細(xì)胞培養(yǎng)的流程.doc

細(xì)胞培養(yǎng)的流程，從購買試劑、分裝，到無菌操作、實(shí)驗(yàn)、觀察的過程？對于新手來說，細(xì)胞培養(yǎng)真是太難了，很多的細(xì)節(jié)你不可能一下子就考慮到、預(yù)見到，因此請教細(xì)胞培養(yǎng)的高手就顯得非常重要且可貴了。細(xì)胞培養(yǎng)包括儀器的清洗、消毒滅菌，試劑的購買、配制、分裝，細(xì)胞的分離，無菌操作，培養(yǎng)細(xì)胞的觀察，實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)，及結(jié)果的分析等等。但這每一個(gè)過程的含金量都很高，要求非常嚴(yán)格。如果你正在培養(yǎng)細(xì)胞，或曾經(jīng)培養(yǎng)過細(xì)胞，你一定有很多的經(jīng)驗(yàn)值得大家分享，你一定有你自己的一套培養(yǎng)細(xì)胞的流程，從哪開始到哪結(jié)束你也一定有太多的想說。因此，你不妨說說你的細(xì)胞培養(yǎng)流程，以便我們廣大的細(xì)胞培養(yǎng)新借以一鑒。于此，我先代表廣大細(xì)胞培養(yǎng)新手謝謝各位園丁里的奉獻(xiàn)者！有空整理一下再寫寫。呵呵謝了先版主建議不錯(cuò)，我剛開始養(yǎng)細(xì)胞時(shí)遇到的各種困難可以說是不計(jì)其數(shù)了，解決困難耗費(fèi)了大量地時(shí)間，可惜呀！養(yǎng)細(xì)胞是一項(xiàng)即有難度又很講究技術(shù)的過程，作起來不易，要真正詳細(xì)的寫出來示人更難！ 書上的規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)很多，但作起來每人都有自己的方法，適宜就好。我看還沒有人跟帖，我就先說一點(diǎn)，從最初階段開始：（自己的做法）（一）儀器的清洗總的分為兩大類：可泡酸的和不可泡酸消毒的。 酸指消毒的清潔液（由濃硫酸、重鉻酸鉀和蒸餾水配置的次強(qiáng)酸液）可泡酸的主要是玻璃儀器培養(yǎng)細(xì)胞的板子，離心管等塑料器皿。消毒過程：自來水沖洗3-5遍-超聲波清洗30-烘干-濅入清潔液過夜（不少于6h）-自來水沖洗1520遍-蒸餾水洗3-5遍，烘干備用。不可泡酸的主要是膠塞和蓋子，慮器等，先在清水中濅泡后沖洗烘干-2%NaOH濅泡過夜，自來水沖洗，5%HCl濅泡三min，流水沖洗-蒸餾水漂洗-烘干備用。消毒好的器具一定找個(gè)干凈的柜子保存，使用前高壓消毒滅菌，我科室主要使用鋁制飯盒分裝器具，挺方便的，用前高壓。今天暫說一點(diǎn)，以后有機(jī)會(huì)再續(xù)，望給師弟妹們有所借鑒。斑竹不厚道，現(xiàn)在知道為什么沒有別的戰(zhàn)士跟貼了么？我怎么也耗了幾十分鐘打的字，你就這樣打擊別人的信心，還有可能往后面延續(xù)么！再說，經(jīng)驗(yàn)何止這些這點(diǎn).您的帖子我看見了，您的抱怨我也接受！并且跟您補(bǔ)上一分！每個(gè)斑竹給分的標(biāo)準(zhǔn)有一定的差別，但是可以肯定的是：我們有自己的加分原則，大原則是不變的！比如：版內(nèi)討論得很多的東西，重復(fù)發(fā)帖一般不予以加分！您的這個(gè)帖子屬于改范疇！感謝您對細(xì)胞版的支持！如果有問題可以直接pm我們！再次感謝！再多說點(diǎn)?。『呛墙又f呀，很好，很有幫助，我是新手，要多向你學(xué)習(xí)頂一下。我也說說我的一些體會(huì)吧。1、首先說清洗：對于玻璃器皿（如移液管、蓋玻片之類）可先用酸液浸泡24h以上，再用清水浸泡24h。之后用清水將移液管沖洗10遍，除去殘留酸液，再用雙蒸水沖洗3-5遍，徹底洗凈后放入不銹鋼筒中，雙層牛皮紙?jiān)?，高壓滅?0min，烘干待用。我們實(shí)驗(yàn)室的酸液一般是次強(qiáng)酸液（重鉻酸鉀120g 濃硫酸200 mL 蒸餾水1 000 mL）配液時(shí)要小心燙傷。裝培養(yǎng)基的瓶子則要在每次用完培養(yǎng)基以后就要立即洗凈，臨用時(shí)再次用清水沖洗3-5遍，再用雙蒸水漂洗3次，洗凈后瓶口蓋上錫箔紙，外包雙層牛皮紙?jiān)诤蟾邏簻缇?0min，與其配套的瓶蓋則洗凈后另行包好同時(shí)滅菌、烘干。培養(yǎng)基過濾器滅菌同瓶子，也要在用完后及時(shí)洗凈、滅菌時(shí)保持密封。Tip頭就容易了，插到盒子里，雙層牛皮紙包好后直接高壓滅菌就好了。2、再說說除菌：我說的除菌主要是指溶液的除菌。如PBS、HEPES之類的一些緩沖劑和不含葡萄糖的鹽溶液，可以配好以后直接高壓滅菌。而大部分的溶液由于成分限制必須過濾除菌。