乳與乳制品檢驗方法匯編.doc

乳與乳制品檢驗方法匯編（第三版）匯編：蔣懿超220 / 221前 言 本匯編內(nèi)的原奶及奶粉摻假檢驗方法等同采用伊利集團(tuán)內(nèi)部檢驗方法，理化檢驗方法等效采用IDF相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、GB/T5413-1997，GB/T5009-2003，個別地方根據(jù)實驗具體情況做了適當(dāng)修改；微生物檢驗方法等同采用GB/T4789-2003，部分檢驗項目等效采用IDF標(biāo)準(zhǔn)。 目 錄前言-1目錄-2第一部分 原料奶新鮮度和摻雜異物的檢驗方法YLNB 1.1 酒精實驗-5YLNB 1.2 美蘭實驗-6YLNB 1.3 堿性物質(zhì)的檢出-8YLNB 1.4 食鹽的檢出-10YLNB 1.5 硝酸鹽，亞硝酸鹽的檢出-12YLNB1.6 糊精的檢出-14YLNB 1.7 淀粉的檢出-15YLNB 1.8 硫酸鹽的檢出-16YLNB 1.9 蔗糖的檢出-17YLNB 1.10 尿素的檢出-18YLNB 1.11 飴糖（糖?。┘捌咸烟堑臋z出-19YLNB 1.12 甲醛的檢出-20YLNB1.13 硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉的檢出-21YLNB1.14 過氧化氫的檢出 -23YLNB1.15 乳中摻入水解蛋白的檢測出25 YLNB 1.16 乳中不溶性物質(zhì)的檢出27 第二部分 乳與乳制品常規(guī)理化指標(biāo)檢驗方法YLNB 2. 滴定酸度的檢測28YLNB 2.2 灰分的檢測-34YLNB 2.3 全脂乳固體的檢測-36YLNB 2.4 總固形物的檢測-38YLNB 2.5 水分的檢測-42YLNB 2.6 脂肪的檢測-44YLNB 2.7 乳糖和蔗糖的檢測-53YLNB 2.8 蛋白質(zhì)的檢測62YLNB 2.9 不溶度指數(shù)的檢測-68YLNB 2.10 乳與乳粉中雜質(zhì)度的檢測73YLNB 2.11 硝酸鹽，亞硝酸鹽的檢測74YLNB 2.12 乳鐵蛋白飽和度的檢測82第三部分 乳與乳制品微生物檢驗方法YLNB 3.1 菌落總數(shù)檢測-84YLNB 3.2 大腸菌群檢測-90YLNB 3.3 嗜冷菌檢測-96YLNB 3.4 霉菌和酵母菌的計數(shù)- 100YLNB 3.5 鮮乳中抗生素殘留檢測103YLNB 3.6 芽孢和耐熱芽孢檢測-106YLNB 3.7 雙歧桿菌檢測109YLNB 3.8 染色技術(shù)-112YLNB 3.9 顯微技術(shù)116第四部分 乳與乳制品病原微生物檢驗方法YLNB4.1 金黃色葡萄球菌的檢測119YLNB4.2 金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測-123YLNB4.3 沙門氏菌的檢測126YLNB4.4 志賀氏菌的檢測132YLNB4.5 溶血性鏈球菌的檢測136 YLNB4.6 單增李斯特菌的檢測-139YLNB4.7 阪崎腸桿菌的檢測-146YLNB4.8 糞鏈球菌群的檢測-152附圖1 金黃色葡萄球菌革蘭氏染色顯微照片附圖2 金黃色葡萄球菌的平板菌落照片附圖3 金黃色葡萄球菌在BP平板上的菌落形態(tài)附圖4 志賀氏菌落在SS平板上的照片附圖5 大腸桿菌革蘭氏染色照片第五部分 乳與乳制品非常規(guī)指標(biāo)分析方法YLNB 5.1 乳與乳制品中黃曲霉毒素M1的檢測163YLNB 5.2 食品及飼料中黃曲霉毒素B1的檢測165YLNB 5.3 預(yù)混料中維生素C的含量的檢測（常規(guī)法）167YLNB 5.4 維生素C的檢測-169YLNB 5.5 奶酪中脂肪含量以及食鹽含量的檢測172YLNB 5.6 磷的檢測 -177YLNB 5.7 DHA、AA的檢測-180YLNB 5.8 維生素B1的檢測-184YLNB 5.9 碘的檢測-187YLNB 5.10 維生素A、E的檢測-191YLNB 5.11 山梨酸、苯甲酸、糖精鈉的檢測-195YLNB 5.12 維生素B6的檢測-198YLNB 5.13 煙酸和煙酸銨的檢測-201YLNB 5.14 乳制品中鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、鋅、銅和錳的檢測-204YLNB 5.15 乳制品中鉛的檢測-209YLNB 5.16 乳制品中總砷的檢測-212YLNB 5.17 乳制品中硒的檢測-215原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 酒精實驗 YLNB 1.11. 