植物病毒田間接種、傳染方式教材.doc

實驗六 植物病毒病及其傳染方式一、實驗目的認識植物病毒形態(tài)和病毒病主要癥狀類型，通過植物組織汁液的摩擦接種和蚜蟲傳播試驗了解病毒病的主要傳染方式。二、講解要點1病毒顆粒很小，必須用電子顯微鏡才能觀察到。植物病毒顆?？梢苑譃閳A球狀（或等邊多面體）、炮彈狀、長桿狀和線條狀4種。這些在課堂和本次實驗課上只能通過觀看電鏡照片或幻燈片來了解。2植物病毒病的主要癥狀類型有花葉、變色、條紋、枯斑或環(huán)斑壞死、畸形。應該注意：一方面這些癥狀類型的分辨在病毒病鑒定上具有比起它病害更重要的意義，另一方面在實際觀察中，也會發(fā)現同一種病毒病在發(fā)病過程中或在不同環(huán)境條件下會有不同的表現（不同病狀甚至隱癥）。3病毒病多為系統(tǒng)性侵染，沒有病征，易與非侵染性病害相混淆，往往需要通過一定方式的傳染試驗證實其傳染性。植物病毒病的傳染方式有：機械（摩擦）接觸傳染、嫁接傳染、介體（包括昆蟲、線蟲、真菌、螨類和菟絲子）傳染、花粉及種子傳染等。由于病毒是專性寄生物，它的侵染來源都與活體（活的動、植物體或介體）有關，傳染要使病毒接觸活體。例如汁液摩擦接種，要用新鮮的病毒汁液，摩擦的目的是造成寄主植物體表面的微傷，使病毒有可能進入活的細胞，過重的損傷造成組織壞死并不利于病毒的傳染。蚜蟲、飛虱等刺吸式口器昆蟲取食植物汁液的方式更容易滿足植物病毒傳播的兩方面要求。4大白菜病毒病的癥狀為幼苗受侵后首先心葉出現明脈即沿葉脈失綠，繼呈花葉及皺縮。成株被害，出現不同程度的葉片皺縮、變硬而脆，后期出現褐色斑點或褐色壞死條紋；植株矮化。我國十字花科蔬菜病毒病主要由蕪菁花葉病毒（簡稱TuMV）、黃瓜花葉病毒（簡稱CMV）和煙草花葉病毒（簡稱TMV）所致，前兩種病毒能由蚜蟲和汁液傳染，第三種只能以汁液傳染。馬鈴薯病毒病主要是皺縮花葉病和卷葉病兩種。前者的癥狀為葉片皺縮、變??；葉尖向下彎曲，全株矮化，葉片色澤深淺不均，以后出現黑褐色壞死斑，質地變脆，嚴重時全株發(fā)生壞死性葉斑，自下而上枯死。馬鈴薯皺縮花葉病是由馬鈴薯X病毒（簡稱PVX）和馬鈴薯Y病毒（簡稱PVY）兩種病毒復合侵染引起的。PVX只能由汁液傳染，昆蟲不傳染。PVY的傳染方式有汁液與蚜蟲傳染。馬鈴薯卷葉病的癥狀為葉緣向上卷曲，病重時呈圓筒狀。葉片色澤較淺，有時葉背面呈紅色或紫色。葉片變厚變脆，病葉不出現萎蔫下垂的現象，矮化亦不甚明顯。其病原物是馬鈴薯卷葉病毒（簡稱PLRV），只能由蚜蟲傳染，而汁液接觸無傳毒效果。三、實驗材料及用具1病毒顆粒的電鏡照片或幻燈片、病毒病各類癥狀的照片或幻燈片。2毒源：溫室種植或田間采到的大白菜病毒病植株，或由帶毒的馬鈴薯塊莖培育的幼苗和田間病株。3在隔離的病毒溫室或防蟲紗籠內培育的無毒健壯苗：14片真葉的大白菜幼苗（品種如小白口）或34片真葉的普通煙草及心葉煙幼苗，4片真葉的千日紅幼苗或4片真葉的洋酸漿幼苗。4傳毒介體昆蟲：室內防蟲籠內飼養(yǎng)的無毒桃蚜（無翅蚜）。5磷酸緩沖液，配方為：KH2PO4 5.445g NaHPO412H2O 21.49g 蒸餾水 1000mL。配制方法為兩種藥品分別溶于水后，加足水量混和。6磷酸皂制備，配方為：洗衣肥皂 20份，Na3PO4 5份，水 100份。制備方法為，先將洗衣皂切成薄片，溶解在沸水中，然后加入磷酸鈉，全部溶解攪勻呈糊狀，放在定型容器內使其自然干固備用。7病毒試驗溫室及防蟲籠 病毒試驗溫室一般都有隔離條件較好的小房間，通氣窗要安裝40篩目紗網，工作人員進出都要注意不能帶進昆蟲。養(yǎng)蟲籠和防蟲籠往往是同一設備，為方形或圓筒形框架上復以40篩目紗網，或在側面或在頂部設開口，裝上袖套以便操作。8其他：400600篩目金剛砂，放在帶網口的瓶中或紗布袋內、研缽、剪子或刀片、紗布、洗瓶、毛筆、培養(yǎng)皿、蒸餾水、40%樂果乳劑。四、實驗步驟1、觀察照片或幻燈片、病害標本，認識病毒形態(tài)及病毒病癥狀的主要類型。2、病毒汁液磨擦接種（1）取大白菜病毒病癥狀典型的病葉（或馬鈴薯病毒病葉片）去掉大的葉脈，剪碎置于研缽中，加適量的磷酸緩沖液，研磨成泥漿狀，用雙層紗布濾出汁液，作為接種用病毒汁液。（2）用磷酸皂洗手并用清水沖凈，取健康的大白菜幼苗及千日紅幼苗（或洋酸漿幼苗及心葉或普通煙幼苗，作馬鈴薯病毒病傳染試驗用），作好標記，在每株上選已展開的生長正常的兩片葉，先在葉正面撒少許金剛砂，左手托葉背，右手食指沾病毒汁液在葉面輕輕往返磨擦4次，立即用洗瓶內的清水沖洗。（3）用磷酸肥皂洗手并用清水沖洗，按與（2）相同的程序進行，只是手指不沾病毒汁液而只是沾磷酸緩沖液磨擦葉面，作為未擦病毒的對照。（4）將處理過的幼苗移入無蟲的溫室內培育，經過4-7天和2-3星期后觀察發(fā)病情況并分析結果。3、蚜蟲傳毒實驗（1）用毛筆取無毒桃蚜50-100頭，放在干燥的培養(yǎng)皿內，饑餓2小時后，再移到大白菜病毒病株（或馬鈴薯病毒病侏）上，飼毒24小時。（2）將飼過毒的桃蚜移到防蟲籠中的5株健康的大白菜苗和5株千日紅苗（或同樣數目的洋酸漿苗和心葉煙或普通煙苗）上，每株5-10頭，飼食24小時后噴2000倍40%樂果乳油殺死蚜蟲。（3）取50-100頭無病桃蚜，在干燥的培養(yǎng)皿中饑餓24小時后，移到5株健康的大白菜苗和5株千日紅苗（或同樣數目的洋酸漿苗和心葉煙或普通煙苗）上，每株也是5-10頭，飼食24小時后噴2000倍40%樂果乳油殺死蚜蟲，以此作為對照處理。（4）經過上述處理的幼苗，置溫室內培育2-3周后觀察發(fā)病情況。五、作業(yè)1、參