彎曲菌屬和幽門螺桿菌及檢驗.doc

第二十一章彎曲菌屬和幽門螺桿菌及檢驗本章考點：1.概述：概念2.彎曲菌屬，幽門螺桿菌分類，生物學(xué)性狀，臨床意義，微生物學(xué)檢查一、彎曲菌屬（一）概述：彎曲菌屬細菌是一類微需氧，不分解糖類，氧化酶陽性，菌體彎曲呈逗點狀、S形或螺旋狀，有動力的革蘭陰性菌。包括5個種和5個亞種。對人類致病的主要是空腸彎曲菌和胎兒彎曲菌胎兒亞種。前者是人類腹瀉最常見的病原菌之一，后者在免疫功能低下時可引起敗血癥、腦膜炎等。（二）生物學(xué)性狀1.形態(tài)染色：革蘭陰性、細長、螺旋形或海鷗展翅狀、形的彎曲桿菌。一端或兩端具有單鞭毛，運動活潑，有時呈螺旋狀運動。一端單鞭毛多見于胎兒亞種，兩端單鞭毛多見于空腸彎曲菌，無芽胞，無莢膜。2.培養(yǎng)特性：微需氧菌，初次分離時需在含5%O2、85%N2、10%CO2氣體環(huán)境中生長，傳代培養(yǎng)時能在10%CO2環(huán)境中生長。 本屬菌最適生長溫度隨菌種而異（生長溫度差異可作為菌種鑒別要點）。菌種253742大腸彎曲菌-+空腸彎曲菌-+簡明彎曲菌-+-胎兒彎曲菌+-營養(yǎng)要求高，在普通培養(yǎng)基上不生長。需加入血液、血清才能生長。常用的選擇培養(yǎng)基有Skirrow瓊脂和Campy-BAP培養(yǎng)基。這些培養(yǎng)基以血瓊脂為基礎(chǔ)，加人多種抗生素，能抑制腸道正常菌群，而有利于本菌的分離。空腸彎曲菌初次分離時，經(jīng)48h培養(yǎng)可形成兩種菌落；一種為扁平、濕潤、灰白色、半透明、邊緣不整齊、常沿接種線擴散生長的菌落；另一種為圓形、凸起、半透明、針尖狀、有光澤、單個細小菌落。兩種菌落均不溶血。在布氏肉湯內(nèi)呈均勻混濁生長。3.生化反應(yīng)：本屬細菌生化反應(yīng)不活潑。不分解糖類、不液化明膠、不分解尿素，V-P和甲基紅試驗均陰性。氧化酶均為陽性，大多數(shù)彎曲菌能還原硝酸鹽、觸酶試驗為陽性，空腸彎曲菌馬尿酸水解試驗陽性。4.抗原結(jié)構(gòu)：有菌體（O）抗原、熱不穩(wěn)定抗原和鞭毛（H）抗原。根據(jù)O抗原可將空腸彎曲菌分為42個血清型。5.抵抗力：抵抗力較弱，565分鐘即被殺死。干燥環(huán)境中僅能存活3小時。（二）微生物學(xué)檢驗1.標本采集：立即送檢，及時接種。2.檢驗方法及鑒定（1）直接涂片1）懸滴標本檢查：顯微鏡下觀察有無投鏢式或螺旋狀運動的細菌。2）革蘭染色檢查：為革蘭陰性逗點狀、S形或螺旋狀小桿菌。（2）分離培養(yǎng)：糞便和肛拭子標本直接接種于改良彎曲菌瓊脂平板如改良的Skir-row血瓊脂平板和Campy-BAP平板；血液或腦脊液標本接種布氏肉湯增菌后，轉(zhuǎn)種彎曲菌分離培養(yǎng)基，置42、37，在微需氧環(huán)境下培養(yǎng)2472h，觀察菌落特征。（3）鑒定革蘭陰性細小彎曲桿菌，單鞭毛具有投鏢樣或螺旋樣動力，需氧環(huán)境不生長，微需氧條件下，在彎曲菌選擇培養(yǎng)基上形成兩種類型菌落。不分解葡萄糖。彎曲菌屬的鑒定要點為氧化酶陽性，革蘭陰性，菌體彎曲或呈S形。最常用的鑒定試驗有生長溫度（25、37、42）試驗、過氧化氫酶試驗、馬尿酸鹽水解試驗、硝酸鹽和亞硝酸鹽還原試驗、硫化氫試驗等。（三）臨床意義致病因素主要與腸毒素、細胞毒素、內(nèi)毒素和黏附、定植能力有關(guān)。主要引起人類腸道感染和各種腸道外感染。其中空腸彎曲菌是引起散發(fā)性細菌性腸炎最常見的菌種之一。