原理 生鮮牛乳在酸度升高后，與等體積中性酒精混合后會出現(xiàn)絮片, 通過絮片的產(chǎn)生情況判定是否可通過該濃度的酒精。2. 試劑所有試劑均應(yīng)為分析純；實驗用水至少應(yīng)是蒸餾水。 酒精：根據(jù)需要用分析純中性乙醇配制72%（v/v）, 75%（v/v），78%（v/v）的酒精（必要時配制74%（v/v）的酒精）。注：如酒精呈酸性，使用前可用0.1mol/l或1 mol/l NaOH進(jìn)行中和，中和時推薦使用5g/l酚酞指示劑。3. 器材3.1 平皿：直徑80-90 mm3.2 溫度計：檢定合格的玻璃溫度計或探測式溫度計3.3 酒精計：檢定合格的酒精計3.4 量筒：25 ml 3.5 吸管：2 ml。4. 方法4.1 準(zhǔn)確吸取2 ml牛奶于平皿中。注：a.該步驟開始后，應(yīng)將試驗連續(xù)進(jìn)行下去直至完成，中間不得間斷； b.酒精加入混合均勻后，應(yīng)在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。4.2 根據(jù)需要在加有奶樣的平皿中加入2 ml酒精，要邊加邊搖，使酒精與牛奶均勻混合，觀察是否有絮片生成（絮片無論大小）。注：試驗應(yīng)在20C的溫度下進(jìn)行，必要時擴(kuò)大取樣量和檢樣量。5. 結(jié)果判定出現(xiàn)絮片的牛乳為該濃度下的酒精試驗陽性乳?；厥醉撛夏绦迈r度和摻雜異物檢驗方法 美蘭實驗 YLNB 1.21.原理美蘭還原試驗是用來判斷原料乳新鮮程度的一種色素還原試驗。新鮮乳加入亞甲基蘭后染為藍(lán)色。如污染大量微生物產(chǎn)生還原酶使顏色逐漸變淺，直至無色，通過測定顏色變化時間，間接推斷出鮮奶的衛(wèi)生質(zhì)量。2.試劑亞甲藍(lán)水溶液：0.01g/300ml3.器材3.1 試管，20mm200mm3.2 水浴鍋：可恒溫到384.方法4.1 吸取10ml牛奶于滅菌試管中，在水浴中加熱到38，再加入亞甲基蘭溶液1ml，混勻。4.2 將試管放入水浴中，每30min觀察一次褪色情況，并記錄每個樣品褪色時間。5.結(jié)果判定通常，通過溶液的褪色時間可以估算出牛奶中細(xì)菌總數(shù)。（應(yīng)為開始退色的時間計）。6.影響因素6.1細(xì)菌的活性：由于原奶在實驗前冷藏時間的延長，傳統(tǒng)的適溫菌型（產(chǎn)酸菌的牛奶菌絲），逐漸轉(zhuǎn)換為嗜冷菌型（分解蛋白質(zhì)和脂肪的菌絲），脫色時間和細(xì)菌總數(shù)之間的相關(guān)性變?nèi)酢?.2溶液的退色時間與染色液的濃度有關(guān)。6.3此方法對體細(xì)胞（白細(xì)胞）及其他細(xì)胞的還原作用也敏感，因此還可檢驗異常乳（乳房炎及初乳或末乳）。裉色時間相當(dāng)每ml牛乳中的細(xì)菌總數(shù)20min 2107 20-40min 1.0107-2.010740min-1小時 5.0106-1.01071小時-2小時 4.0106-5.01062小時-3小時 3.0106-4.01063小時-4小時 2.0106-3.01064小時-5小時 1.0106-2.01065小時-5.5小時 5.0105-1.01065.5小時-6.5小時 3.0105-5.01056.5小時-7.5小時 1.0105-3.0105 7.5小時 1.0105 注：此方法較適用于原料奶的驗收檢驗，所以一般時間控制在40分鐘之內(nèi)觀察為宜。 回首頁原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 堿性物質(zhì)的檢出 YLNB 1.3方法一：玫瑰紅酸法（仲裁法）1.原理鮮奶中如摻堿，可使指示劑變色，根據(jù)顏色的不同，粗略判斷加堿量的多少。2.試劑玫瑰紅酸（0.05%乙醇溶液）：稱取0.05g玫瑰紅酸溶于100ml 95%的乙醇中。3.方法于盛有2ml牛乳的試管中加入2ml玫瑰紅酸溶液，搖勻，觀察顏色變化。4.結(jié)果判定正常色：如圖（1）（2）（3）（4）； （1） （2） （3） （4） 異常色：如下圖 （a量） （b量） （c量） 注明：（1）牛奶酸度及新鮮度影響最終顏色的判定，酸度越高、新鮮度越差最終顏色越黃 。 （2）最低檢測限：弱堿為0.02%強(qiáng)堿為0.006% 方法二：溴麝香草酚蘭法1.1原理鮮乳中如摻堿物質(zhì)，可使指示劑變色，由顏色的不同，大略判斷加堿量的多少。1.2器材試管：F 18180mm試管架吸管：2ml1.3試劑取0.04克溴百里香草酚蘭（溴麝香草酚蘭）溶于100ml95%分析純乙醇中。1.4方法取乳樣約2ml于小試管中，沿管壁慢慢加入指示劑約0.5ml，將試管輕輕斜轉(zhuǎn)2-3圈，然后垂直放置2分鐘后，觀察指示劑與樣品接觸面顏色特征以判定檢驗結(jié)果。