骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究.pdf

蘇州大學(xué) 碩士學(xué)位論文 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞 成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究 姓名 段祥 申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別 碩士 專(zhuān)業(yè) 生物化學(xué)與分子生物學(xué) 指導(dǎo)教師 張煥相 20070501 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞 成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞 成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究 作者 段祥 學(xué)位授予單位 蘇州大學(xué) 相似文獻(xiàn) 10條 相似文獻(xiàn) 10條 1 期刊論文 王志順 王江泳 王保芝 王琳 劉長(zhǎng)安 王麗 劉貴生 Wang Zhi shun Wang Jiang yong Wang Bao zhi Wang Lin Liu Chang an Wang Li Liu Gui sheng 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的超微結(jié)構(gòu)改變 中國(guó)組 織工程研究與臨床康復(fù)2009 13 1 背景 目前尚缺乏骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其誘導(dǎo)分化后成骨細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的觀察 目的 采用全骨髓培養(yǎng) 貼壁篩選法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 誘 導(dǎo)其向成骨細(xì)胞方向分化 利用光鏡和電鏡觀察誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)分化細(xì)胞的細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 設(shè)計(jì) 時(shí)間及地點(diǎn) 觀察實(shí)驗(yàn) 于2007 03 2008 04在河北醫(yī) 科大學(xué)人體解剖教研室和白求恩國(guó)際和平醫(yī)院骨科完成 材料 成年新西蘭大白兔由自求恩國(guó)際和平醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 Hitachi S 3500N型掃描電鏡 和Hitachi 7500型透射電鏡 方法 從新西蘭大白兔骼后上嵴處抽取骨髓 經(jīng)原代及傳代培養(yǎng)后 取部分第3代細(xì)胞加入誘導(dǎo)劑 誘導(dǎo)劑為10 mmol L 甘油 磷酸鈉 10 8 mmol L地塞米松 50 mg L維生素C 培養(yǎng)2周后 誘導(dǎo)和未加誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行堿性磷酸酶 骨形態(tài)發(fā)生蛋白和鈣化結(jié)節(jié)檢測(cè) 主要 觀察指標(biāo) 光鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其誘導(dǎo)分化后成骨細(xì)胞的一般形態(tài)學(xué)特征 電鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和成骨細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 結(jié)果 培養(yǎng)的 第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 其堿性磷酸酶染色呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng) 鈣化結(jié)節(jié)染色和骨形態(tài)發(fā)生蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè) 均呈現(xiàn)陰性結(jié)果 經(jīng)向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化后 其堿性磷酸酶染色 鈣化結(jié)節(jié)染色和骨形態(tài)發(fā)生蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè) 均呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng) 光鏡和掃描電鏡觀察顯示 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞大部分呈長(zhǎng)梭形 少量呈星形 經(jīng)向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化后 細(xì)胞體積增大 更加飽滿 似魚(yú)群樣排列 透射電鏡觀察顯示 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞器較豐富 向成骨細(xì)胞誘導(dǎo) 分化后 其線粒體明顯增多 出現(xiàn)較多的基質(zhì)小泡 髓樣體和空泡狀結(jié)構(gòu) 結(jié)論 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為胞漿中出現(xiàn)增多 的基質(zhì)小泡 髓樣體和空泡狀結(jié)構(gòu) 2 學(xué)位論文 梁文杰 豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后免疫原性的實(shí)驗(yàn)研究 2007 研究背景及意義 嚴(yán)重創(chuàng)傷 感染 腫瘤等原因所致的骨缺損在臨床治療中非常常見(jiàn) 目前常用的治療方法是植骨術(shù) 而嚴(yán)重的骨缺損用現(xiàn)有的方 法難以獲得滿意的療效 骨組織工程的興起為解決大段骨缺損的難題提供了新的途徑 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 mesenchymal stem cell MSCs 被認(rèn)為是骨組 織工程最佳的種子細(xì)胞 因?yàn)檫@種細(xì)胞取材方便 可通過(guò)穿刺獲得 創(chuàng)傷小 取材后并發(fā)癥少 細(xì)胞培養(yǎng)增殖快 在體內(nèi)外成骨誘導(dǎo)環(huán)境下可分化為骨 組織 而且具有多向分化潛能 此外 MSCs也容易分離和培養(yǎng) 