胎兒彎曲菌主要引起腸道外感染，其中胎兒亞種為主要的人類致病菌，致菌血癥、膽囊炎、腹膜炎、肺部感染等。（四）治療原則空腸彎曲菌常對紅霉素、克林霉素和四環(huán)素敏感，多數(shù)空腸彎曲菌對氨基糖苷類、氯霉素及氟喹諾酮類敏感，由于可產(chǎn)生-內(nèi)酰胺酶，一般對-內(nèi)酰胺類耐藥。關(guān)于彎曲菌的描述，正確的是A.微需氧菌B.革蘭陰性，呈細長、螺旋形、海鷗展翅狀或S形C.營養(yǎng)要求高，培養(yǎng)基中需加入血液、血清才能生長D.生化反應(yīng)活潑E.對人致病的主要是空腸彎曲菌和胎兒彎曲菌答疑編號500735210101正確答案ABCE二、幽門螺桿菌（一）簡述幽門螺桿菌是一類氧化酶和過氧化氫酶均陽性、微需氧、在37能夠生長，在25不能生長42少數(shù)生長的革蘭陰性彎曲的細菌，有動力。能引起人類疾病的有3個種，即幽門螺桿菌（H.pylori）、H.fennelliae和H.cinaedi。幽門螺桿菌多見。（二）生物學(xué)性狀革蘭陰性，菌體細長彎曲呈螺旋形、S形或海鷗狀。菌體一端或兩端可有多根帶鞘鞭毛。運動活潑。微需氧，在5%O2、85%N2、10%C02的環(huán)境中生長良好。對濕度要求較高，相對濕度最好在98%以上。對營養(yǎng)要求較高，一般需含血或血清才生長。為抑制雜菌培養(yǎng)基中添加多粘菌素B、萬古霉素、兩性霉素、TMP等。HP與其他細菌相比有一定的耐酸性，但對酸仍比較敏感，pH降至3.5以下活力明顯減弱。生化反應(yīng)不活潑。氧化酶、觸酶、DNA酶均陽性?？焖匐迕冈囼瀼婈栃裕ㄔ摼墚a(chǎn)生豐富的尿素酶是其顯著的特征）。（三）臨床意義全球一半以上人口被HP感染。傳播途徑推測經(jīng)口感染，HP感染與消化性潰瘍，十二指腸潰瘍有密切關(guān)系。HP存在于胃黏膜上皮表面和粘液底層，胃竇為定植的最佳部位，HP數(shù)量較多，胃體和胃底較少。（四）微生物檢查1.標本采集：從多部位采集胃黏膜活檢標本，放入20%葡萄糖運送液或無菌生理鹽水中立即送檢，4冰箱保存，不超過5小時。2.檢驗方法（1）快速診斷：有直接染色鏡檢，快速脲酶分解試驗、碳標記（13或14標記尿素）呼氣試驗（如果C02超標，提示HP存在）、有商品試劑盒檢測糞便HP抗原、血清學(xué)檢測抗Hp菌體抗體或脲酶抗體、基因芯片法檢測脲酶、細胞毒素和空泡毒素抗體。分子生物學(xué)技術(shù)檢測毒素基因。（2）分離培養(yǎng)鑒定：用選擇性培養(yǎng)基（如血巧克力培養(yǎng)基中添加多粘菌素、萬古霉素、兩性霉素、TMP等）和非選擇性培養(yǎng)基放在微需氧和濕潤的環(huán)境中，35孵育34天，挑選出細小、針尖大小、半透明的、不溶血的可疑菌落，做生化鑒定。（3）藥敏試驗：測試MIC（4）治療：選用一種質(zhì)子泵抑制劑（PPI）或一種膠體鉍劑加上克拉霉素、阿莫西林（或四環(huán)素）甲硝唑（或替硝唑），3種抗菌藥物中的2種，組成三聯(lián)療法。也可用PPI、膠體鉍劑聯(lián)合兩種抗生素的四聯(lián)療法。關(guān)于幽門螺桿菌的生物學(xué)性狀，敘述正確的是A.菌落細小、半透明、不溶血B.兼性厭氧生長C.氧化酶陽性D.革蘭陰性螺旋形E.快速脲酶試驗強陽性答疑編號500735210102正確答案ACDE第二十二章厭氧性細菌及檢驗本章考點：1.概述概念，分類標準及分類2.厭氧菌的分布與臨床意義自然界和正常人體中的分布，臨床意義3.厭氧菌標本的采集與送檢標本的采集方法，標本的運送和處理4.