同時用不含堿的正常生鮮牛乳作空白對照。1.5結(jié)果判定正常奶：黃色摻堿奶：0.03%黃綠色 0.05%淡綠色 0.1%綠色 0.3%深綠色 0.5%青綠色 0.7%淡青色 1.0%青色 1.5%深青色1.6注意事項摻水乳（因水的PH大都在79之間）、摻洗衣粉乳（因洗衣粉中加有碳酸鈉）、乳房炎乳（因為細(xì)菌分解乳酪蛋白產(chǎn)生氨及乳房代謝功能的改變而造成PH值升高）與摻堿指示劑的接觸面均可呈黃綠至淡綠色。回首頁原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 食鹽的檢出 YLNB 1.41. 原理鮮奶中氯化物與硝酸銀反應(yīng)，生成氯化銀沉淀，用鉻酸鉀指示劑，當(dāng)牛奶中的氯化物與硝酸銀作用后，過量的硝酸銀與鉻酸鉀生成磚紅色的Ag2CrO4 沉淀。2. 試劑2.1 9.6g/L硝酸銀溶液：取分析純硝酸銀置于105烘箱內(nèi)烘30min，取出放在干燥器內(nèi)冷卻后，稱取9.6g溶于1000ml蒸餾水中。2.2 100g/l鉻酸鉀溶液：稱取分析純鉻酸鉀10g溶于100ml蒸餾水中。注：硝酸銀溶液應(yīng)儲存于棕色試劑瓶備用。 3. 器材3.1 吸管：2 ml 3.2 試管：F 18 180 mm4. 方法取2ml牛乳于試管中，加入100g/l鉻酸鉀溶液5滴，搖勻，再加入9.6g/L硝酸銀溶液1.5ml，搖勻后，立即觀察結(jié)果。注：在加入硝酸銀后，應(yīng)立即觀察顏色，做出判定；否則，判定結(jié)果會偏高。5. 結(jié)果判定正常色： 摻鹽乳：呈黃色，且隨著摻入量的增多，顏色由土黃色向鮮黃色變化 （ (a量鹽） (b量鹽) (c量鹽)最低檢測限為0.05%6. 注意事項6.1試劑加入順序不同影響測定結(jié)果，先加入硝酸銀其結(jié)果偏高1020%，因此應(yīng)按“牛奶+指示劑+硝酸銀”或“指示劑+牛奶+硝酸銀”的順序進(jìn)行。6.2 日常試驗應(yīng)盡量在20C左右的室溫下進(jìn)行，仲裁試驗必須在20C條件下進(jìn)行。 回首頁原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 亞硝酸鹽和硝酸鹽檢出 YLNB 1.5方法一：固體試劑法1. 原理鮮奶中的亞硝酸鹽與顯色試劑作用，形成紅色的化合物；鮮奶中的硝酸鹽被還原成亞硝酸鹽后，再與顯色試劑形成紅色化合物。2. 試劑哈爾濱龍澤科技有限公司的鮮奶亞硝酸鹽和硝酸鹽試劑。（使用之前要對該試劑驗證，確保藥品的有效性）3. 方法取鮮奶亞硝酸鹽或硝酸鹽試劑（按試劑說明添加）到試管中，加入被檢奶樣，振蕩混合均勻，必要時加熱溶解，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。4. 結(jié)果判定：正常乳：呈無色摻亞硝酸鹽或硝酸鹽乳：呈粉紅色，且由摻入量的增加，顏色逐漸加深。（a量）（b量） 最低檢測限：硝酸鹽為2*10-6亞硝酸鹽為：10-85. 注意事項5.1.1 藥品瓶必須用顏色較深的紙包好避光保存。5.1.2 藥品置于干燥的環(huán)境中保存，最好放在干燥器中。5.1.3 已打開包裝的藥品要密封好后于干燥器中避光保存，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)塊現(xiàn)象應(yīng)立即停止使用。5.1.4 硝酸鹽檢測時，所加硝鹽試劑要足量（約0.3克），要使試劑和樣品充分混勻后，應(yīng)在5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。方法二：液體試劑法（仲裁法）1.試劑1.1顯色劑：稱取對氨基苯磺酸0.6g,甲萘胺0.2g，甲萘酚0.1g,溶于400ml 50%的醋酸溶液中，置棕色試劑瓶中保存。1.2還原劑：硫酸鋇44.0g, 硫酸錳5.0g, 鋅粉1.0g, 混合在一起，干燥研磨成細(xì)粉末，密閉保存。2.方法：吸取2.0ml牛乳于試管中，加入還原劑約0.1g混勻（亞硝酸鹽檢測不加還原劑），加顯色劑0.51.0 (ml)搖勻， 5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。3. 結(jié)果判定：摻假乳：微粉水粉粉紅紅色（根據(jù)顏色的深淺判斷硝酸鹽和亞硝酸鹽含量的大?。┱Ｈ椋簾o色4. 注意事項：還原劑配制時，一定要研磨均勻，否則會嚴(yán)重影響硝酸鹽檢測?；厥醉撛夏绦迈r度和摻雜異物檢驗方法糊精類物質(zhì)的檢出 YLNB 1.6 1.試劑： B試劑，C試劑（由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)提供）2.