盡管自體MSCs或成骨細(xì)胞用于動(dòng)物及臨床個(gè)體化治療已經(jīng)取得了良好的結(jié)果 但MSCs在 骨髓中含量很少 并隨著年齡的增長(zhǎng)減少 現(xiàn)有方法體外迅速擴(kuò)增困難 而且一些自身免疫性疾病患者 其MSCs增殖能力明顯減弱 隨著培養(yǎng)代數(shù)增加 可能出現(xiàn) 反分化 現(xiàn)象和致瘤性 從而失去了細(xì)胞應(yīng)有的功能和安全性 因此 自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用會(huì)受來(lái)源和數(shù)量限制 難以滿足臨床 隨取隨用 的要求 建立同種異體MSCs種子細(xì)胞庫(kù)是解決這些問(wèn)題的捷徑 也是組織工程從實(shí)驗(yàn)室走向產(chǎn)業(yè)化的重要前提 近年來(lái) 國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn) MSCs具有免疫調(diào)節(jié)作用 已往低等級(jí)動(dòng)物模型也證明同種異體種子細(xì)胞及其構(gòu)建的組織工程肌腱 軟骨 骨組織植入體內(nèi)免疫反應(yīng)輕微 不足以影響工 程化組織植入體內(nèi)后的修復(fù)功能 因此 同種異體骨組織工程研究前景充滿潛力和希望 目的 1 豬骨髓分離培養(yǎng)MSCs并在體外誘導(dǎo)成骨細(xì)胞 并對(duì)其細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行觀察 探討MSCs最佳的培養(yǎng)方法和條件 2 研究MSCs成骨誘導(dǎo) 分化后在不同條件下對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞增殖的影響及細(xì)胞因子分泌情況 研究MSCs免疫原性及 IFN 對(duì)其免疫原性的影響 探討MSCs免疫調(diào)節(jié)機(jī)制 為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供依據(jù) 3 成骨誘導(dǎo)分化后MSCs與脫鈣骨基質(zhì)材料復(fù)合構(gòu)建組織工程骨 植入豬皮下并和單純脫鈣骨基質(zhì)材料植入進(jìn)行比較 以了解同 種異體組織工程骨在體內(nèi)的免疫排斥反應(yīng)程度及異位成骨能力 從而了解以MSCs為種子細(xì)胞的同種異體組織工程骨移植的可行性 方法 1 豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性 1 無(wú)菌條件下在小香豬髂嵴處穿刺抽取2 5 ml骨髓 經(jīng)密度梯度離心分離提純M S C s 分別培養(yǎng)在含 5 胎牛血清的 A DMEM培養(yǎng)液和10 胎牛血清F12 DMEM培養(yǎng)液里 觀察第3d 第5 d的CFU F數(shù)量 最大傳代次數(shù) 細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí)間 FACS檢測(cè)第3代細(xì)胞 的CD14 CD29 CD44 CD45 SLA SLA 表達(dá) 2 比較MSCs及DOC細(xì)胞貼壁率 生長(zhǎng)曲線 生長(zhǎng)周期 3 用堿性磷酸酶染色 Von Kossa染色 茜 素紅法 骨鈣素免疫組化染色鑒定成骨誘導(dǎo)分化后的MSCs 2 豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后免疫原性實(shí)驗(yàn)研究 1 以未分化的骨髓閭充質(zhì)干細(xì) 胞為對(duì)照 采用流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測(cè)未誘導(dǎo) 成骨誘導(dǎo)的MSCs MSCs IFN DOC IFN SLA分子的表達(dá) 2 采用RT PCR技術(shù)分別檢測(cè)DOC 未分化 的MSCs MSCs IFN 組 DOC IFN 的SLA基因表達(dá)情況 3 采用混合淋巴反應(yīng)觀察 不同數(shù)量級(jí)的DOC對(duì)PBMC增殖的影響 DOC對(duì)經(jīng)絲分裂原刺激的 PBMC增殖的影響 DOC經(jīng)IFN 預(yù)處理后體外對(duì)單向混合淋巴反應(yīng)體系影響 DOC經(jīng)IFN 預(yù)處理后體外對(duì)雙向混合淋巴反應(yīng)體系的影響 4 檢測(cè) MSCs和DOC未經(jīng)過(guò)和經(jīng)過(guò)IFN 處理后其培養(yǎng)上清TGF 1和IL 10的分泌情況3 同種異體組織工程骨豬皮下植入免疫排斥及異位成骨實(shí)驗(yàn)研究 1 對(duì)新鮮 豬脛骨采用脫脂 脫鈣 脫蛋白方法制備豬DB M材料并在光鏡下和電鏡下觀察形態(tài)學(xué)和組織學(xué)結(jié)構(gòu) 2 體外組織工程骨構(gòu)建并在光鏡下和電鏡下細(xì)胞附 著 生長(zhǎng) 基質(zhì)分泌情況 3 以DBM材料為對(duì)照 將同種異體組織工程骨植入15頭免疫功能健全的異體小香豬背側(cè)脊柱旁左側(cè)皮下作為實(shí)驗(yàn)組 對(duì)側(cè)植 入單純的脫鈣骨基質(zhì)豬皮下 采用HE和Masson 染色觀測(cè)1w 2w 4w 8w 12w異位成骨情況 并用ELISA法檢測(cè)術(shù)后局部組織和外周血1w 2w 4w 8w 12w的IL 2及其TNF 表達(dá)水平 結(jié)果 1 豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及成骨誘導(dǎo)分化后生物學(xué)特性 1 在A DMEM與F12 DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)的MSCs具有相同特征 細(xì)胞呈紡錘形或三角形 類(lèi) 似纖維細(xì)胞 旋渦樣排列 第3代細(xì)胞FAC S檢測(cè)結(jié)果顯示 分離培養(yǎng)的細(xì)胞CD29 CD44 SLA 表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性 而CD14 CD34 SLA 陰性 與F12 DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)的MSCs相比 A DMEM培養(yǎng)的MSCs 原代培養(yǎng)3d 5d貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞克隆數(shù)較多 原代細(xì)胞生長(zhǎng)至80 100 所需時(shí)間較短 最大傳代次數(shù) 多 2 MSCs及DOC細(xì)胞貼壁率無(wú)明顯差別 生長(zhǎng)曲線MSCs倍增時(shí)間為36 8h DOC為38 9h MSCs和DOC細(xì)胞周期比較 MSCs細(xì)胞周期中S G比例較多 G比例較少 表明 