雞冠花黃酮化合物對DM小鼠脾臟及巨噬細胞吞噬功能的影.doc

編號：04435 雞冠花黃酮化合物對DM小鼠脾臟及巨噬細胞吞噬功能的影響* 郭曉玲 李萬里 尉輝杰 張霞 李喜龍 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2002級臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院，453003） 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院微生物與免疫教研室（新鄉(xiāng)，453003） 摘要 目的 探討雞冠花黃酮類化合物對糖尿病動物模型(DM)小鼠脾臟及巨噬細胞吞噬功能的影響. 方法 選取小鼠27只，隨機分為3組：(1) 正常對照（Control）組；(2)糖尿病模型(DM)組；(3)糖尿病雞冠花黃酮化合物預(yù)防(CCF)組。DM組與CCF組腹腔單劑量注射鏈脲佐菌素（STZ）65mg/kg,制成糖尿病模型小鼠，對照組僅注射等量枸櫞酸緩沖液。CCF組用雞冠花黃酮類化合物（100mgkg -1 d-1）灌胃，Control組和DM組僅給予等量自來水灌胃。實驗10周，分離小鼠脾臟并測脾重，計算脾重指數(shù)。做單核巨噬細胞外吞噬實驗，測吞噬百分數(shù)，吞噬指數(shù)。 結(jié)果： CCF組與DM組相比，體重升高，而脾重指數(shù)顯著降低(P0.05),單核巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬率及吞噬指數(shù)有所降低(P0.05)，而且各項指標(biāo)與Control組接近（無顯著性差異）。結(jié)論：補充雞冠花黃酮類化合物可調(diào)節(jié)糖尿病動物巨噬細胞吞噬的作用，可能有利于減少巨噬細胞激活所引起的免疫病理損傷，可用于糖尿病的預(yù)防。 關(guān)鍵詞 雞冠花黃酮 吞噬指數(shù) 糖尿病 *新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院大學(xué)生科研重點立項課題（2004）作者：郭曉玲（1983 ）女，河南安陽人，系新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)02級學(xué)生；李萬里（1956 ）男，醫(yī)學(xué)碩士，教授，主要從事糖尿病的發(fā)病機理與臨床研究Effects of Celosia Cristata Flavonoid on the Spleen and the Function of Macrophage Ph agocytosing in DM Mice Guo Xiaoling Li Wanli Wei Huijie Zhang Xia Li Xilong Department of 2002, the school of Basic Medical science,XinXiang Medicalcollege Department of Microbiology and Immuniology，XinXiang Medical College ( XinXiang ,453003)ABSTRACT Objective To study effect of the abstraction of the celosia cristata flavonoid on the spleen and the function of macrophage phagocytosing in DM mice. Methods Choose 36 mice and divide into 3 groups at random: (1)the normal group（control）; (2) the diabete model group (DM );(3) diabete + the celosia cristata flavonid group（CCF).Inject the streptozotocin(STZ) 65mg/kg with metred dose in celiac cavity in DM group and only the same quantity of caitrate buffer in control group. The CCF group are given celosia cristata flavonoid of 100mgkg -1 d-1 ,the DM froup and the Control group are only given the same quantity of water.Three groups are feeded with normal food and water. After 10 weeks , measure the spleen weight and the index of the spleen weight。 