方法2.1取一定體積的被檢奶樣置于高速的離心機(jī)上離心（轉(zhuǎn)速為4000r/min）20分鐘，去除浮在上面的脂肪；2.2在剩余的乳樣中加入冰醋酸（每50ml加2.3-2.5ml）搖勻，再次離心（同上），棄去沉淀，收集乳清；2.3在收集的乳清中加入B試劑（每5ml乳清加0.6mlB試劑），繼續(xù)離心，棄去沉淀，收集上清液，將其作為待測檢樣；2.4取1ml乳清于小試管中加C試劑3ml，搖勻。3.結(jié)果判定正常乳：沒有沉淀產(chǎn)生或搖勻后為澄清透明的液體。摻糊精乳：混濁的液體。最低檢出限為0.05% 。4注意事項1、脂肪必須去除干凈，特別是油滴層。2、吸取上清液時不要觸及底部的沉淀物。3、得到乳清液必須澄清，否則需要相應(yīng)增加B試劑的使用量，至達(dá)到澄清為止。4、加入C試劑混合均勻后2分鐘內(nèi)。回首頁原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 淀粉的檢出 YLNB 1.71. 原理：淀粉遇碘呈蘭色反應(yīng)。2. 試劑KII試劑：碘化鉀20g加碘5g先用大約20ml的蒸餾水溶解，然后定容至250ml。3. 方法取乳2ml，加熱煮沸，觀察乳液是否有沉積現(xiàn)象，冷卻后加入3-5滴KII試劑。4. 判定結(jié)果正常奶：呈黃色；摻淀粉奶：呈藍(lán)色或青藍(lán)色沉淀物出現(xiàn)。正常色： 摻淀粉奶：呈蘭色，且顏色深淺與摻入量成正比。a量： b量： c量： 回首頁原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 硫酸鹽的檢出 YLNB 1.81. 原理鮮奶中的硫酸鹽與氯化鋇形成硫酸鋇沉淀，過量的鋇離子與玫紅酸鈉反應(yīng)生成玫紅酸鋇呈玫瑰紅色。若鮮奶中摻入硫酸鹽后，因氯化鋇被硫酸鹽全部沉淀，無游離的鋇離子，因而不能與玫紅酸反應(yīng)，故呈黃色。2. 試劑2.1 稱取氯化鋇3克，加蒸餾水少許溶解后，加濃鹽酸20ml，加蒸餾水至250ml。2.2 玫紅酸鈉1克，氯化鈉49克，干燥研磨至粉末狀，密閉保存。3. 方法取乳2ml于小試管中，加入玫紅酸鈉指示劑約0.3克混勻，加氯化鋇溶液45滴混勻，放置35分鐘后觀察結(jié)果。4結(jié)果判定正常乳：呈玫瑰紅色；摻入硫酸鹽乳呈黃色或土黃色。最低檢出量：0.1%。5注意事項5.1 嚴(yán)格控制酸度，酸度過大易褪色，酸度不足不顯色。5.2 對不能判定奶樣可取奶10ml，加10%氯化鋇溶液0.51ml離心沉淀，正常鮮奶沉淀物很少，摻硫酸鹽奶有較多量硫酸鋇沉淀。5.3玫紅酸鈉與氯化鈉混合后，研磨至粉末狀，防止吸潮?；厥醉撛夏绦迈r度和摻雜異物檢驗方法 蔗糖的檢出 YLNB 1.91. 原理蔗糖在酸性溶液中水解產(chǎn)生的果糖與溶于強(qiáng)酸內(nèi)的間苯二酚溶液加熱后顯紅色沉淀反應(yīng)。2. 試劑稱取間苯二酚0.4克用少量蒸餾水溶解，加濃鹽酸200ml，再加蒸餾水稀釋至600ml置棕色瓶，現(xiàn)用現(xiàn)配。 3. 方法取間苯二酚鹽酸溶液1.5ml于小試管中，加鮮乳5滴，水浴加熱煮沸2.5分鐘，觀察結(jié)果。4. 結(jié)果判定 正常色：如圖A 圖A摻蔗糖乳： a量：如圖B 圖B b量：如圖C 圖Cc量：如圖D 圖D5.注意事項5.1 鹽酸濃度不能高也不能低否則影響顯色反應(yīng)。5.2 試劑須置棕色瓶中，配制及貯存過程中被有機(jī)物污染，顏色變黃或變紅則不能使用。5.3 加熱時間過長，其它醛類糖也能產(chǎn)生淺紅色的反應(yīng)。回首頁原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 尿素的檢出 YLNB 1.101.原理尿素與二乙酰肟在酸性條件下，經(jīng)鎘離子（或三價鐵離子）的催化產(chǎn)生縮合，并在氨基硫脲存在下，生成3，5，6三甲基1，2，4三胺的紅色復(fù)合物。2.試劑2.1 酸性試劑：在1升容量瓶中加入蒸餾水約100ml，然后加入濃硫酸44ml及85%磷酸66ml，冷卻至室溫后，加入硫氨脲30mg，硫酸鎘2克溶解后用蒸餾水稀釋至1000ml。貯棕色瓶中冰箱內(nèi)保存半年不變。2.2 2%二乙酰肟試劑：稱取二乙酰一一肟2克，溶于100ml蒸餾水中。貯棕色瓶中放置冰箱內(nèi)，可保存半年不變。2.3 應(yīng)用液：取酸性試劑90ml加2%二乙酰一一肟10ml混合均勻，即可使用。3. 方法取應(yīng)用液1ml于試管中，加鮮奶一滴加熱煮沸約1分鐘后觀察結(jié)果。4結(jié)果判定正常：無色或微紅色；摻入尿素或尿的奶立即呈深紅色。摻入量越大，顯色越快，紅色越深；最低檢出限為0. 03 % 。注：正常奶煮沸時間超過2分鐘，也可出現(xiàn)淡紅色?