MSCs生長(zhǎng)增殖速度較DOC快 3 成骨誘導(dǎo)14d Von Kossa 染色見(jiàn)細(xì)胞間質(zhì)有大量的鈣鹽沉積 ALP染色顯示細(xì)胞呈85 陽(yáng)性 茜素紅法見(jiàn)到團(tuán)塊狀細(xì)胞中有鈣鹽沉積 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)見(jiàn)到骨鈣素陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞 2 豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化后免疫原性實(shí)驗(yàn)研究 1 FACS檢測(cè)結(jié)果顯示 MSCs IFN 組 DOC IFN 組sLA 表達(dá)上調(diào) P 0 05 SLA 表達(dá)明顯上調(diào) P 0 01 2 RT PCR結(jié)果顯示 DOC組 MSCs IFN 組 DOC 1FN 組SLA P1 P14 表達(dá)上調(diào) P 0 05 SLA DRA DRB DQA DQB 表達(dá)明顯上調(diào) P 0 01 3 大于1 10數(shù)量 級(jí)以上DOC不能刺激PBMC增殖 低于1 10數(shù)量級(jí)對(duì)PBMC有增殖作用 抑制作用與細(xì)胞數(shù)量成正相關(guān) DOC能抑制經(jīng)PHA刺激的PBMC增殖 DOC經(jīng) IFN 預(yù)處理后仍然能抑制PHA和Con A刺激的PBMC增殖 DOC經(jīng)IFN 預(yù)處理后體外對(duì)雙向混合淋巴反應(yīng)體系 hPBMC pPBMC PBMC增殖有抑制作用 4 MSCs和DOC均能分泌TGF 1和IL 10 DOC分泌的IL 10水平高于MSCs P 0 01 但經(jīng)IFN 刺激后 MSCs分泌的TGF 1水平明顯高于未經(jīng)IFN 刺激 的MSCs 而經(jīng)IFN 刺激后DOC分泌的TGF 1明顯低于未經(jīng)IFN 刺激的DOC 3 同種異體組織工程骨豬皮下植入免疫排斥及異位成骨實(shí)驗(yàn)研究 1 制備 豬DBM材料保持天然的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) 2 成骨誘導(dǎo)分化后MSCs與脫鈣骨基質(zhì)材料復(fù)合7天顯示細(xì)胞附著于材料表面和孔隙內(nèi)壁 并分裂增殖數(shù)目倍增 SEM觀 察 細(xì)胞排列規(guī)則 周?chē)屑?xì)胞外基質(zhì)分泌 3 所有小香豬術(shù)后無(wú)發(fā)熱 畏寒等全身反應(yīng) 取材所見(jiàn)術(shù)后1 2 4周雙側(cè)植入物周?chē)?jiàn)輕微組織反應(yīng) 但于8 12周逐漸消失 組織學(xué)觀察 異位成骨以軟骨內(nèi)化骨為主 結(jié)論 1 豬MSCs成骨能力強(qiáng) 在成骨誘導(dǎo)條件下可向成骨細(xì)胞分化 表達(dá)堿性磷酸酶和骨鈣素 具有作為種子細(xì)胞的潛力 2 體外實(shí)驗(yàn)表明豬 MSCs的誘導(dǎo)成骨后仍保持低免疫原性 在炎前細(xì)胞因子刺激下其免疫原性可能增強(qiáng) 但其可能通過(guò)分泌一些具有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子來(lái)調(diào)控免疫反 應(yīng) 3 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明同種異體組織工程骨植入具有較好的異位成骨效果 但早期可引發(fā)宿主輕微的免疫反應(yīng) 但隨時(shí)間延長(zhǎng) 免疫反應(yīng)逐漸消失 總之 同種異體MSCs作為種子細(xì)胞與DBM材料復(fù)合培養(yǎng)可能是體外組織工程骨構(gòu)建的一種較好選擇 3 期刊論文 龔宜超 董雅娟 柏學(xué)進(jìn) 封紀(jì)武 岳福杰 張廷龍 沈召蓮 Gong Yi chao Dong Ya juan Bai Xue jin Feng Ji wu Yue Fu jie Zhang Ting long Shon Zhao lian 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化及在細(xì)胞工程和基因 工程中的應(yīng)用 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)2008 12 25 學(xué)術(shù)背景 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一類(lèi)具有多向分化潛能的成體干細(xì)胞 其體外誘導(dǎo)分化的不同組織對(duì)于骨及軟骨組織工程 心血管疾病 神經(jīng)系統(tǒng)疾 病 免疫系統(tǒng)疾病等的治療具有廣闊的應(yīng)用前景 目的 總結(jié)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化的研究進(jìn)展 檢索策略 由該論文的研究人員應(yīng)用計(jì)算機(jī)檢索 Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)1998 01 2008 01期間的相關(guān)文獻(xiàn) 檢索詞為 Mesenchyrmal stem cell differtation neuron osteoblast Chondrocyte adipocyte sarcoblast endotheliocyte Tissue repair gene therapy 并限定文章語(yǔ)言種類(lèi)為 English 同時(shí)檢索萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)2002 01 2008 01期間的相關(guān)文獻(xiàn) 檢索詞為 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 誘導(dǎo)分化 神經(jīng)細(xì)胞 基因治療 共檢索到52篇文獻(xiàn) 對(duì)資料 進(jìn)行初審 納入標(biāo)準(zhǔn) 與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化密切相關(guān) 同一領(lǐng)域選擇近期發(fā)表或在權(quán)威雜志上發(fā)表的文章 排除標(biāo)準(zhǔn) 重復(fù)性研究 27篇文 獻(xiàn)符合納入標(biāo)準(zhǔn) 排除的25篇為內(nèi)容陳舊或重復(fù)文獻(xiàn) 文獻(xiàn)評(píng)價(jià) 文獻(xiàn)的來(lái)源主要是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化方面的隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn) 