The experiment of macrophage phogocytosing measures the rate and the index. Results Compared with the DM group, the weight increases and the index of spleen weight decreases apparently(P0.05), the rate and the index of macrophage phagocytosing RBC decreases(P0.05); and all these items were close to the control group. Conclusion The celosia cristata flavonoid can adjust the function of macrophage of the diabete animals, may be good for reducing the immunity pathology damage caused by the active macrophage and prevent from diabete. Key words Celosia Cristata Flavonoid The index of spleen Diabete. 雞冠花是莧科青葙屬天然植物, 富含蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸、-胡蘿卜素、VB1、VB2 、VC及多種礦物質(zhì)和黃酮類化合物, 并具有止血、降血脂等藥理功能和抗疲勞等保健功能1。本研究探討雞冠花黃酮類化合物對糖尿?。―M）小鼠脾臟及巨噬細胞吞噬功能的影響。1 材料與方法11 材料 本學(xué)院實驗動物中心提供的健康昆明小鼠27只，雌性，體重191g，1月齡。 本學(xué)院實驗動物中心提供正常動物飼料。 本室于10月中下旬采收普通雞冠花的花序,除去種子和莖梗,烘干后粉碎備用。取粉碎研細后的花序用乙醚回流抽提7h,除脂。脫脂后的樣品再用95%乙醇于65水浴上提取6h,得乙醇提取液,蒸發(fā)干燥得粉劑2，溶解后再過濾除菌。美國Sigma公司出產(chǎn)的鏈脲佐菌素（Streptozotocin,STZ, C3H15N307），其它試劑為國產(chǎn)分析純。尿糖測定儀 SUPER GLUCOCARD（日本第一科學(xué)株式會社）1.2 動物分組及模型制備 昆明小鼠隨機分為3組, 每組枸櫞酸緩沖液9只：(1) 正常對照組（control）；(2)糖尿病(DM)組；(3)糖尿病雞冠花黃酮提取物預(yù)防(CCF)組。DM組和CCF組腹腔單劑量注射鏈脲佐菌素（STZ）65mgkg -1， control組小鼠注射等量的枸櫞酸緩沖液。在48-72h后DM組和CCF組小鼠全血血糖濃度均16.7mmol/L（尾靜脈采血測血糖濃度），制成糖尿病模型小鼠3。13方法 131 小鼠體重、脾重、脾重指數(shù) CCF組用雞冠花黃酮類化合物（100mgkg -1 d-1）灌胃，control組和DM組僅給予等量自來水灌胃。各組給予正常飼料(由本院動物試驗中心提供),自由飲水。實驗第10周3，5，測小鼠體重，分離小鼠測脾重，并計算脾重指數(shù)。 1.32 單核巨噬細胞體外吞噬實驗 實驗10w,各組動物腹腔注射8%淀粉肉湯液體1ml致敏, 4d后，腹腔注射10ml Hanks液,10 min后抽取腹腔液 5ml,離心沉淀，取上清液用硫代巴比妥酸比色法檢測MDA含量，取試管下部的腹腔細胞做單核巨噬細胞體外吞噬實驗, 將腹腔細胞滴加在潔凈的載玻片上， 用等量的1%雞紅細胞懸液滴加其上搖勻。置于玻璃平皿內(nèi)蓋好，并用膠帶密封, 于37水浴30min, 其間輕搖玻璃皿2次，取出載玻片，生理鹽水漂洗、固定、染色，觀察60個巨噬細胞（N），計數(shù)已吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)（n）和所吞噬的雞紅細胞總數(shù)(m)。按下式計算吞噬百分率（a）： a = n/N 100%， 及吞噬指數(shù)（k）: k=m/n。1.4 統(tǒng)計學(xué)方法：用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，組間進行t檢驗。2 結(jié)果2.1 小鼠體重、脾重、脾重指數(shù) DM組體重低于Control組（P0.05），但脾重指數(shù)顯著高于Control組（P0.01），CCF組與DM組相比體重增加（P0.01），脾重指數(shù)顯著降低(P0.05)，CCF組與Control組比較各項指標(biāo)無顯著差異，單純比較脾重各組間無顯著差異，見表1。