我們實(shí)驗(yàn)室需要過濾除菌的溶液有：膠原酶、胰酶、各類血清、抗生素、G-418溶液、各類培養(yǎng)基、各類生長因子、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等.3、關(guān)于各類溶液的配制：我列出我們實(shí)驗(yàn)室常用試劑的配方吧：1XPBS：氯化鈉8克、氯化鉀0.2克、磷酸二氫鈉1.15克、磷酸氫二鉀0.2克，加水至一升，調(diào)pH=7.4。這里我認(rèn)為PBS的pH是最重要的一環(huán)，不可大意。HEPES溶液：8克氯化鈉、0.3克氯化鉀、0.135克磷酸氫二鈉、1克葡萄糖、5克HEPES加水900ml，調(diào)pH=7.4抗生素：我們主要用青霉素和鏈霉素，一般用1XPBS稀釋至1X105單位，-20度儲(chǔ)存，用時(shí)直接加入培養(yǎng)基，工作濃度一般為1X102單位。G-418：1克包裝的G-418瓶中加入10mlHEPES溶液徹底溶解，過濾除菌后分裝于EP管，-20度保存。谷氨酰胺：L-谷氨酰胺29.2克，加HanksBBS1000ml溶解，配成200mmol/L過濾除菌，4度保存，工作濃度14mmol/L。加有谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4冰箱中儲(chǔ)存2周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來的谷氨酰胺。1XEDTA-胰酶：0.25克胰酶加0.1克EDTA完全溶解于500ml 1XPBS中，過濾除菌后分裝于50ml離心管中，一管4度備用，其他-20度保存。我不太主張配成10X的母液，因?yàn)橐让阜磸?fù)凍融后，效果會(huì)差很多。（EDTA很難溶，必要時(shí)候可放置過夜）MTT：sigma公司出產(chǎn)，用1XPBS配成50mg/ml待用。MTT毒性很大，配置時(shí)務(wù)必小心。各類培養(yǎng)基：現(xiàn)在我們實(shí)驗(yàn)室都是買GIBICO的粉劑自己配制。包裝盒上會(huì)有配制方法，以及加碳酸氫鈉的量。按說明來就是了。需要注意的是在配培養(yǎng)基前，最好先確保碳酸氫鈉充分溶解，避免局部pH偏高或偏低。再一個(gè)就是水的使用，一般配鹽溶液，用三蒸水即可，而配制培養(yǎng)基務(wù)必用超純水，并在使用前要高壓滅菌。今天太晚了，先說到這，明天繼續(xù)4、關(guān)于培養(yǎng)基的選用：我養(yǎng)過的細(xì)胞株不多，權(quán)當(dāng)拋磚引玉吧。一般來說大部分細(xì)胞系我們都用高糖DMEM+10%FCS培養(yǎng)，我們實(shí)驗(yàn)室用該培養(yǎng)基的有：HepG-2、NIH-3T3、A549、Hela、C2C12、COS-7。特殊的，如P19Cl6用-MEM+10%FCS，SGC-7901用RPMI-1640+10%FCS，293細(xì)胞則用MEM+熱滅活的馬血清。對于貼壁不是很緊的細(xì)胞，用45%DMEM+45%-MEM+10%FCS有奇效現(xiàn)附上前輩總結(jié)的帖子，希望對大家有幫助5、操作中的一些小細(xì)節(jié)：實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺(tái)以紫外燈照射30分鐘滅菌，以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)5分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。定期檢測下列項(xiàng)目： CO2 鋼瓶之CO2 壓力 、CO2 培養(yǎng)箱之CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水，每周更換)、無菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/HEPA)、液氮罐中的液氮高度。 水槽可添加飽和硫酸銅溶液，并定期換水。6、血清的相關(guān)問題：血清必須貯存于20，若存放于4，不要超過一個(gè)月。如果一次無法用完一 瓶，可將4045 ml 分裝于無菌50 ml 離心管中，預(yù)留此膨脹體積之空間，以免容器凍裂。一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。