；厥醉撛夏绦迈r度和摻雜異物檢驗方法 飴糖（糖稀）及葡萄糖的檢出 YLNB 1.111. 原理飴糖中的葡萄糖被葡萄糖氧化酶氧化生成葡萄糖酸及過氧化氫；后者在過氧化物酶的作用下，使還原性氧受體鄰聯(lián)甲苯銨氧化成蘭色化合物。2.方法用醫(yī)院用來檢驗?zāi)蛱怯玫哪蛱窃嚰垳y試。3.結(jié)果判定按照尿糖試紙上的要求進(jìn)行判定。大于0含量即判定為陽性。最低檢測限為0.05% ?；厥醉撛夏绦迈r度和摻雜異物檢驗方法 甲醛的檢出 YLNB 1.121. 原理 甲醛常被作為防腐劑而摻入牛乳中，鮮奶中的甲醛在酸性溶液中與三氯化鐵產(chǎn)生紫色反應(yīng)。 2. 試劑稱取0.2g三氯化鐵溶于100ml濃鹽酸中。3. 器材3.1 吸管：2ml，0.5 ml 3.2 試管：F 18 180 mm3.3 試管架3.4可調(diào)式電爐4. 方法取乳樣2ml于小試管中，加入三氯化鐵鹽酸溶液0.5ml，混勻于沸水中水浴1分鐘，觀察顏色。5. 結(jié)果判定正常：呈黃色或淡黃褐色。 摻甲醛乳：呈紫色。最低檢出量1/4000。有些涂料中含有甲醛或甲醛的衍生物，亦可檢出。回首頁原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉的檢出 YLNB 1.131.原理硫代硫酸鈉（Na2S2O3）、焦亞硫酸鈉（Na2S2O5）都具有強(qiáng)烈的還原性和漂白作用，它們能把碘（I2）還原成碘離子（I），從而使碘失去了遇淀粉變藍(lán)的能力。2.試劑1）碘-碘化鉀溶液：7g碘與18g碘化鉀溶于100ml水中，稀釋至1000ml。貯存于棕色試劑瓶中，避光保存。2) 10g/L淀粉指示劑，現(xiàn)用現(xiàn)配。3.方法 取2ml牛奶，加入2滴淀粉指示劑，搖勻后，加入0.05ml碘一碘化鉀溶液，立即搖勻后觀察顏色。4. 結(jié)果判定正常乳：藍(lán)色（下圖的顏色均為正常色）摻假乳：乳白色或灰白色（如下圖）最低檢測限：硫代硫酸鈉為0.02 %。 焦代硫酸鈉為0.01 %。附加說明正常色（藍(lán)色）不可能把所有的藍(lán)顏色都逐一的列出來，只要是藍(lán)色系列均為正常色。注意事項1、樣品和試劑的加入量要求準(zhǔn)確加入，并且在加入碘-碘化鉀溶液時必須讓溶液完全與樣品混合，不能掛在管壁上。2、淀粉指示劑必須澄清、有效。3、搖勻后立即觀察?；厥醉?原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 過氧化氫的檢出 YLNB 1.14 方法一：半定量試紙條法： 1. 原理過氧化氫酶將過氧化氫的氧轉(zhuǎn)移至有機(jī)的氧化還原指示劑，形成一種藍(lán)色的氧化產(chǎn)物。2. 器材半定量試紙條3. 方法3.1取下一試紙條后，立即密封保存管。3.2將試紙條浸入待測溶液一秒種，將反應(yīng)區(qū)充分浸潤。3.3輕輕移開試紙條，抖落過量的水分，15秒后將反應(yīng)區(qū)的顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色條對比。4. 結(jié)果判定 通過與標(biāo)準(zhǔn)色對比，確定牛乳中的過氧化氫含量，如發(fā)現(xiàn)檢測中的試紙的藍(lán)色過深，是由于過氧化氫的含量過高而導(dǎo)致。5. 注意事項 未開啟包裝的試紙條應(yīng)在冰箱中保存，開封后應(yīng)盡可能干燥低溫保存。盡量保存在1025下。方法二：碘化鉀淀粉方法1.原理過氧化氫在酸性條件下，能使碘化物氧化析出碘，KII與淀粉反應(yīng)呈藍(lán)色。2.試劑a.淀粉溶液：溶解3g可溶性淀粉于10ml水中，然后將其慢慢倒入100ml沸水中，邊加邊攪拌，溶解完全后，使溶液冷卻?，F(xiàn)用現(xiàn)配。b.碘化鉀淀粉溶液：將3g碘化鉀溶解于5ml水中，將其倒入淀粉溶液中，攪拌均勻?，F(xiàn)用現(xiàn)配。c硫酸溶液， 濃硫酸:水=1:1 3. 方法吸取1ml鮮奶于試管中，加入0.2ml碘化鉀淀粉溶液，混勻。加入硫酸溶液1滴，搖勻，1分鐘內(nèi)觀察顏色變化。4. 結(jié)果判定正常乳：呈乳白色，參考下圖摻防腐劑乳：呈藍(lán)色，且隨著摻入量的增加顏色逐漸加深。參考下圖H2O2含量色卡編號H2O2含量色卡編號1.0350U0.092758U0.9349U0.08259U0.8357U 0.072685U0.7341U 0.06289U 0.63288U0.05272U0.53302U 0.04271U0.43035U 0.03263U0.3303U 0.02無0.2282U 0.01無0.12768U0.00無回首頁原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 水解蛋白的檢出 YLNB 1.151. 