食品安全檢驗技術(shù)-廣東海洋大學.ppt

食品安全檢驗技術(shù)實驗 課程簡介 食品安全檢驗技術(shù) 面向 食品質(zhì)量與安全 專業(yè)本科生 主要介紹食品中危害殘留物質(zhì)的檢驗 本實驗課程為該課程的實驗教學環(huán)節(jié) 要求學生能根據(jù)檢驗內(nèi)容選擇合適的分析方法 根據(jù)檢測結(jié)果對食品安全性進行評價 共有學時數(shù)20學時 實驗教學內(nèi)容包括 蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學測定 等 實驗教學中包括技能型和綜合型實驗環(huán)節(jié) 以提高學生的安全檢測操作能力和綜合應(yīng)用能力 實驗一蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學法測定 綜合型 實驗二對蝦中氯霉素含量的酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測 技能型 實驗三魚體中組胺含量的分光光度法檢測 技能型 實驗四飲料中食用合成著色劑的測定 設(shè)計型 目錄 實驗?zāi)康?通過實驗進一步掌握蔬菜中農(nóng)藥殘留量生物化學法測定的基本原理和實驗方法 比較兩種常見的生物化學測定法 酶抑制率法和速測卡法的異同 培養(yǎng)學生綜合運用理論知識 分析和解決問題的能力 實驗一蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的生物化學法測定 實驗原理 生物化學測定方法根據(jù)其檢測手段又可分為速測卡法和酶抑制率法 速測卡法的原理是根據(jù)膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯 紅色 水解為乙酸和靛酚 藍色 有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用 使催化水解 變色的過程發(fā)生改變 由此可判斷出樣品中是否含有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在 酶抑制率法的原理是在一定條件下 有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用 其有抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān) 正常情況下酶催化乙酰膽堿水解生成膽堿 膽堿在顯色劑的作用下產(chǎn)生黃色物質(zhì) 該黃色在412nm處有特征吸收峰 用可見分光光度計或農(nóng)藥殘毒快速檢測儀進行測定 實驗步驟 1 速測卡法 紙片法 檢測 滴2 3滴洗脫液在菜葉正面近葉尖部分 用另一片菜葉滴葉處輕輕摩擦 取一片速測卡 將菜葉上洗出的水滴1滴在白色藥片上 靜置10min 將速測卡對折 用手捏3min 打開速測卡 白色藥片變藍色為正常反應(yīng) 不變藍或顯淡藍色說明有過量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留 每批同時做一片無農(nóng)藥對照 實驗步驟 2 酶抑制率法檢測 取2g切碎樣本 置提取瓶內(nèi) 加入20mL提取試劑 震蕩1 2min 倒出上清液 靜置3 5min 于平底小試管中加入50 L酶液 3mL樣品提取液 50 L顯色劑 在37 38 下培養(yǎng)30min 于待測的小試管內(nèi)加入50 L底物 倒入比色杯內(nèi) 進行儀器測定 同時做對照組 對照組的平底小試管中用3mL提取試劑代替樣本提取液 注意事項 1 速測卡法檢測中 當溫度低于37 時 酶反應(yīng)的速度隨之放慢 藥片加液后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長 延長時間的確定 應(yīng)以空白對照卡用手指捏3min時可以變藍 2 速測卡法檢測中 預(yù)反應(yīng)后藥片表面必須保持潤濕 3 采用酶抑制率法測定韭菜 生姜 蔥 蒜 辣椒 胡蘿卜等蔬菜中農(nóng)藥時 不要剪得太碎 浸提時間不能太長 對于這類蔬菜必要時可采取整株浸提 一些葉綠素含量較高的蔬菜也是如此 4 當溫度條件低于37 時 加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時間應(yīng)適當延長 延長時間的確定應(yīng)以膽堿酯酶空白對照測試3min的吸光度變化A0值在0 3以上 即可往下操作 5 當吸光度過大無法讀取時 說明測定溶液渾濁有干擾 實驗?zāi)康?進一步學習酶聯(lián)免疫試驗法的基本原理和實驗方法 確實掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定蝦肉中氯霉素含量的基本原理 實驗方法和結(jié)果的分析 實驗二對蝦中氯霉素含量的酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測 實驗原理 抗原與抗體能發(fā)生特異性的免疫化學反應(yīng) 以競爭性酶聯(lián)免疫反應(yīng)為例 酶標記抗原與樣品或標準體中的非標記抗原 氯霉素 具有相同的與抗體結(jié)合的能力 兩者競爭與固相載體包被的抗體結(jié)合反應(yīng) 洗滌多余的酶標抗原 加酶反應(yīng)的底物后 底物被酶催化顯色 故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析 