瓶裝(500ml) 血清一定要逐步解凍: 4冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由20直接至37解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活是指56, 30 分鐘加熱已完全解凍之血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份 去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多，且會(huì)影響血清之品質(zhì)。以我們實(shí)驗(yàn)室做的對照試驗(yàn)看，未滅活血清效果的確要好些。細(xì)胞培養(yǎng)基的基本知識(shí).doc (36.5k)good, 很有幫助，謝謝7、貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)：一般步驟為：真空泵吸走培養(yǎng)基，1XPBS漂洗兩次，加入1mlEDTA-Tripsin（100mm皿為例），37度放置數(shù)分鐘，輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落，加入適量血清，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊，離心后加入新鮮培養(yǎng)基，按比例轉(zhuǎn)移至新皿。細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間，若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。我談?wù)剛€(gè)人經(jīng)驗(yàn)：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901幾種癌細(xì)胞處理時(shí)間可適當(dāng)放長，一般處理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比較容易脫落，2min足矣，P19Cl6和293細(xì)胞貼壁不緊，可在PBS漂洗后，直接換新鮮培養(yǎng)基打散。8、細(xì)胞凍存及復(fù)蘇：首先說凍存液配方，常用的配方一般是兩種90%FCS+10%DMSO或70%培養(yǎng)基+20%FCS+10%DMSO。前一種較貴，而且后一種凍存效果也不錯(cuò)，因此本人一般選用第二種配方。對于比較脆弱的細(xì)胞則選用前一種凍存液。凍存步驟比較簡單，前期處理同細(xì)胞傳代，只是在離心后是直接吸取上清，用手拍打離心管底部，加入適量凍存液使細(xì)胞完全懸浮后分裝于凍存管。制后先將凍存管放入4冰箱，約40min。 接著置于-20冰箱，約60min。置于-80超低溫冰箱中放置過夜。 最后置于液氮罐中長期保存。 同時(shí)做好凍存記錄，在自己的筆記本和凍存記錄本上均要記錄。注意事項(xiàng)：1使用DMSO前，不需要進(jìn)行高壓滅菌，它本身就有滅菌的作用。高壓滅菌反而會(huì)破壞它的分子結(jié)構(gòu)，以至于降低冷凍保護(hù)效果。2凍存時(shí)要選處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，這樣效果要好很多3不宜將凍存細(xì)胞放置在0-60這一溫度范圍內(nèi)過久，低溫?fù)p傷主要發(fā)生在這一溫度區(qū)內(nèi)，是“危險(xiǎn)溫區(qū)”。 4注意定期檢查液氮罐內(nèi)液氮量，及時(shí)添加。5凍存液中的培養(yǎng)基要與培養(yǎng)時(shí)相同，避免細(xì)胞由于環(huán)境突然改變而死亡，在凍存管上也要標(biāo)明培養(yǎng)基種類。6凍存液不要預(yù)熱。7程序凍存盒非常好用，省事省時(shí)效果還好，強(qiáng)烈推薦凍存使用凍存盒。細(xì)胞復(fù)蘇的原則是快速融化：必須將凍存在-196液氮中的細(xì)胞快速融化至37，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。具體步驟：1.將水浴鍋預(yù)熱至402.用75酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。4.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。5.從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對管外的編號(hào)。6.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化。7.約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，8.