器材1.1 量筒10 mL、100 mL、250 mL1.2 具塞刻度比色管10 mL1.3 小燒杯50 mL1.4 移液管1 mL、5 mL1.5 濾紙11 cm1.6 比色管架1.7 容量瓶（棕色）250 mL、100 mL1.8 玻璃棒1.9 小牛角勺1.10 吸水紙2. 試劑2.1 打底標(biāo)樣（簡稱“底標(biāo)”）配制：含3 水解蛋白粉奶樣配制方法，用精密天平（萬分之一感量），用50 mL潔凈干燥小燒杯稱取水解蛋白粉0.750 g，然后用自產(chǎn)新鮮未摻假牛奶少量多次（每次30-40 mL鮮奶）溶解，并無損轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，最后用同種鮮奶定容至250 mL刻度，蓋上瓶塞，反復(fù)顛倒振搖50次以上，以保證充分溶解并混勻。2.2 5%汞（）鹽溶液：用潔凈小燒杯在天平上稱取硝酸汞（AR級）試劑12.5 g，小心地用10 mL量筒量取4 mL濃硝酸倒入小燒杯中，進(jìn)而加蒸餾水溶解并無損轉(zhuǎn)移至250 mL棕色容量瓶中（用少許蒸餾水沖洗小燒杯3-4次均轉(zhuǎn)移至容量瓶中），最后用蒸餾水定容至250 mL，搖勻。2.3 飽和苦味酸溶液：用小牛角勺取苦味酸兩小勺，小心地置入100 mL棕色容量瓶中，用洗瓶沖洗試劑至瓶下部，再加入蒸餾水至刻度，反復(fù)振搖50次，并放置過夜使之達(dá)到溶解平衡即為飽和溶液（注意觀察容量瓶底部始終應(yīng)有固體試劑殘留才為飽和狀態(tài)）。3.方法取10 mL具塞比色管若干支，編號后置于比色管架上，用1 mL移液管吸取1.00 mL“底標(biāo)”奶液注入每支比色管中，再用5ml移液管吸取待測奶樣4.00 mL注入加標(biāo)比色管中，注意記錄樣號與管號對應(yīng)關(guān)系，然后蓋塞充分振蕩混勻樣品。用另一支5 mL移液管吸取5 %硝酸汞溶液5.00 mL依次加入各樣品管中，蓋塞搖勻，等待5分鐘（在此期間，準(zhǔn)備好與比色管相同個數(shù)的50 mL潔凈小燒杯，折好濾紙置各燒杯上）后，將各比色管中奶樣倒入濾紙中進(jìn)行無漏斗過濾操作，約2分鐘后，各燒杯中濾液即達(dá)5 mL以上，此時棄去濾紙及其內(nèi)容物，用另一5 mL移液管分別移取濾液各2.00 mL分別注入另一組（即比色管架上已備好的另一排10mL比色管）中，再用一支5 mL移液管吸取2.00 mL飽和苦味酸溶液分別加入各個盛濾液比色管中，蓋塞搖勻，然后在白色或黑白相間或透明空間背景下觀察混濁情況，若有淡黃色渾濁出現(xiàn)即為陽性。操作時以未摻假鮮奶做對照，即移取該奶樣4.00 mL注入編為“0”號的比色管中，加入5 mL汞鹽試液，以下操作同于樣品檢測。4. 檢測原理及有關(guān)說明4.1 加入汞鹽即可使乳中蛋白質(zhì)變性凝聚，通過過濾操作即可除去，但水解蛋白與汞鹽不發(fā)生沉淀反應(yīng)，通過該步驟即可實現(xiàn)乳中固有蛋白與人為加入的蛋白質(zhì)成分分離。4.2 因苦味酸具有比汞鹽更強(qiáng)的沉淀作用，其與水解蛋白中的堿性基團(tuán)（氨基）作用即可形成難溶的有機(jī)鹽類沉淀，故使體系出現(xiàn)渾濁，當(dāng)水解蛋白粉在奶樣中含量高于1 %時，此操作步驟則會較快出現(xiàn)淺黃色沉淀析出的現(xiàn)象。4.3 任何難溶物均具有與溫度密切相關(guān)的溶度積常數(shù)，水解蛋白粉與苦味酸的作用也不例外，操作中給待檢樣中加入“底標(biāo)奶樣”是為了提高檢測方法的靈敏度，即通過該措施可以達(dá)到含量萬分之五水解蛋白粉的奶樣穩(wěn)定檢出陽性結(jié)果的目的。4.4苦味酸性狀：苦味酸化學(xué)名稱為2，4，6-三硝基苯酚，為黃色晶體或粉末，苦味有毒，密度1.763，熔點122，不易吸濕，難溶于冷水，較易溶于熱水、乙醇、氯仿、苯和乙醚。具有強(qiáng)烈爆炸性，是軍事上最早使用的一種烈性炸藥。易與多種金屬作用生成更易爆炸且危險的苦味酸鹽，能與有機(jī)堿生成難溶晶體鹽類。本身是一種酸性染料，在工業(yè)上也用于制造其它染料和照像藥品，在醫(yī)療上則做為外科收斂劑。回首頁原料奶新鮮度和摻雜異物檢驗方法 乳中不溶性物質(zhì)的檢出 YLNB 1.161. 原理 牛乳中如果摻雜了石膏，滑石粉等不溶于牛乳的物質(zhì)，在一定速度和時間內(nèi)用離心機(jī)進(jìn)行離心后，由于其比重較大，會沉淀于離心管的底部，通過觀察沉淀的多少，來判斷是否為正常牛乳。2. 