5篇涉及體外誘導(dǎo) 分化為神經(jīng)細(xì)胞的研究 4篇涉及體外誘導(dǎo)分化為成骨組織的研究 1篇涉及體外誘導(dǎo)分化為軟骨組織的研究 2篇涉及體外誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞的研究 2篇 涉及體外誘導(dǎo)分化為成肌細(xì)胞研究 3篇涉及體外誘導(dǎo)分化為內(nèi)皮細(xì)胞的研究 3篇涉及體外誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的研究 7篇涉及其在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 資料綜合 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有自我更新 增殖和多向分化潛能 在不同生物環(huán)境和細(xì)胞因子的作用下可分化為不同類(lèi)型的細(xì)胞 研究表明 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在 體外適宜的誘導(dǎo)條件下可以分化為神經(jīng) 成骨 軟骨 脂肪 心肌 肝臟等多種細(xì)胞 而且骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在組織修復(fù)和基因治療方面的應(yīng)用已取得較 大進(jìn)展 在人類(lèi)醫(yī)學(xué)上具有廣闊的應(yīng)用前景 結(jié)論 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞被認(rèn)為是細(xì)胞工程和基因工程理想的種子細(xì)胞 并開(kāi)啟了臨床應(yīng)用干細(xì)胞治療的時(shí)代 4 學(xué)位論文 馬俊偉 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究 2009 血管化和骨再生是骨愈合過(guò)程中兩個(gè)最基本環(huán)節(jié) 骨組織工程學(xué)的迅速發(fā)展 為骨再生和脊柱融合提供了合乎生物學(xué)原則的思路 當(dāng)前該領(lǐng)域的研 究主要集中于種子細(xì)胞的獲取和誘導(dǎo)條件的探索 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 marrow mesenchymal stem cells MSCs 因其具有低免疫原性 多向分化及高增殖 潛能而倍受關(guān)注 我們實(shí)驗(yàn)將探討用血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 VEGF165 誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞 為組織工程提供新的種子細(xì)胞 并探 討試驗(yàn)條件 目的 研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 MSCs 向血管內(nèi)皮細(xì)胞的誘導(dǎo)分化 為復(fù)雜器官組織工程血管化及細(xì)胞移植修復(fù)損傷組織提供理想的細(xì)胞來(lái)源 探討 不同濃度的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 VEGF165 對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的影響 方法 1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞取自Wistar大鼠 體重100g左右 三周齡 雌雄不限 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 試劑為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 VEGF165 兔抗鼠VEGFR1 Flt1抗體 濃縮型免疫組化試劑盒 2采用密度梯度離心法與貼壁分離法相結(jié)合分離 純化大鼠BMSCs 用含10 胎牛血清的 L DMEM培養(yǎng)至第三代作為種子細(xì)胞 對(duì)照組A組不加生長(zhǎng)因子 實(shí)驗(yàn)組B C D E組分別加入5ng ml 10ng ml 50ng ml 100ng ml VEGF165 培養(yǎng) 24小時(shí)后各組間行細(xì)胞增殖比較 14天后終止培養(yǎng) 觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變 并對(duì)各組行血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1 VEGFR1 Flt1 免疫細(xì)胞化學(xué)染 色 結(jié)果 對(duì)于體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 含不同濃度VEGF165的各組培養(yǎng)液對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖作用大小不同 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 并且含 VEGF165的各組培養(yǎng)液與對(duì)照組比較 其能夠誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化 其誘導(dǎo)后的陽(yáng)性細(xì)胞比例分別為2 1598 0 2555 30 3591 5 1687 44 7643 2 1011 56 0111 2 9603 86 2438 0 9663 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 且實(shí)驗(yàn)組各組之間誘導(dǎo)效果不同 結(jié)論 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有向血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化的能力 可以作為組織工程的種子細(xì)胞 VEGF165可以促進(jìn)骨髓間充值干細(xì)胞增殖和向血管內(nèi) 皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化 并且其促增殖作用和誘導(dǎo)分化作用存在著劑量依賴關(guān)系 5 期刊論文 張建富 孟慶海 金澎 劉廣義 Zhang Jian fu Meng Qing hai Jin Peng Liu Guang yi 全骨髓貼壁法 獲純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)2008 12 12 目的 