平衡后，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min9.吸棄上清液。10.向凍存管內(nèi)加入1ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。最后將細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37和5CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)12-24小時(shí)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。注意事項(xiàng)：1復(fù)蘇時(shí)選用的培養(yǎng)基要符合凍存管上標(biāo)明的培養(yǎng)基。2操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。3自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時(shí)蓋子易松掉不好意思,寫錯(cuò)了好東西，謝謝你的辛勤勞動(dòng)。真空泵中間接一個(gè)10000ml的大燒瓶啊吸液的管子直接往燒瓶里漏，吸氣的一頭保證在液面以上就可以了那要看你用什么真空泵了.我們實(shí)驗(yàn)室用的水泵,不會(huì)大量產(chǎn)熱,即使是空轉(zhuǎn)也沒有關(guān)系.單純用電機(jī)抽真空肯定是不行的.細(xì)胞傳代培養(yǎng)（消化法）具體操作：一. 傳代前準(zhǔn)備：1.預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。2.用75酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手。3.正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染。4.點(diǎn)燃酒精燈：注意火焰不能太小。5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺(tái)內(nèi)。7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺(tái)面，再在鏡下觀察細(xì)胞。8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。二.胰蛋白酶消化；1.加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞最好，最佳消化溫度是37。2. 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時(shí)細(xì)胞消化適度。3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液。三.吹打分散細(xì)胞：1.吹打制懸：用滴管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。2.吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10ml離心管中。3.平衡離心：平衡后將離心管放入臺(tái)式離心機(jī)中，以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心6-8分鐘。4.棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2ml培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。四.分裝稀釋細(xì)胞：1.分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2-3個(gè)培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。2.顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要是計(jì)數(shù)。注意密度過小會(huì)影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5105/ml。最后要做好標(biāo)記。