儀器及器材2.1 離心機(jī)：有速度顯示器，有適合于離心管（3.2）并可向外轉(zhuǎn)動的套管，轉(zhuǎn)速可達(dá)到1000r/min 2.2 離心管：錐形，標(biāo)有刻度，最大容量50 ml ，最小刻度0.1ml3. 方法3.1 將采好的牛乳樣品攪拌均勻，并將溫度調(diào)為20，將牛乳倒入離心管至30ml刻度處。3.2 將離心管放入離心機(jī)中（要對稱放置），使離心管迅速旋轉(zhuǎn)，以1000r/min的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)5min。3.3 取出離心管，倒出上清液，加15ml 20蒸餾水，用攪拌棒充分?jǐn)嚢韬?，倒入蒸餾水至30ml刻度處。3.4 將離心管放入離心機(jī)中，以1000r/min的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)3min。注：將離心管放入離心機(jī)中，使離心管的刻度線在離心機(jī)旋轉(zhuǎn)時既不朝上也不朝下，而是處于中間位置。這樣即使沉淀物頂部傾斜，沉淀物也很容易估算。3.5 取出離心管，豎直握住離心管，以適當(dāng)背景為對照，使眼睛與沉淀物頂部平齊，讀取沉淀物體積數(shù)。如果沉淀物頂部傾斜，則估算其體積數(shù)（可以讀取傾斜面的1/2處刻度）。4. 結(jié)果判定正常乳：沉淀物體積0.1ml摻雜乳：沉淀物體積0.1ml 回首頁乳與乳制品常規(guī)理化指標(biāo)檢驗 滴定酸度的檢測 YLNB 2.1一、基準(zhǔn)法（仲裁法）1. 原理 將一定量的乳粉溶于水中，制成復(fù)原乳，或者吸取一定量的牛乳，用0.1mol/L氫氧化鈉滴定至pH為8.30，由此消耗的0.1mol/l氫氧化鈉溶液的毫升數(shù)可計算出滴定100ml牛乳或干物質(zhì)為12的復(fù)原乳所需的氫氧化鈉量。所需氫氧化鈉溶液的量隨產(chǎn)品中的自然緩沖物質(zhì)變酸或添加酸性或堿性物質(zhì)的量而變化。2. 試劑 所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；所有實驗用水，如未注明其他要求，均指三級水。2.1 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：c(OH-)為0.1mol/l。保護(hù)此溶液，防止二氧化碳滲透。2.1.1 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 將100g氫氧化鈉固體溶解到100ml無二氧化碳水中，制成飽和溶液，靜置，吸取上清液5.4ml于1000ml容量瓶中，用無二氧化碳水定容。2.1.2 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定執(zhí)行GB/T601-2002中的方法或下面的方法 稱取約0.18g于105110烘至恒重的鄰苯二甲酸氫鉀，準(zhǔn)確至0.1mg，用50ml無二氧化碳水溶于250ml三角瓶中，加兩滴5g/l的酚酞指示劑，用配好的氫氧化鈉溶液地滴定至粉紅色，同時做空白實驗。氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為： m c(NaOH)= (V-V0)*0.2042式中：c(NaOH)氫氧化鈉的濃度，mol/lm 稱取的鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量，gV 氫氧化鈉的用量，mlV0 空白實驗氫氧化鈉溶液的用量，ml2.2 酚酞溶液：取0.5g酚酞溶于75ml體積分?jǐn)?shù)為95的乙醇中，并加入20ml水，然后再加入氫氧化鈉溶液（2.1），直至加入一滴立即變成粉紅色，再加入水定容至100ml。2.3 氮氣3. 儀器及器材3.1 天平：靈敏度為0.01g或更高。3.2 電位滴定儀或pH計：帶電極，（使用之前需進(jìn)行校正）3.3 量筒：100ml3.4 三角瓶：250ml，帶磨口和玻璃塞，頸部可容納電極，一個滴定管頭和一根氮氣管。4. 方法4.1樣品處理4.1.1 原料奶和液態(tài)奶樣品：吸取10ml原料奶或液態(tài)奶樣品于三角瓶中，加入20ml無二氧化碳蒸餾水，同時做空白。4.1.2 酸奶類樣品：準(zhǔn)確稱取5g左右樣品于三角瓶中，加入40ml40無二氧化碳蒸餾水，溶解，同時做空白4.1.3 奶粉：稱取4g樣品于三角瓶中，準(zhǔn)確至10mg。用量筒量取96ml 20的無二氧化碳水，使樣品復(fù)原，劇烈攪拌，然后靜置20min，同時做空白。4.2 用pH7和pH9的緩沖溶液校準(zhǔn)電位滴定儀，將滴定終點設(shè)定為8.30。