為檢測(cè)人乳鐵蛋白是否成功表達(dá)，可采用_(填字母代號(hào))技術(shù)。A核酸分子雜交 B基因序列分析C抗原抗體雜交 DPCR6(2009上海卷)人體細(xì)胞內(nèi)含有抑制癌癥發(fā)生的P53基因，生物技術(shù)可對(duì)此類基因的變化進(jìn)行檢測(cè)。(1)目的基因的獲取方法通常包括_和_。(2)上圖表示從正常人和患者體內(nèi)獲取的P53基因的部分區(qū)域。與正常人相比，患者在該區(qū)域的堿基會(huì)發(fā)生改變，在上圖中用方框圈出發(fā)生改變的堿基對(duì)，這種變異被稱為_(kāi)。(3)已知限制酶E識(shí)別序列為CCGG，若用限制酶E分別完全切割正常人和患者的P53基因部分區(qū)域(見(jiàn)上圖)，那么正常人的會(huì)被切成_個(gè)片段，而患者的則被切割成長(zhǎng)度為_(kāi)對(duì)堿基和_對(duì)堿基的兩種片段。(4)如果某人的P53基因部分區(qū)域經(jīng)限制酶E完全切割后，共出現(xiàn)170、220、290和460個(gè)堿基對(duì)的四種片段，那么該人的基因型是_(以P表示正?；颍琍表示異?；?。7(2009福建卷)轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過(guò)程如圖所示。質(zhì)粒上有Pst、Sma、EcoR、Apa等四種限制酶切割位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體A時(shí)，應(yīng)選用限制酶_，對(duì)_進(jìn)行切割。(2)培養(yǎng)板中的卡那霉素會(huì)抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體A中含有_，作為標(biāo)記基因。(3)香蕉組織細(xì)胞具有_，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株。圖中、依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中香蕉組織細(xì)胞的_。8 (2012高考全國(guó)新課標(biāo)卷40)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題：（1）限制性內(nèi)切酶切割分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有和。（2）質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoR切割后產(chǎn)生的片段如下：為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是。（3）按其來(lái)源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即DNA連接酶和DNA連接酶。（4）反轉(zhuǎn)錄作用的模板是，產(chǎn)物是。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用技術(shù)。（5）基因工程中除質(zhì)粒外，和也可作為運(yùn)載體。（6）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是。9.(2012福建高考)現(xiàn)代生物科技專題。肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)敕伟┘?xì)胞實(shí)驗(yàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖。請(qǐng)回答：（）進(jìn)行過(guò)程時(shí)，需用 酶切開(kāi)載體以插入let-7基因。載體應(yīng)用RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動(dòng)let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為 。（）進(jìn)行過(guò)程時(shí)，需用 酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。（）研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞提取 進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的。10. (2012天津高考7)生物分子間的特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實(shí)例為體外處理“蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體”獲得DNA片段信息的過(guò)程圖。據(jù)圖回答：（1）過(guò)程酶作用的部位是 鍵，此過(guò)程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA，過(guò)程酶作用的部位是 鍵。（2）、兩過(guò)程利用了酶的 特性。（3）若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要過(guò)程的測(cè)序結(jié)果與 酶的識(shí)別序列進(jìn)行對(duì)比，以確定選用何種酶。（4）如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA酶聚合，則其識(shí)別、結(jié)合DNA序列位基因的 。（5）以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有 （多選）A.