今天做亞細(xì)胞定位，突然想起一個(gè)細(xì)節(jié)問題：不知其他戰(zhàn)友發(fā)現(xiàn)沒有，有時(shí)候做定位時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)有些細(xì)胞是在玻璃片的另一面。這是因?yàn)榧?xì)胞傳代時(shí)，玻璃片沒貼在底部，細(xì)胞就落在了培養(yǎng)皿底和玻璃片中間。這樣一來就會(huì)影響到觀察和拍照。我現(xiàn)在做亞細(xì)胞定位傳代時(shí)，都會(huì)先在皿里滴兩滴培養(yǎng)基，讓玻璃片貼在底部后再將細(xì)胞懸液加進(jìn)去，這就避免了以上現(xiàn)象。養(yǎng)細(xì)胞的準(zhǔn)備工作耗費(fèi)了我好長時(shí)間。1 、查資料總結(jié)需要的儀器設(shè)備（要找到型號(hào)、價(jià)格、購買途徑）、試劑（廠商、型號(hào)、規(guī)格、價(jià)格、購買途徑）、雜碎用品（價(jià)格、購買途徑）2、聯(lián)系廠商購貨，大型儀器還要填報(bào)建設(shè)項(xiàng)目申請表，等待學(xué)校招標(biāo)。3、著手建立實(shí)驗(yàn)室。缺少的東西還要和其他院系交流，爭取合作。4、因本人是實(shí)驗(yàn)室第一個(gè)做細(xì)胞的，還要找到其他老師，幫他們做試驗(yàn)，同時(shí)學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)的知識(shí)。MTT又是個(gè)細(xì)節(jié)問題極多的操作，做起來是需要一段時(shí)間摸索的。整個(gè)流程下來好累??！其實(shí),最好的方法就是借一本好的細(xì)胞培養(yǎng)書:薛慶善和司徒鎮(zhèn)強(qiáng)編的都很好.只有書上說的才是最詳細(xì)的,很多東西可以知其然,并且知其所以然.固然,從其他人那里可以得到一些知識(shí),但是為什么如此,不如此會(huì)有什么結(jié)果,比如:刷瓶子有什么用?泡酸有什么用?很多人只能夠籠統(tǒng)的說滅菌,其實(shí)不盡然.當(dāng)然,我的意思并不是說,知道這些很重要,而是強(qiáng)調(diào),從書上我們能夠獲得最詳盡最直接的知識(shí).當(dāng)書上說得不具體時(shí),則可以來這里問問各位戰(zhàn)友,有的放矢,方為上策感謝上面的幾位朋友的大力幫助,我也再次溫習(xí)了一次很有幫助.謝謝非常不錯(cuò),讓我這個(gè)初學(xué)者受益匪淺!千言萬語匯成一句話：太謝謝了。非常感謝你的辛勤勞動(dòng),受益匪淺我是個(gè)新手，現(xiàn)在正準(zhǔn)備做試驗(yàn)。這些東西對我非常有用，謝謝大家！確實(shí)很不錯(cuò)哦，非常具體，受益匪淺，謝謝非常感謝,馬上就開始做試驗(yàn),真是受益匪淺多謝各位前輩的總結(jié)，獲益匪淺！大家都寫的很多了，再補(bǔ)充一些關(guān)于試劑購買：一定要按ATCC或者細(xì)胞系構(gòu)建者的建議使用相應(yīng)的培養(yǎng)基，我試過用不同的，感覺培養(yǎng)出來的細(xì)胞形態(tài)有所不同，沒有進(jìn)一步檢測其他指標(biāo)。FBS最好能用進(jìn)口的，hyclone或者gibco的都很好用。培養(yǎng)基使用一段時(shí)間后要注意酸堿度，我的經(jīng)驗(yàn)用過一段時(shí)間后很容易偏堿，對細(xì)胞的生長還是有一些影響的。關(guān)于培養(yǎng)箱中的水盤，忘了跟誰學(xué)的，在水盤里加入過飽和的CuSO4可以抑制霉菌的生長，我們一直在用，效果不錯(cuò)。另外有個(gè)問題想問一下，大家擦培養(yǎng)箱的時(shí)候用什么擦？我們以前一直用復(fù)合醛再用酒精，可是最近看一個(gè)實(shí)驗(yàn)室根本不怎么擦，頂多半年用酒精擦一次好像也沒有什么問題？多謝各位前輩的總結(jié)，獲益匪淺！培養(yǎng)箱每周一次0.1%新潔爾滅或75%酒精擦洗,但是我們實(shí)驗(yàn)室之前也很少這么做也不見有問題!我覺得還是擦洗一下別抱僥幸心理好.太好了，多謝啊不錯(cuò) 不錯(cuò) 謝謝啊看了收益非淺，我要開始做后，也會(huì)把心得記錄下來，和戰(zhàn)友們進(jìn)行交流。不過，目前我還是新手，希望大多指導(dǎo)哦！關(guān)注之中-受益匪淺啊謝謝啦沒想到 今天進(jìn)這個(gè)板塊 受益這么多 多謝諸位請教各位老師了:我這兩天配培養(yǎng)液,是GIBC0的DMEM/F12,根據(jù)以往的經(jīng)驗(yàn),將一袋DMEM/F12溶于1000毫升水,約加入2至3克NAHCO3,調(diào)PH值7.28左右就可以了,可是