4.3 將盛有樣品溶液的三角瓶放于電位滴定儀的攪拌器上，打開攪拌器，然后用氫氧化鈉進(jìn)行滴定，當(dāng)?shù)竭_(dá)終點時，將自動停止滴定。4.4 滴定的同時向三角瓶中吹氮氣，防止溶液吸收空氣中的二氧化碳。整個滴定過程應(yīng)在1min內(nèi)完成。4.5 記錄消耗氫氧化鈉的毫升數(shù)。注：如沒有電位滴定儀，可用pH計代替。步驟：首先校準(zhǔn)pH計，然后將樣品溶液放于磁力攪拌器上，用滴定管向三角瓶中滴加氫氧化鈉溶液，直到pH值達(dá)到8.30，以下步驟同4.4和4.5。5. 結(jié)果計算5.1 原料奶或液態(tài)奶： 樣品的滴定酸度（0T）= 其中：C氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/LV1滴定時消耗的氫氧化鈉的體積，mlV0-空白實驗時消耗的氫氧化鈉的體積，mlV-吸取樣品的體積，ml5.2 酸奶類樣品的滴定酸度（0T）=C氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/LV1滴定時消耗的氫氧化鈉的體積，mlV0-空白實驗時消耗的氫氧化鈉的體積，mlm-稱取樣品的質(zhì)量，g5.3 奶粉： 樣品的滴定酸度（0T）式中：c 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/LV 滴定時消耗的氫氧化鈉的體積，mlm 稱取樣品的質(zhì)量，gw 樣品中水分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，12 12g乳粉相當(dāng)100ml復(fù)原乳（脫脂乳粉應(yīng)為9，脫脂乳清粉為7）以上滴定酸度結(jié)果保留至小數(shù)點后一位。注：若以乳酸含量表示樣品的酸度，則樣品乳酸含量（g/100g）T0.009。T為樣品的滴定酸度；0.009為乳酸的換算系數(shù)。6. 允許差 本方法的重復(fù)性為由同一分析人員，同時或在短時間間隔內(nèi)，對同一樣品所做的兩次單獨實驗的結(jié)果之差不得超過1.0 0T。二、常規(guī)法1. 原理 將一定量的乳或奶粉復(fù)原乳，以酚酞作指示劑，堿性品紅或硫酸鈷作參比顏色，用0.1mol/L的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至粉紅色，根據(jù)所消耗的毫升數(shù)可計算出滴定100ml乳或干物質(zhì)為12%的復(fù)原乳，所需的氫氧化鈉量。所需氫氧化鈉溶液的量隨產(chǎn)品中的自然緩沖物質(zhì)變酸或添加酸性或堿性物質(zhì)的量而變化。2. 試劑 所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；所有實驗用水，如未注明其他要求，均指三級水。2.1 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：c（NaOH）為0.1mol/l。配制和標(biāo)定同基準(zhǔn)法2.1。2.2 參比溶液2.2.1 堿性品紅溶液：將0.005g堿性品紅溶于水中，并定容至100ml。2.2.2 硫酸鈷溶液：將3g七水硫酸鈷溶于水中，并定容至100ml。2.3 酚酞溶液：同基準(zhǔn)法2.2。3. 儀器及器材3.1 分析天平3.2 半微量滴定管：10ml，分刻度為0.05ml3.3 吸管：0.5ml，2ml，10ml3.4 量筒：20ml，100ml3.5 三角瓶：150ml，250ml4. 操作步驟4.1樣品處理4.1.1 原料奶和液態(tài)奶樣品：吸取10ml原料奶或液態(tài)奶樣品于三角瓶中，加入20ml無二氧化碳蒸餾水，同時做空白。4.1.2 酸奶類樣品：準(zhǔn)確稱取5g左右樣品于三角瓶中，加入40ml40無二氧化碳蒸餾水，溶解，同時做空白。4.1.3 奶粉：稱取4g樣品于三角瓶中，準(zhǔn)確至10mg。用量筒量取96ml 20的無二氧化碳水，使樣品復(fù)原，劇烈攪拌，然后靜置20min后，同時做空白。4.2 標(biāo)準(zhǔn)顏色制備4.2.1 液態(tài)奶樣品：吸取10ml樣品于150ml三角瓶中，加入20ml無二氧化碳水，加入3滴堿性品紅溶液，搖勻。4.2.2 酸奶類樣品: 稱取5g左右樣品于150ml三角瓶中，加入40ml40無二氧化碳水，溶解冷卻后加入3滴堿性品紅溶液，搖勻。4.2.3乳粉：將乳粉按照4.1.3復(fù)原后，在溶液中加入2ml硫酸鈷溶液，搖勻。如果要測定一系列相似的產(chǎn)品，則以上兩種標(biāo)準(zhǔn)色溶液可用于整個測定過程，但不得超過2h.4.3 樣品滴定4.3.1原料奶和液態(tài)奶樣品：將樣品按照4.1.1處理后，加入0.