分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提取rRNA B.用無(wú)水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素C通過(guò)分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體定位D將抑制成熟基因?qū)敕?，其mRNA與催化成熟酶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實(shí)成熟。11. (2012江蘇高考32)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度（bp即堿基對(duì)）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。請(qǐng)回答下列問(wèn)題 （1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由 連接。（2）若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是 末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為 。（3）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，產(chǎn)物中共有 種不同長(zhǎng)度的DNA片段。（4）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是 。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加 的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè)，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是 。答案1.【解析】基因工程中有3種工具，但工具酶只有2種。工具酶本質(zhì)為蛋白質(zhì)，載體本質(zhì)為小型DNA分子，但不一定是環(huán)狀。標(biāo)記基因的作用篩選、檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常見(jiàn)的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因，表達(dá)產(chǎn)物為帶顏色物質(zhì)等。受體細(xì)胞中常用植物受精卵或體細(xì)胞（經(jīng)組織培養(yǎng)）、動(dòng)物受精卵（一般不用體細(xì)胞）、微生物大腸桿菌、酵母菌等。一般不用支原體，原因是它營(yíng)寄生生活；一定能用哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞，原因是它無(wú)細(xì)胞核，不能合成蛋白質(zhì)?！敬鸢浮緿2.解析考查基因工程中工具酶的有關(guān)知識(shí)。限制性核酸內(nèi)切酶的化學(xué)成分是蛋白質(zhì)，它的活性受到溫度和pH的影響；限制性核酸內(nèi)切酶的特點(diǎn)是能識(shí)別雙鏈DNA中特定的核苷酸序列，可在特定的位點(diǎn)進(jìn)行切割，但不能識(shí)別和切割RNA；限制性核酸內(nèi)切酶主要是從原核生物體內(nèi)分離出來(lái)的。答案C解析圖示過(guò)程為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，是基因工程中的核心步驟。構(gòu)建過(guò)程中需要將目的基因完整切割下來(lái)，此時(shí)要用到限制酶Pst、EcoR。抗卡那霉素基因是標(biāo)記基因，目的是便于鑒定和篩選含有目的基因的細(xì)胞?；虮磉_(dá)載體包括啟動(dòng)子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因等。答案B4.【解析】過(guò)程中通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄法獲得的目的基因，可用于基因工程，但該目的基因中不存在內(nèi)含子和非編碼序列，因此不能用于比目魚的基因組測(cè)序；將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連形成的能表達(dá)的新基因可能不再是抗凍基因；利用農(nóng)桿菌的目的是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，而不是篩選重組質(zhì)粒；應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測(cè)受體細(xì)胞中是否成功導(dǎo)入了目的基因，但不能檢測(cè)目的基因是否完全表達(dá)?！敬鸢浮緽5C限制酶可在特定位點(diǎn)對(duì)DNA分子進(jìn)行切割；DNA聚合酶在DNA分子復(fù)制時(shí)將脫氧核苷酸連接成脫氧核苷酸鏈；DNA連接酶可將限制酶切開(kāi)的磷酸二酯鍵連接在一起；解旋酶的作用是將DNA雙鏈解開(kāi)螺旋，為復(fù)制或轉(zhuǎn)錄提供模板。6ACD基因工程經(jīng)常以抗菌素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因；質(zhì)粒是基因工程常用的運(yùn)載體；通常用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，以獲得相同的黏性末端；受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是體細(xì)胞。