表1 動物體重、脾重、脾重指數(shù) ()Tab1 the body weight, spleen weight and index of spleen of the miceGroup體重（g）脾重(mg)脾重指數(shù)(mg/g)Control組35.442.07 a202.6721.256.7420.735 bDM組32.671.87213.5625.907.8251.077CCF組35.781.56 b195.7831.066.4391.239 a與DM比：a P0.05 ; b P0.012.2 單核巨噬細胞體外吞噬雞紅細胞的能力 DM組與control組比，小鼠單核巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬率顯著增高（P0.01），吞噬指數(shù)也顯著增加（P0.05）， CCF組與DM組比單核巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬率及吞噬指數(shù)有所降低（P0.05）,（表2）。表2 單核巨噬細胞體外吞噬紅細胞百分數(shù)與吞噬指數(shù)Tab 2 Phagocytotic function of Mononuclear macrophage of DM mice in vitro ()Group吞噬率(%)吞噬指數(shù)Control組31.667+7.993b1.588+0.420aDM組39.074+3.8292.129+0.354CCF組30.741+5.780b1.729+0.364b與 DM組比: a P0.05 ; b P0.01,3 討論糖尿病是一種常見的內(nèi)分泌功能障礙性疾病。常可產(chǎn)生許多并發(fā)癥 ,在其并發(fā)癥的形成中 ,巨噬細胞參與其多個環(huán)節(jié)。已有實驗證實：在高糖環(huán)境下 ,巨噬細胞對CSF-1刺激增生反應(yīng)能力增強 ,巨噬細胞與糖基化白蛋白一起培養(yǎng)可導(dǎo)致某些細胞因子的釋放如TNF、IL-1 ,這些因子可導(dǎo)致細胞生理功能紊亂而產(chǎn)生許多并發(fā)癥 ,特別是參與腎臟并發(fā)癥的發(fā)生。動物在糖尿病狀態(tài)下 ,巨噬細胞釋放血管生長因子并刺激內(nèi)皮細胞增生之能力增強 ,由此而導(dǎo)致糖尿病的微血管病變 (包括腎臟及視網(wǎng)膜病變 )。糖尿病時巨噬細胞處于激活狀態(tài)。巨噬細胞被激活后 ,其吞噬作用增強。在糖尿病大鼠,巨噬細胞通過產(chǎn)生NO抑制脾臟淋巴細胞對有絲分裂原的增殖反應(yīng) ,此可能與糖尿病人易發(fā)生感染有關(guān)2。陳國榮等人研究表明糖尿病大鼠腹腔及肺泡巨噬細胞對中性紅的吞噬能力均大于對照組 ,進一步說明在糖尿病發(fā)病過程中巨噬細胞處于激活狀態(tài)。此激活的巨噬細胞通過多種途徑參與糖尿病并發(fā)癥的形成5。有研究表明一些植物黃酮類可促進糖尿病動物糖原恢復(fù)正常水平，增加細胞、組織和靶器官對糖的攝取，糾正糖代謝紊亂。桑葉富含黃酮類，將200 mg/kg桑葉提取物腹腔注射于STZ小鼠，可促進外周細胞利用葡萄糖。楊梅素可促進脂肪細胞對糖的攝取。由于炎癥細胞浸潤可導(dǎo)致胰腺細胞損壞，給胰島素依賴糖尿病大鼠模型用番葉木苷500mg，結(jié)果顯示其抗炎、抗自由基及改善血管通透性的作用，與未給藥組有明顯差別。金雀異黃素、大豆苷元、大豆黃酮苷也顯示出一定的抗炎作用。目前，對黃酮類化合物抗糖尿病及其并發(fā)癥藥理作用研究大多在實驗階段，臨床試驗僅是少部分。黃酮類化合物藥源開發(fā)，提取新的有效成分及藥理藥效，使臨床應(yīng)用范圍擴張，國內(nèi)外都十分重視。天然植物或藥物中的黃酮類化合物毒性小，不僅可降低血糖，且可抑制并發(fā)癥的發(fā)展。近年來植物黃酮類抗糖尿病及其并發(fā)癥的研究狀況表明, 植物黃酮類具有一定的抗氧化、抑制 -糖苷酶、擬胰島素作用、抗炎、抑制醛糖還原酶、抑制蛋白糖基化等作用5。 本研究中DM組體重低于正常對照組，但脾重、脾重指數(shù)增加，并且巨噬細胞的吞噬功能處于激活狀態(tài)，顯著高于正常對照組，與DM組相比CCF組脾重、脾重指數(shù)顯著降低，單核巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬率及吞噬指數(shù)有所降低，與正常對照組接近。提示雞冠花黃酮類化合物具有調(diào)節(jié)糖尿病動物巨噬細胞的吞噬作用，可能有利于減少巨噬細胞激活所引起的免疫病理損傷。其作用機理與雞冠花中所含的抗氧化、調(diào)節(jié)機體免疫功能的類黃酮生物活性因子有關(guān)1有進一步研究的必要。1. 翁德寶 ,汪海峰 ,翁佳穎 .普通雞冠花序中黃酮類化合物的研究 J.植物學(xué)通報 , 2000, 17(6):565-568. 2. KOBAYASHI S,L UO B,OKABE M,et al. The diabetic state increase the activity but not the number of peritoneal macrophage in the GK rats promoting the tube