來(lái)源于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的神經(jīng)干細(xì)胞是最近研究的一個(gè)熱點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)擬進(jìn)一步驗(yàn)證通過(guò)全骨髓貼壁法分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并誘導(dǎo)分化為 神經(jīng)干細(xì)胞的效率 并對(duì)其的體內(nèi)外標(biāo)記進(jìn)行了觀察 方法 實(shí)驗(yàn)于2006 11 2007 05在青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腦血管病研究所完成 實(shí)驗(yàn)材料 選取出 生4周左右Wistar大鼠 雌雄不拘 SPF級(jí) 體質(zhì)量200 g左右 由青島市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物處置符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)方 法 選用出生4周左右Wistar大鼠 由其股骨和脛骨分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 加堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和表皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)其分化為神經(jīng)干細(xì)胞 并進(jìn) 行免疫組織化學(xué)鑒定 以5 溴脫氧尿嘧啶核苷 BrdU 標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞 在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞免疫組織化學(xué)和免疫熒光鑒定 將標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞定位注入大 鼠基底節(jié)區(qū) 1周后取腦作石蠟切片 進(jìn)行免疫組織化學(xué)和免疫熒光染色 結(jié)果 獲得了較純化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 經(jīng)誘導(dǎo)72 h后 部分細(xì)胞增殖分裂成小圓 形 呈團(tuán)簇狀半懸浮狀態(tài) 繼續(xù)培養(yǎng)72 h可見(jiàn)細(xì)胞呈現(xiàn)典型神經(jīng)元樣改變 細(xì)胞伸出兩個(gè)或多個(gè)突起 胞體呈多角形或不規(guī)則形 折光性較強(qiáng) 細(xì)胞突起之間 相互連接成網(wǎng)狀 可見(jiàn)細(xì)胞核及核仁 經(jīng)誘導(dǎo)后有巢蛋白 神經(jīng)元特異性烯醇化酶 膠質(zhì)纖維酸性蛋白陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá) 采用BrdU摻入DNA合成期的神經(jīng)干細(xì) 胞 1周后體內(nèi)外標(biāo)記陽(yáng)性率 85 結(jié)論 采用全骨髓貼擘法可獲得較純化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 其在適宜的誘導(dǎo)分化條件下可誘導(dǎo)分化神經(jīng)干細(xì)胞 BrdU可 作為神經(jīng)干細(xì)胞體內(nèi)示蹤的理想標(biāo)記物 6 學(xué)位論文 金曄 肝臟富集轉(zhuǎn)錄因子在體外肝細(xì)胞分化過(guò)程中的作用研究 2008 研究背景和目的 肝臟是體內(nèi)進(jìn)行物質(zhì)代謝的重要器官 其中肝細(xì)胞約占肝臟組織的80 肝細(xì)胞特異表達(dá)一系列編碼血漿蛋白 凝血因子和多種肝臟解毒作用及維 持糖類(lèi)物質(zhì) 脂肪和膽固醇代謝相關(guān)酶的功能基因 肝細(xì)胞特異表達(dá)基因的功能分析研究發(fā)現(xiàn)這些基因的調(diào)節(jié)區(qū)由結(jié)合不同家族的肝細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的順 式作用元件組成 不同家族的肝臟富集轉(zhuǎn)錄因子形成蛋白復(fù)合物協(xié)同調(diào)控肝細(xì)胞特異基因表達(dá)的啟動(dòng)和維持 肝細(xì)胞核因子4 HNF4 在很多肝細(xì)胞功能基因的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子上有結(jié)合活性 可以直接調(diào)控多達(dá)40 左右的肝細(xì)胞特異基因的表達(dá) 此外 HNF4 還可以通過(guò)調(diào)控多種其它家族肝細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)間接調(diào)節(jié)肝細(xì)胞功能 因此 轉(zhuǎn)錄因子HNF4 很可能位于肝細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子調(diào) 控網(wǎng)絡(luò)的上游并對(duì)于肝細(xì)胞功能基因的表達(dá)起核心調(diào)控作用 目前 對(duì)于HNF4 的功能研究集中在胚胎肝臟發(fā)育和成熟肝細(xì)胞功能維持方面 但是對(duì)于 肝細(xì)胞分化過(guò)程尤其是體外誘導(dǎo)分化過(guò)程中HNF4 的表達(dá)和尚未見(jiàn)報(bào)道 骨髓干細(xì)胞 bone marrow stem cells BMSCs 可以分化為肝前體細(xì)胞和肝細(xì)胞 并具有取材容易 增殖能力強(qiáng) 體外培養(yǎng) 傳代及擴(kuò)增容易的特點(diǎn) 可以作為研究體外誘導(dǎo)分化肝細(xì)胞的可靠來(lái)源 但是骨髓干細(xì)胞誘導(dǎo)向成熟肝細(xì)胞分化的具體誘導(dǎo)機(jī)制目前尚不清楚 因此 本研究在骨髓間充質(zhì)干 細(xì)胞體外向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行肝細(xì)胞標(biāo)志基因及轉(zhuǎn)錄因子mRNA表達(dá)水平檢測(cè) 在此基礎(chǔ)上應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制轉(zhuǎn)錄因子HNF4 的轉(zhuǎn) 錄水平 并深入研究大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化過(guò)程中轉(zhuǎn)錄因子HNF4 調(diào)控的作用機(jī)制 深入了解細(xì)胞分化機(jī)制 并為臨床促進(jìn)肝細(xì) 胞分化增殖提供理論基礎(chǔ) 實(shí)驗(yàn)方法 1 提取大鼠骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)其向肝細(xì)胞分化 