分離與鑒定檢驗程序，檢驗方法概述一、概 述（一）概念厭氧性細菌是一大群專性厭氧，必須在無氧環(huán)境中才能生長的細菌。（二）厭氧菌的分類主要厭氧菌的分類見表5-22-1。 種和亞種類 主要常見菌種革蘭陽性有芽胞桿菌 83 破傷風(fēng)梭菌、肉毒梭菌、溶組織梭菌、梭菌屬 產(chǎn)氣莢膜梭菌等革蘭陽性無芽胞桿菌丙酸桿菌屬 8 痤瘡丙酸桿菌、顆粒丙酸桿菌、貪夢丙 酸桿菌優(yōu)桿菌屬 34 不解乳優(yōu)桿菌、遲緩優(yōu)桿菌、粘性優(yōu)桿 菌、短優(yōu)桿菌等乳酸桿菌屬 51 本菌屬與致病關(guān)系不大放線菌屬 12 衣氏放線菌、溶齒放線菌、化膿放線菌等蛛網(wǎng)菌屬 1 丙酸蛛網(wǎng)菌雙歧桿菌屬 24 兩歧雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、短雙歧桿菌、長雙歧桿菌等革蘭陰性無芽胞桿菌類桿菌屬 18 脆弱類桿菌、多形類桿菌、多形桿菌、普通類桿菌普雷沃菌屬 20 產(chǎn)黑色素普雷沃菌、中間普雷沃菌等紫單胞菌屬 12 不解糖紫單胞菌、牙髓紫單胞菌梭桿菌屬 16 具核梭桿菌、壞死梭桿菌、死亡梭桿菌等纖毛菌屬 1 口腔纖毛菌沃廉菌屬 2 產(chǎn)琥珀酸沃廉菌（來自牛瘤胃）和直線沃廉菌（來自人牙齦溝）月形單胞菌屬 生痰月形單胞菌（來自人牙齦溝）和反芻月形單胞菌（來自反芻動物瘤胃）革蘭陽性厭氧球菌消化球菌屬 1 黑色消化球菌消化鏈球菌屬 9 厭氧消化鍵球菌、不解糖化鏈球菌、吲哚消化鏈球菌、大消化鏈球菌、微小消化鏈球菌、產(chǎn)生消化鏈球菌、普氏消化鏈球菌、四聯(lián)消化鏈球菌厭氧性鏈球菌成微需氧鏈球菌 4 麻疹鏈球菌、漢孫鏈球菌、多形鏈球菌、短小鏈球菌、另外還有已屬于口腔鏈球菌的中間型鏈球菌和星群鏈球菌瘤胃球菌屬 8糞球菌屬 3八疊球菌屬 2革蘭陰性氧球菌韋榮菌屬 7 小韋榮菌、產(chǎn)堿韋榮菌氨基酸球菌屬 1 發(fā)酵氨基酸球菌巨球菌屬 1 埃氏巨球菌 二、厭氧菌感染（一）厭氧菌在正常人體的分布厭氧菌在人體的分布非常廣泛，正常人的腸道、口腔、陰道等處均有大量的厭氧菌寄居。厭氧菌與需氧菌和兼性厭氧菌共同組成人體的正常菌群，其中絕大多數(shù)為無芽胞厭氧菌。其中腸道中的厭氧菌數(shù)量是大腸埃希菌的100010000倍。在人體腸道正常菌群中占絕對優(yōu)勢的有A.雙歧桿菌B.傷寒沙門菌C.大腸桿菌D.變形桿菌E.無芽胞厭氧菌答疑編號500735220101正確答案E（二）臨床意義1.外源性感染：梭狀芽胞桿菌屬引起的感染，其細菌及芽胞來源于土壤、糞便和其他外界環(huán)境。少數(shù)致病菌能產(chǎn)生強烈外毒素和侵襲性酶，引起人和動物疾病。2.內(nèi)源性感染：無芽胞厭氧菌大多數(shù)是人體正常菌群，屬于條件致病菌，在一定條件下可引起感染，一般不在人群中傳播。由厭氧菌引起的人類感染在所有的感染性疾病中占有相當大的比例，有些部位的感染如腦膿腫、牙周膿腫和盆腔膿腫等80%以上是由厭氧菌引起的。其中部分系厭氧菌單獨感染，大部分系與需氧菌混合感染。3.厭氧菌感染的危險因素1）組織缺氧或氧化還原電勢降低，如組織供血障礙、大面積外傷、刺傷。2）機體免疫功能下降，如接受免疫抑制劑治療、抗代謝藥物治療、放射治療、化學(xué)藥物治療的病人以及糖尿病患者、慢性肝炎患者、老年人、早產(chǎn)兒等均易并發(fā)厭氧菌感染。3）機體局部屏障作用破壞：某些手術(shù)及創(chuàng)傷，如開放性骨折、胃腸道手術(shù)、生殖道手術(shù)以及深部刺傷等易發(fā)生厭氧菌感染。