D為培育成抗除草劑的作物新品種，導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體7【答案】A【解析】提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，逆轉(zhuǎn)錄得到DNA，然后擴(kuò)增，可獲得大量的基因B，A正確；從基因文庫(kù)中獲取目的基因，只要根據(jù)目的基因的相關(guān)信息和基因文庫(kù)中的信息進(jìn)行篩選對(duì)比即可，不需要用限制酶進(jìn)行切割，B錯(cuò)誤；目的基因與質(zhì)粒的連接需要用DNA連接酶，而不是DNA聚合酶，C錯(cuò)誤；目的基因需要和運(yùn)載體連接后形成重組質(zhì)粒再導(dǎo)入，而且應(yīng)該用農(nóng)桿菌進(jìn)行感染，而不是大腸桿菌，D錯(cuò)誤。8.解析將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連成能表達(dá)的新基因，合成的蛋白質(zhì)為新的蛋白質(zhì)，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白，故選項(xiàng)B正確；過(guò)程是利用反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因，由于沒(méi)有非編碼區(qū)和編碼區(qū)中的內(nèi)含子，不能用于比目魚基因組測(cè)序；用作載體的質(zhì)粒，必須具有標(biāo)記基因才能便于檢測(cè)和篩選；應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄中目的基因的存在和轉(zhuǎn)錄，但不能檢測(cè)是否成功表達(dá)，故選項(xiàng)A、C、D錯(cuò)誤。答案B9.【解析】受體大腸桿菌成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶，說(shuō)明每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含有一個(gè)重組質(zhì)粒，且每個(gè)ada至少指導(dǎo)合成一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子。重組質(zhì)粒的形成需先用限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒形成相同的黏性末端，再在DNA連接酶的作用下連接起來(lái)，連接起來(lái)的序列中會(huì) 含有限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)。不同的限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)不同，不是每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)都能插入ada，C項(xiàng)錯(cuò)誤?！敬鸢浮緾10.解析基因工程是在生物體外，通過(guò)對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無(wú)性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物。所以B為基因工程，而A為動(dòng)物細(xì)胞工程，C為誘變育種，D無(wú)人為因素不屬于基因工程。答案B11.解析限制性核酸內(nèi)切酶用于提取目的基因和切割載體，煙草花葉病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，不能用限制性核酸內(nèi)切酶切割，A項(xiàng)錯(cuò)誤；DNA連接酶可以連接具有相同黏性末端的目的基因和載體，B項(xiàng)正確；受體細(xì)胞可以是受精卵和體細(xì)胞，也可以是去除細(xì)胞壁的原生質(zhì)體，C項(xiàng)正確；目的基因?yàn)榭钩輨┗?，所以未成功?dǎo)入目的基因的細(xì)胞不具有抗除草劑的能力，篩選時(shí)應(yīng)該用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，D項(xiàng)正確。答案A12.解析抗除草劑基因?qū)氲接筒说娜旧w后則可以通過(guò)花粉傳入環(huán)境中；轉(zhuǎn)抗蟲基因的植物可殺死無(wú)抗性昆蟲，對(duì)昆蟲的抗性具有選擇作用，所以會(huì)導(dǎo)致昆蟲群體抗性基因頻率增加；轉(zhuǎn)基因技術(shù)打破了生殖隔離，動(dòng)物的生長(zhǎng)激素基因轉(zhuǎn)入植物后可以表達(dá)；來(lái)源于自然界的目的基因?qū)胫参矬w后，可能破壞原有的基因結(jié)構(gòu)，具有不確定性，外源基因也可能通過(guò)花粉傳播，使其他植物成為“超級(jí)植物”等，所以轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在著安全性問(wèn)題。答案A13.解析載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞，但由于它和目的基因是相互獨(dú)立的，并不能促進(jìn)目的基因的表達(dá)。答案D二、填空題1答案：(1)人工胰島素原目的 (2)胰島素原信使RNA 逆轉(zhuǎn)錄 (3)重組 胰島素原 (4)將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞解析:本題是對(duì)基因工程操作程序的考查。操作時(shí)，首先要獲取目的基因，然后讓目的基因與載體結(jié)合構(gòu)建成重組DNA分子，再通過(guò)一定方法把重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞使其擴(kuò)增和表達(dá)2.