通過(guò)形態(tài)學(xué)表現(xiàn) ALB免疫熒光染色定位 半定量逆轉(zhuǎn)錄 聚合酶鏈反應(yīng) RT PCR 方法檢測(cè)肝細(xì)胞特征 性標(biāo)志ALB AFP的mRNA的表達(dá) 生化方法檢測(cè)白蛋白 尿素和ALT的在細(xì)胞培養(yǎng)液中的濃度以及PAS染色方法檢測(cè)細(xì)胞糖原合成能力來(lái)驗(yàn)證大鼠骨髓間充 質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)過(guò)體外誘導(dǎo)分化培養(yǎng)后是否具有成熟肝細(xì)胞的功能 2 應(yīng)用半定量RT PCR方法比較肝細(xì)胞分化過(guò)程中肝臟富集轉(zhuǎn)錄因子肝細(xì)胞核因子4 HNF4 CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白 和 C EBP 和C EBP 在 誘導(dǎo)分化組和對(duì)照組細(xì)胞中的mRNA表達(dá)水平和免疫熒光染色方法在熒光顯微鏡下觀察HNF4 細(xì)胞中的表達(dá)定位 獲得骨髓間充質(zhì)肝細(xì)胞向肝細(xì)胞體外誘 導(dǎo)分化過(guò)程中上述三種轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)特征 3 分別在大鼠骨髓干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化過(guò)程中的三個(gè)時(shí)間點(diǎn)應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制轉(zhuǎn)錄因子HNF4 的mRNA表達(dá) 應(yīng)用Realtime RT PCR及HNF4 免疫熒 光染色方法檢測(cè)HNF4 mRNA和蛋白水平的表達(dá) 檢驗(yàn)RNA干擾的抑制效果 同時(shí) 應(yīng)用Realtime RT PCR 細(xì)胞培養(yǎng)液生化檢測(cè) ALB免疫熒光染色和 PAS染色方法檢測(cè)HNF4 表達(dá)抑制對(duì)于誘導(dǎo)分化細(xì)胞的肝細(xì)胞特異基因ALB AFP和HNF1 的mRNA表達(dá)水平 白蛋白表達(dá)水平和分泌能力 合成尿素和儲(chǔ)存 糖原能力的影響 研究結(jié)果 1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化培養(yǎng)后細(xì)胞具有成熟肝細(xì)胞的形態(tài) 在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化培養(yǎng)的7天 14天 18天和 21天四個(gè)時(shí)間點(diǎn) 成熟肝細(xì)胞標(biāo)志ALB和AFP mRNA的表達(dá)水平明顯高于非誘導(dǎo)培養(yǎng)對(duì)照組細(xì)胞 p 0 05 應(yīng)用ALB的特異性抗體進(jìn)行的免疫熒光染色顯示 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在分化14天后 細(xì)胞質(zhì)中充滿了大量點(diǎn)狀 或顆粒狀的綠色的熒光染色 此外 誘導(dǎo)分化細(xì)胞產(chǎn)生白蛋白 尿素和ALT以及合成及儲(chǔ) 存糖原的功能要明顯強(qiáng)于對(duì)照組細(xì)胞 2 在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化培養(yǎng)細(xì)胞中 轉(zhuǎn)錄因子HNF4 C EBP 和C EBP mRNA均有表達(dá) 其中誘導(dǎo)分化組HNF4 和C EBP 在細(xì)胞分 化早期 C EBP 在分化晚期表達(dá)分別顯著高于對(duì)照組 p 0 05 在HNF4 mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組的誘導(dǎo)分化14天時(shí)間點(diǎn) 免疫熒光染色顯示誘 導(dǎo)分化組細(xì)胞有HNF4 特異染色定位于分化細(xì)胞核內(nèi) 而對(duì)照組細(xì)胞中并未觀察到細(xì)胞核內(nèi)有特異染色 3 在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的7天 14天和21天三個(gè)時(shí)間點(diǎn) 對(duì)誘導(dǎo)分化細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HNF4 的siRNA后 HNF4 的mRNA表達(dá)水平相比于正常誘導(dǎo)分化細(xì)胞降低了40 而HNF4 免疫熒光染色顯示轉(zhuǎn)染siRNA的細(xì)胞 核內(nèi)HNF4 的特異染色明顯減少 說(shuō)明轉(zhuǎn)染HNF4 siRNA有效抑制了誘導(dǎo)分化細(xì)胞中HNF4 mRNA和蛋白水平的表達(dá) 在HNF4 表達(dá)下調(diào)的細(xì)胞中 成熟 肝細(xì)胞標(biāo)志AFP和HNF1 的mRNA表達(dá)水平 尿素產(chǎn)生及糖原合成儲(chǔ)存能力顯著低于同時(shí)間點(diǎn)正常誘導(dǎo)分化細(xì)胞 另一個(gè)肝細(xì)胞標(biāo)志ALB mRNA和蛋白水平的 表達(dá)則僅在誘導(dǎo)分化早期受HNF4 的調(diào)控 而在誘導(dǎo)分化進(jìn)行至21天時(shí) ALB的mRNA和蛋白水平的表達(dá)水平都與HNF4 表達(dá)下調(diào)無(wú)關(guān) 研究結(jié)論 1 大鼠骨髓間充質(zhì)肝細(xì)胞在生長(zhǎng)因子HGF EGF bFGF 地塞米松和胰島素的誘導(dǎo)培養(yǎng)下可以分化為具有成熟肝細(xì)胞功能和形態(tài)的肝細(xì)胞樣細(xì)胞 可 以作為體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞的可靠模型 2 肝細(xì)胞分化過(guò)程中轉(zhuǎn)錄因子HNF4 C EBP 和C EBP 呈特征性時(shí)序表達(dá) 表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在向肝細(xì)胞分化時(shí) 肝細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表 達(dá)與細(xì)胞分化的啟動(dòng)和維持密切相關(guān) 3 HNF4 對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的肝細(xì)胞的特異標(biāo)志和大部分生理功能有直接和間接的調(diào)控作用 是體外誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成熟肝細(xì) 