4）長期應(yīng)用某些抗菌藥物，如氨基糖苷類、頭孢菌素類、四環(huán)素類等，可誘發(fā)厭氧菌感染。5）深部需氧菌感染，需氧菌生長可消耗環(huán)境中的氧氣，為厭氧菌生長提供條件，從而導(dǎo)致厭氧菌合并感染。4.厭氧菌感染的臨床及細胞學(xué)指征1）感染組織局部產(chǎn)生大量氣體，造成組織腫脹和壞死，皮下有捻發(fā)感，是產(chǎn)氣莢膜梭菌所引起感染的特征。2）發(fā)生在口腔、腸道、鼻咽腔、陰道等處的感染，易發(fā)生厭氧感染。3）深部外傷如槍傷后，以及動物咬傷后的繼發(fā)感染，均可能是厭氧菌感染。4）分泌物有惡臭或呈暗血紅色，并在紫外光下發(fā)出紅色熒光，均可能是厭氧菌感染。產(chǎn)生紅色熒光的分泌物，可能是產(chǎn)黑素普雷沃菌或不解糖紫單胞菌；分泌物或膿腫有硫磺顆粒，為放線菌感染。5）分泌物涂片經(jīng)革蘭染色，鏡檢發(fā)現(xiàn)有細菌，而培養(yǎng)陰性者，或在液體及半固體培養(yǎng)基深部生長的細菌，均可能為厭氧菌感染。6）長期應(yīng)用氨基糖苷類抗生素?zé)o效的病例，可能是厭氧菌感染。7）胃腸道手術(shù)后發(fā)生的感染。三、厭氧菌標本的采集與送檢標本采集與送檢必須注意兩點：標本絕對不能被正常菌群所污染；應(yīng)盡量避免接觸空氣。1.采集：采集標本須注意：不被正常菌群污染，并盡量避免接觸空氣。采集深部組織標本時，需用碘酒消毒皮膚用注射器抽取，穿刺針頭應(yīng)準確插入病變部位深部，抽取數(shù)毫升即可，抽出后可排出一滴標本于酒精棉球上。若病灶處標本量較少，則可先用注射器吸取1ml還原性溶液或還原性肉湯，然后再抽取標本。在緊急情況下，可用棉拭取材，并用適合的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)送。厭氧培養(yǎng)最理想的檢查材料是組織標本，因厭氧菌在組織中比在滲出物中更易生長。用于厭氧菌培養(yǎng)的標本不同于一般的細菌培養(yǎng)，多采用特殊的采集方法，如針筒抽取等，應(yīng)嚴格無菌操作，嚴禁接觸空氣。不同部位標本采集方法也各有不同特點，具體方法見表5-22-3。 表5-22-3不同部位標本采集方法標本來源 收集方法封閉性膿腫 針管抽取婦女生殖道 后穹隆穿刺抽取下呼吸道分泌物 肺穿刺術(shù)胸腔 胸腔穿刺術(shù)竇道、子宮腔、深部創(chuàng)傷 用靜脈注射的塑料導(dǎo)管穿人感染部位抽吸組織 無菌外科切開尿道 膀胱穿刺術(shù) 哪些標本不符合厭氧菌檢驗要求A.血B.咽拭子C.深部膿腫穿刺液D.牙周膿腫穿刺液E.膀胱穿刺液答疑編號500735220102正確答案B 2.送檢方法與處理標本送到實驗室后，應(yīng)在2030min內(nèi)處理完畢，最遲不超過2h，以防止標本中兼性厭氧菌過度繁殖而抑制厭氧菌的生長。如不能及時接種，可將標本置室溫保存（一般認為，冷藏對某些厭氧菌有害，而且在低溫時氧的溶解度較高）。1）針筒運送：一般用無菌針筒抽取標本后，排盡空氣，針頭插入無菌橡皮塞，以隔絕空氣，立即送檢。這種方法多用于液體標本的運送，如血液、膿液、胸腹水、關(guān)節(jié)液等。2）無菌小瓶運送：一般采用無菌的青霉素小瓶，瓶內(nèi)加一定量的培養(yǎng)基和少量氧化還原指示劑，用橡皮蓋加鋁蓋固定密封，排除瓶內(nèi)空氣，充以C0 2氣體。