在整個反應(yīng)當中 樣品中氯霉素含量越多 反應(yīng)顯色就越淡 反之 樣品中氯霉素含量越少 則顯色越深 實驗步驟 1 實驗準備 從冰箱取出試劑盒 將氯霉素標準溶液 濃縮萃取稀釋液 濃縮洗滌液 酶標記物 底物溶液及微量測試孔條置于室溫下回溫30min 配制原倍萃取稀釋液及洗滌液 用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液都分別用蒸餾水按1 9的比例稀釋 實驗步驟 2 樣品制備 將3g對蝦肉剪碎后放入50mL帶塞離心管中 加入6mL乙酸乙酯 用均質(zhì)機均質(zhì)約1min 再震蕩約30s 離心 3000rpm 10min 取2mL上清液至玻璃管中 于50 下氮氣吹干 于上述玻璃管中加入正己烷2mL 先將殘余物完全溶解后 再加入1mL原倍萃取稀釋液 震蕩約30s 離心 3000rpm 10min 用吸管吸去上層液及中間乳化層部分 棄掉 取下層液備用 實驗步驟 3 操作測定 取一定的微量測試孔條 于適當微孔中分別加入100 L標準溶液 六個濃度 在另外的微孔中加入100 L已完成前處理的樣品溶液 在每一微孔中加入50 L酶標記物 輕敲盤子四周 使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育1h 甩掉微孔中的反應(yīng)液 再將洗液加滿每一微孔后甩掉 重復(fù)洗3次 最后一次甩掉洗液后 在吸水紙上拍干 于每一微孔中加入底物溶液100 L后 輕敲盤子四周 使其充分混合 室溫下避光靜置溫育20min 于每一微孔中加入100 L反應(yīng)終止液 用酶標儀于波長450nm下判讀 注意事項 1 使用前先將試劑盒置于室溫下 回溫30min 回溫后 取出所需微量測試孔條 將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好 置于4 保存 2 濃縮萃取稀釋液和濃縮洗滌液使用前必須稀釋 3 每次吸取不同的液體時一定要換移液槍的吸頭 4 加樣時必須小心勿濺出微孔外 以免造成其他微孔的污染 加樣品或試劑時槍頭請勿接觸微孔 5 洗滌必須充分 重復(fù)3次 6 溫育時 要蓋上塑料片或標簽紙 置于暗處 溫育時間不夠不要隨意取出 7 試劑盒較貴且量很少 請準確量取 不要造成浪費 實驗?zāi)康?通過實驗進一步學習并掌握分光光度法檢測魚肉中組胺含量的實驗原理和實驗方法 培養(yǎng)學生分析和解決問題的能力 實驗三魚體中組胺含量的分光光度法檢測 實驗?zāi)康?魚體中的組胺用正戊醇提取后 與偶氮試劑反應(yīng)顯橙色 與標準系列比較定量 最低檢出濃度為5mg 100g 實驗步驟 1 組胺標準曲線的制備2 樣品中組胺的提取取10g切碎的魚肉于具塞錐形瓶中 加入20mL三氯乙酸 100g L 60 水浴中浸泡30min 過濾 取2 0mL濾液于分液漏斗中 加氫氧化鈉溶液 250g L 使呈堿性 pH9 10 加入3mL正戊醇 振搖5min 提取三次 合并三次的正戊醇提取液并用正戊醇定容至10 0mL 吸取2 0mL正戊醇提取液于分液漏斗中 用鹽酸 1 1 振搖提取3次 合并鹽酸提取液并定容至10 0mL 備用 實驗步驟 3 樣品中組胺的測定取1 0mL鹽酸提取液于10mL比色管中 加水至2mL 同時取0 00 0 20 0 40 0 60 0 80 1 00mL組胺標準使用液分別置于10mL比色管中 加水到1mL 再各加1mL鹽酸 1 1 標準管與樣品管各加3mL碳酸鈉溶液 50g L 3mL偶氮試劑 加水至10 0mL 混勻 放置10min后以零管調(diào)節(jié)零點 于480nm處測比色測定 并繪制標準曲線 注意事項 1 偶氮試劑必須臨配現(xiàn)用 2 用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的組胺時 必須用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值至堿性 使組胺游離便于提取 而在用鹽酸 1 1 提取時則必須使溶液呈酸性 使組胺能成為鹽酸鹽而溶于鹽酸提取液中 3 組胺測定過程中 標準管和測定各管的條件必須控制一致 保證顯色反應(yīng)的穩(wěn)定性和一致性 4 組胺與偶氮試劑的反應(yīng)須在弱堿性條件下進行 且反應(yīng)時間控制10min 實驗?zāi)康?通過本實驗 要求學生熟悉在食品安全性檢驗過程中 綜合運用所學理論知識進行實驗設(shè)計的總體原則和基本方法 掌握薄層色譜 分光光度法分離和測定合成著色劑的基本原理和實驗方法 進一步了解我國食品添加劑使用標準對食用合成色素的規(guī)定以及我國飲料中添加劑的使用情況 培養(yǎng)學生的實驗設(shè)計能力 獨立分析和解決問題的能力以及綜合運用知識的能力 實驗四飲料中食用合成著色劑的測定 設(shè)計型實驗 實驗內(nèi)容 學生自主選擇市售的各種飲料 根據(jù)所學的基礎(chǔ)理論知識 結(jié)合現(xiàn)有的實驗條件 通過查閱相關(guān)文獻資料 設(shè)計簡易可行的實驗方案 對飲料中莧菜紅 胭脂紅 檸檬黃 日落黃及亮藍5種食用合成著色劑進行提取 分離以及定性和定量檢測 根據(jù)我國食品添加劑使用衛(wèi)生標準 對市售飲料中合成著色劑的使用情況進行評價和比較 實驗要求 本實驗要求學生有目的地選擇市售飲料 每組至少選擇三種 每班至少選擇20種 根據(jù)所選飲料的性質(zhì)和實驗項目要求獨立設(shè)計實驗 準備和完成實驗并對實驗結(jié)果進行分析和討論 每組提供完整的實驗報告一份 綜合各組的實驗結(jié)果 每