胞分化過(guò)程中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子 7 期刊論文 張海垠 馮繼 周益民 ZHANG Hai yin FENG Ji ZHOU Yi min 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞體外誘導(dǎo)分 化的研究進(jìn)展 國(guó)際生物醫(yī)學(xué)工程雜志2009 32 2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 BMSCs 是一種存在于人和動(dòng)物骨髓等組織中 具備有多向分化潛能的成體干細(xì)胞體系 其具有取材簡(jiǎn)便 易于體外培養(yǎng)擴(kuò)增 體內(nèi) 移植免疫排異反應(yīng)少 可自體移植避免倫理學(xué)爭(zhēng)議等眾多優(yōu)勢(shì) 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外一系列不同的實(shí)驗(yàn)方案中 被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞 這為神經(jīng)系統(tǒng) 受損傷后的修復(fù)和再生帶來(lái)了新希望 結(jié)合近幾年的研究進(jìn)展 對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化的各種方案及其可能機(jī)制作一 綜述 8 期刊論文 吳曉林 李冬民 馬德茂 張曉田 黃石 宋天保 WU Xiao Lin LI Dong Min MA De Mao ZHANG Xiao Tian HUANG Shi SONG Tian Bao 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化與標(biāo)記 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)2006 27 21 目的 探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 MSCs 在體外的誘導(dǎo)分化及5 溴脫氧尿嘧啶核苷 Brdu 標(biāo)記MSCs的可行性 方法 利用密度為1 073 kg L的percoll分離 骨髓的單個(gè)核細(xì)胞 體外培養(yǎng)與擴(kuò)增MSCs 取生長(zhǎng)良好的第3代細(xì)胞 用成骨細(xì)胞分化培養(yǎng)液培養(yǎng)21 d 型膠原免疫組化染色和堿性磷酸酶 AKP 組化染色 分別以濃度為5 10和15 mol L的Brdu溶液標(biāo)記MSCs 孵育12 24 48 72和96 h后免疫組化檢測(cè)Brdu 確定最佳標(biāo)記量和最佳標(biāo)記時(shí)間 結(jié)果 誘導(dǎo)分化第 21日 AKP染色呈強(qiáng)陽(yáng)色 型膠原免疫染色呈陽(yáng)性 10 mol L Brdu標(biāo)記MSCs的效果最好 隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng) Brdu標(biāo)記率逐漸增高 標(biāo)記72 h后標(biāo)記 率在90 以上 結(jié)論 MSCs在體外一定條件下可定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞 用Brdu標(biāo)記MSCs的最佳濃度為10 mol L 最佳時(shí)間是72 h 9 學(xué)位論文 劉沉濤 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化中免疫性發(fā)育的實(shí)驗(yàn)研究 2007 新生兒缺氧缺血性腦損傷 hypoxic ischemic brain damage HIBD 是由于圍產(chǎn)期各種因素導(dǎo)致的胎兒或新生兒缺氧 缺血引起腦組織損傷 盡管當(dāng) 今圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)迅速發(fā)展 但HIBD仍是引起新生兒死亡 影響新生兒正常發(fā)育 導(dǎo)致兒童腦癱 精神發(fā)育遲滯 學(xué)習(xí)障礙和癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)傷殘的主要原因 Spong 2005 目前臨床上缺少特異性的有效手段治療HIBD 韓玉昆 2000 間充質(zhì)干細(xì)胞移植為臨床治療HIBD開(kāi)辟了一條嶄新的途徑 但是 由于缺 氧 缺血損傷導(dǎo)致腦組織彌漫性病變 腦內(nèi)的動(dòng)態(tài)免疫平衡遭到破壞 是否會(huì)誘發(fā)對(duì)植入細(xì)胞的免疫排斥反應(yīng)呢 本試驗(yàn)旨在觀察骨髓MSCs向神經(jīng)細(xì)胞 誘導(dǎo)分化中的免疫學(xué)特性發(fā)育 以及HIBD模型小鼠腦內(nèi)移植后的免疫反應(yīng) 為骨髓MSCs移植治療新生兒缺氧缺血性腦病 hypoxic ischemic encephalopathy HIE 提供技術(shù)平臺(tái) 試驗(yàn)分為以下三個(gè)部分 一 骨髓MSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化中的免疫原性發(fā)育 目的 探討骨髓MSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化后的移植免疫表型及其對(duì)同種異體T細(xì)胞增殖的作用 方法 體外分離和培養(yǎng)人骨髓MSCs 用加入堿性成纖維生長(zhǎng)因子 basic fibroblast growth factor bFGF 和表皮生長(zhǎng)因子 epidermalgrowth factor EGF 的無(wú)血清培養(yǎng)基將MSCs誘導(dǎo)分化1周 2周 免疫熒光法和免疫印跡法進(jìn)行細(xì)胞性質(zhì)鑒定 將細(xì)胞分為未分化的MSCs組 MSCs組 MSCs向神 經(jīng)誘導(dǎo)分化1周的細(xì)胞組 Neu1組 和MSCs向神經(jīng)誘導(dǎo)分化2周的細(xì)胞組 Neu2組 流式細(xì)胞技術(shù)和免疫印跡法檢測(cè)各組細(xì)胞免疫表型 各組細(xì)胞分別與同 種異體的T細(xì)胞共培養(yǎng) 液閃儀檢測(cè)T細(xì)胞增殖 比較 IFN100U ml預(yù)處理48小時(shí)前后各組細(xì)胞的免疫表型和對(duì)T細(xì)胞的增殖作用 用spss11 0軟件包 及Exce17 0分析統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析 結(jié)果 原代分離的骨髓為形態(tài)不均一的細(xì)胞 經(jīng)傳代4次后 細(xì)胞形態(tài)均一 對(duì)傳4代以上的細(xì)胞行流式細(xì)胞儀檢測(cè) 