解析本題極易出錯(cuò)的部分有：在第(1)小題中沒(méi)有看清目的基因插入的位置，從而不能確定用限制酶還是來(lái)切割質(zhì)粒還是切割抗蟲基因。第(3)小題檢測(cè)抗蟲性狀在個(gè)體水平上是否表達(dá)，應(yīng)該讓害蟲吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉片，觀察害蟲的存活情況，這個(gè)地方也有出錯(cuò)的，主要沒(méi)有看清是在哪個(gè)水平上進(jìn)行檢測(cè)的。在切割質(zhì)粒時(shí)應(yīng)遵循一個(gè)原則：不能同時(shí)將兩個(gè)標(biāo)記基因切開(kāi)，至少保留一個(gè)，所以只能用酶切割，而從目的基因兩側(cè)堿基序列可知，只能用酶才得到含目的基因的DNA片段。如果導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，此時(shí)重組質(zhì)粒中四環(huán)素抗性基因能正常表達(dá)，而氨芐青霉素抗性基因已被破壞，所以涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，能夠生長(zhǎng)的話，說(shuō)明導(dǎo)入了重組質(zhì)粒(普通質(zhì)粒)。如果把攜帶一個(gè)抗蟲基因的DNA片段看作雜合子，可以認(rèn)為是Aa，自交產(chǎn)生的F1中仍具有抗蟲特性的植株占總數(shù)的比例為。把一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)成一個(gè)植株的技術(shù)稱為植物組織培養(yǎng)。答案(1)(2)四環(huán)素(3)讓害蟲吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉片，觀察害蟲的存活情況，以確定其是否具有抗蟲性狀(4)植物組織培養(yǎng)發(fā)育成完整個(gè)體的全部遺傳物質(zhì)解析(1)cDNA來(lái)自mRNA的逆轉(zhuǎn)錄或根據(jù)mRNA的堿基序列人工合成，cDNA文庫(kù)小于基因組文庫(kù)。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體用到限制酶和DNA連接酶。將目的基因?qū)氪竽c桿菌須用Ca2處理受體細(xì)胞；導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞用顯微注射法。(3)過(guò)程的關(guān)鍵技術(shù)是胚胎移植，過(guò)程的關(guān)鍵技術(shù)是細(xì)胞核移植。(4)基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，即。3.解析本題綜合考查基因工程、細(xì)胞工程和PCR技術(shù)，意在考查考生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解。胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理可以將動(dòng)物組織分解成單個(gè)細(xì)胞；基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因等，其中啟動(dòng)子和終止子有利于目的基因的表達(dá)，標(biāo)記基因有利于目的基因的檢測(cè)；PCR技術(shù)中需要原料(4種脫氧核苷酸)、緩沖液、模板DNA、引物和耐熱DNA聚合酶等；在生物反應(yīng)器中放入多孔的中空薄壁小玻璃珠的目的：一方面有利于細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)，避免接觸抑制；另一方面有利于氣體交換。答案(1)胰蛋白(或膠原蛋白)(2)啟動(dòng)子終止子(3)對(duì)干擾素基因特異的DNA引物對(duì)TaqDNA聚合酶(4)擴(kuò)大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積4.解析(1)由圖示可知：需用Hind和BamH限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因，因酶切后tetR四環(huán)素抗性基因結(jié)構(gòu)被破壞而ampR氨芐青霉素抗性基因結(jié)構(gòu)完好，故用含氨芐青霉素的選擇培養(yǎng)基可篩選含有重組載體的大腸桿菌。(2)啟動(dòng)子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，可調(diào)控基因的特異性表達(dá)。(3)過(guò)程表示把重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程，當(dāng)受體細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，常采用顯微注射法。(4)過(guò)程表示把早期胚胎移植到代孕母牛子宮的過(guò)程，屬于胚胎移植技術(shù)。(5)經(jīng)過(guò)程得到新個(gè)體是細(xì)胞全能性的體現(xiàn)。(6)人乳鐵蛋白基因是否成功表達(dá)，關(guān)鍵看是否有其表達(dá)產(chǎn)物即人乳鐵蛋白，可用抗原抗體雜交法檢測(cè)該蛋白是否存在。答案(1)Hind和BamH氨芐青霉素(2)A(3)C(4)胚胎移植技術(shù)(5)全能(6)C5.解析本題主要考查基因工程相關(guān)知識(shí)。