同時先觀察瓶內(nèi)氧化還原指示劑的顏色，以判斷瓶內(nèi)是否為無氧環(huán)境，如合格將用無菌注射器將液體標本注入瓶中即可。3）棉拭子運送一般不采用棉拭子運送，如果使用該方法，一定使用特制運送培養(yǎng)基，確保無氧環(huán)境，確保不被污染，確?？焖偎蜋z。4）厭氧罐或厭氧袋運送將厭氧罐或厭氧袋內(nèi)裝入可有效消耗氧氣的物質(zhì)，確保無氧環(huán)境。該方法一般用于運送較大的組織塊或床邊接種的培養(yǎng)皿等。四、厭氧菌的分離與鑒定檢驗程序：（一）直接鏡檢根據(jù)形態(tài)和染色性，結(jié)合標本性狀與氣味，初步對標本中可能有的細菌作出估計。 表5-22-4 厭氧菌直接鏡檢初步鑒別菌名革蘭染色 形態(tài)及其他特征脆弱類桿菌G-b 兩端鈍圓，著深色，中間色淺且不均勻，且有氣泡，長短不一產(chǎn)黑素普雷沃菌G-b 多形性，長短不一，有濃染和空泡，無鞭毛和芽胞。標本有惡臭，琥珀味，紫外線照射發(fā)紅色熒光具核梭桿菌G-b 菌體細長，兩頭尖，紫色顆粒菌體長軸成雙排列，標本有丁酸味壞死梭桿菌G-b 高度多形性，長短不一，菌體中部膨脹呈圓球形韋榮球菌G-c 極小的革蘭陰性球菌消化鏈球菌G+c 革蘭陽性呈鏈狀的小球菌乳桿菌G+b 細長，有時多形性，呈單、雙、短鏈或柵狀排列痤瘡丙酸桿菌G+b 排列特殊呈X、Y、V或柵狀，標本有丙酸氣味雙歧桿菌G+b 多形性，有分支呈Y、V形或棒狀，標本有醋酸氣味放線菌G+b 分支呈棒狀、X、Y、V、或柵狀，膿汁中有黃色顆粒有琥珀酸氣味破傷風(fēng)梭菌G+b 細長、梭形或鼓槌狀，有芽胞，有周鞭毛產(chǎn)氣莢膜梭菌G+b 粗大桿菌，呈單或雙排列，有芽胞，有莢膜艱難梭菌G+b 粗長桿菌，有芽胞，有鞭毛，近來發(fā)現(xiàn)有莢膜c：coccus，球菌；b：bacillus，桿菌。（二）分離培養(yǎng)主要分初代培養(yǎng)和次代培養(yǎng)兩個階段，其中初代培養(yǎng)相對比較困難，關(guān)鍵的問題就是厭氧環(huán)境和培養(yǎng)基的選擇。初代培養(yǎng)的一般原則是：（1）先將標本涂片染色直接鏡檢，指導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇。（2）盡量選用在厭氧菌中覆蓋面寬的非選擇性培養(yǎng)基。（3）最好多選12種覆蓋面不同的選擇性培養(yǎng)基。（4）盡量保證培養(yǎng)基新鮮。（5）要考慮到微需氧菌存在的可能。1.選用適當?shù)呐囵B(yǎng)基接種：應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基；（1）培養(yǎng)基的使用，應(yīng)注意下列各點：1）盡量使用新鮮培養(yǎng)基，24h內(nèi)用完；2）應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基，預(yù)還原2448h更好；3）可采用預(yù)還原滅菌法制作的培養(yǎng)基（用前于培養(yǎng)基中加入還原劑，如L-半胱氨酸、硫乙醇酸鈉、維生素C及葡萄糖等，盡可能使預(yù)還原劑處于還原狀態(tài)）；4）液體培養(yǎng)基應(yīng)煮沸10min，以驅(qū)除溶解氧，并迅速冷卻，立即接種；5）培養(yǎng)厭氧菌的培養(yǎng)基均應(yīng)營養(yǎng)豐富，并加有還原劑與生長刺激因子（血清、維生素K、氯化血紅素、聚山梨酯-80等）