結(jié)果示陽(yáng)性表達(dá) CD29 CD105 CD44 陰性表達(dá)CD34 CD14 CD45 說(shuō)明培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)志 而不表達(dá)造血干細(xì)胞 內(nèi)皮祖細(xì)胞的表面標(biāo)志 將MSCs加 入含bFGF EGF的DMEM F12 1 1 無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)分化 部分細(xì)胞5 7天后胞質(zhì)向胞核收縮 胞體變小 變成多角形和不規(guī)則形 14天后可見(jiàn)部分 回縮的胞體延縱軸伸出長(zhǎng)長(zhǎng)的突起 交織成網(wǎng)狀 間接免疫熒光法檢測(cè)顯示 誘導(dǎo)前部分骨髓MSCs表達(dá)nestin 基本不表達(dá)神經(jīng)元特異性烯醇酶 neuron specificenolase NSE 神經(jīng)微絲 neurofilament NF L 和膠質(zhì)纖維酸性蛋白 glial fibrillary acidic protein GFAP 誘導(dǎo)分化2周時(shí) 細(xì)胞表 達(dá)nestin NSE和NF L顯著增加 GFAP在誘導(dǎo)分化2周的細(xì)胞中仍基本不表達(dá) 免疫印跡法檢測(cè)得到相似結(jié)果 以上結(jié)果表明MSCs主要向神經(jīng)元分化 流 式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn) 誘導(dǎo)前MSCs組表達(dá)HLA 類(lèi)分子的經(jīng)典基因HLA A B C 不表達(dá)HLA 類(lèi)分子的經(jīng)典基因HLA DR和共刺激分子 誘導(dǎo)1周時(shí)和誘 導(dǎo)2周時(shí)HLA A B C HLA DR 和共刺激分子CD80表達(dá)增加 各組間 P 0 05 有顯著性差異 然而 流式細(xì)胞技術(shù)和免疫印跡檢測(cè)顯示誘導(dǎo)2周后CD40和 CD86仍無(wú)表達(dá) IFN預(yù)處理后 MSCs組 Neu1組和INeu2組表達(dá)HLA A B C和HLA DR表達(dá)明顯增加 與未經(jīng) IFN預(yù)處理的MSCs組 Neu1組和Neu2組 相比 HLA分子的表達(dá)差異有顯著意義 P 0 05 但是 流式細(xì)胞技術(shù)和免疫印跡法檢測(cè)均顯示 IFN預(yù)處理前后共刺激分子CD40 CD80和CD86表達(dá)無(wú) 明顯改變 各組細(xì)胞分別與同種異體T細(xì)胞共培養(yǎng)6天后 結(jié)果顯示MSCs抑制T細(xì)胞增殖 并且隨著MSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化 抑制作用明顯增強(qiáng) 各組間有顯 著性差異 P 0 05 結(jié)論 骨髓MSCs向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化后 細(xì)胞表達(dá)HLA分子和共刺激分子CD80增加 不能表達(dá)共刺激分子CD40和CD80 并且抑制T細(xì)胞增殖 提示細(xì) 胞免疫原性低 有成熟的趨勢(shì) 二 向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化中的骨髓MSCs對(duì)同種異體T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用 目的 探討骨髓MSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化后對(duì)同種異體T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用及其可能機(jī)制 方法 骨髓MSCs原代分離 培養(yǎng)并向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化 MSCs向神經(jīng)誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞分組同第一部分 體外分離同種異體T細(xì)胞 向植物血凝素 phytohemagglutinin PHA 刺激同種異體T細(xì)胞增殖的培養(yǎng)體系中 加入MSCs向神經(jīng)誘導(dǎo)分化后的各組細(xì)胞 進(jìn)行共培養(yǎng) 比較 IFN100U ml預(yù)處理 48小時(shí)前后各組細(xì)胞對(duì)PHA刺激同種異體T細(xì)胞增殖的作用 采用transwell培養(yǎng)板分隔MSCs向神經(jīng)誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞和PHA刺激的同種異體T細(xì)胞培養(yǎng)體系 均用 液閃儀檢測(cè)T細(xì)胞增殖 結(jié)果 與Con組比較 MSCs組 Neur1組和Neur2組細(xì)胞抑制PHA刺激的非特異性淋巴細(xì)胞增殖作用 各組間P 0 05 有顯著性差異 隨著MSCs向神經(jīng) 細(xì)胞分化 體外試驗(yàn)中其抑制由PHA刺激的非特異性淋巴細(xì)胞增殖作用增強(qiáng) IFN預(yù)處理后 MSCs組 Neu1組和Neu2組細(xì)胞對(duì)非特異性淋巴細(xì)胞增殖的 抑制作用增強(qiáng) 與未經(jīng) IFN預(yù)處理的三組細(xì)胞分別進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn) 均為P0 05 結(jié)論 骨髓MSCs向神經(jīng)誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞抑制PHA刺激的T淋巴細(xì)胞增生 細(xì)胞分泌可溶性細(xì)胞因子是MSCs向神經(jīng)誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞抑制PHA刺激的 T細(xì)胞增生的可能機(jī)制 三 缺氧缺血腦損傷模型腦內(nèi)移植向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化的骨髓MSCs的免疫排斥反應(yīng) 目的 探討向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化的骨髓MSCs移植至HIBD模型腦內(nèi)后的免疫排斥反應(yīng) 方法 7日齡新生昆明小鼠 隨機(jī)分為 正常對(duì)照組 Con組 HIBD模型組 HIBD組 未分化MSCs移植組 MSCs組 MSCs誘導(dǎo)分化1周細(xì)胞移植組 Yeu1組 MSCs誘導(dǎo)分化2周細(xì)胞移植組 Neu2組 每組動(dòng)物12只 根據(jù)Ditelberg 1996 報(bào)道方法制作新生小鼠HIBD模型 各移植組小鼠10