(1)目的基因的獲取方法有直接分離和化學(xué)方法人工合成兩種；(2)仔細(xì)對(duì)比正常人與患者的基因序列可知是CG堿基對(duì)變?yōu)榱薚A堿基對(duì)，這種變化屬于基因突變；(3)正常人P53基因有兩個(gè)限制酶E的識(shí)別序列，完全切割后可產(chǎn)生三個(gè)片段，患者P53基因中有一個(gè)限制酶E的識(shí)別序列發(fā)生突變，且突變點(diǎn)位于識(shí)別位點(diǎn)內(nèi)，這樣患者就只有一個(gè)限制酶E的識(shí)別序列，切割后產(chǎn)生兩個(gè)片段，分別為290170460對(duì)堿基，220對(duì)堿基；(4)正常人的P53基因經(jīng)限制酶E完全切割后產(chǎn)生三個(gè)片段，290對(duì)堿基、170對(duì)堿基和220對(duì)堿基，患者產(chǎn)生兩個(gè)片段460對(duì)堿基和220對(duì)堿基，則該人的基因型應(yīng)為PP。答案(1)從細(xì)胞中分離通過(guò)化學(xué)方法人工合成(2)見(jiàn)下圖基因堿基對(duì)的替換(基因突變)(3)3460220(4)PP解析本題考查基因工程的有關(guān)知識(shí)。(1)從圖可看出，只有Pst、EcoR兩種酶能保持抗病基因結(jié)構(gòu)的完整性，所以構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體A時(shí)，應(yīng)選用限制酶Pst、EcoR兩種酶，對(duì)抗病基因的DNA和質(zhì)粒進(jìn)行切割。(2)卡那霉素能抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體A中含有抗卡那霉素基因，以此作為標(biāo)記基因。(3)香蕉組織細(xì)胞具有全能性，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株。圖中、依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中香蕉組織細(xì)胞的脫分化和再分化。答案(1)Pst、EcoR含抗病基因的DNA、質(zhì)粒(2)抗卡那霉素基因(3)全能性脫分化、再分化6.【答案】（1）黏性末端 平末端（2）切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoR切割產(chǎn)生的相同（3）Ecoli T4（4）mRNA（RNA） cDNA （DNA） PCR（5）噬菌體 動(dòng)植物病毒等（6）未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱【解析】（1）當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開(kāi)時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端，而當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)，產(chǎn)生的則是平末端。（2）為使運(yùn)載體與目的基因相連，不同的限制酶應(yīng)切割出相同的黏性末端，它們必須要能識(shí)別相同的核苷酸序列，并且使每條鏈中相同的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)。（3）DNA連接酶，根據(jù)酶的來(lái)源不同，可以將這些酶分為兩類：一類是從大腸桿菌中分離得到的，稱為Ecoli DNA連接酶；另一類是從T4噬菌體中分離出來(lái)的，稱為T4DNA連接酶。（4）反轉(zhuǎn)錄是以RNA為模版來(lái)合成DNA的過(guò)程。可以在體外短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增DNA的技術(shù)叫PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）（5）基因工程中除質(zhì)粒外，還有噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等。（6）大腸桿菌細(xì)胞外有細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，能阻止其他物質(zhì)的進(jìn)入，只能通過(guò)Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。7.【答案】（10分）（1）限制性核酸內(nèi)切酶（或限制） 啟動(dòng)子（2）胰蛋白（3）RNA RAS蛋白【解析】（1）過(guò)程表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在該過(guò)程中需要用限制酶對(duì)載體進(jìn)行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸內(nèi)切酶，簡(jiǎn)稱限制酶，寫其他的不得分）；啟動(dòng)子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的位點(diǎn)，RNA聚合酶結(jié)合到該位點(diǎn)，可驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。（2）過(guò)程表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個(gè)的細(xì)胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進(jìn)行傳代培養(yǎng)。（3）判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來(lái)進(jìn)行，從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片