循環(huán)腫瘤細胞CTC檢測在肺癌中應用ppt課件.ppt

循環(huán)腫瘤細胞 CTC 檢測在肺癌中的應用 1 腫瘤疾病近期療效的判斷方法 2 臨床因子作為預后與預測因子 預后 T N Mstaging PSscore預測 吸煙狀況 指導靶向治療性別 指導靶向治療種族 指導靶向治療組織學 指導化療和靶向治療 3 影像學方法 非侵入地 直觀地對患者的腫瘤大小變化情況進行評估 缺點 存在一定的健康危害或健康隱患腫瘤大小常與腫瘤的惡性程度或浸潤能力不完全一致費用昂貴滯后性靈敏性低 4 病理學方法 手術或活檢獲得病灶組織 周圍淋巴結(jié)組織 進行病理學染色和分析 是目前唯一明確腫瘤有否轉(zhuǎn)移的金標準缺點 精確度不夠高是侵入性檢查手段易造成擴散人工誤差大難以標準化 5 血清腫瘤標記物測定 血清腫瘤標志物的濃度往往可以在一定程度上提示腫瘤的發(fā)展程度缺點 特異性不高易受非特異蛋白的干擾其他的病理生理狀態(tài)影響導致假陽 陰性結(jié)果 6 1869年AustMedJ Ashworth最早在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到 2005年NEnglJMed Cristofanilli證實治療前CTC數(shù)目是轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者無進展生存期和總生存期的獨立預測因子 循環(huán)腫瘤細胞 循環(huán)腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液循環(huán)的腫瘤細胞 7 CTC檢測 預測PFS及OS指示預后效果復發(fā)轉(zhuǎn)移預測與分期有助于腫瘤個體化治療的藥物篩選和治療方案的確定是傳統(tǒng)的影像學及其他生物標志物的補充檢測手段有助于尋找新的腫瘤標識物以及開發(fā)新的抗腫瘤藥物 8 腫瘤細胞作為生物標志物 外周血和肺靜脈血中的循環(huán)腫瘤細胞 CTCs 臨床意義 轉(zhuǎn)移的輔助標志物 可以預測治療 預后因子 最小損傷的突變檢測 9 獲取CTC需要解決的技術問題 從紅細胞和白細胞中富集惡性腫瘤細胞將惡性腫瘤細胞與紅細胞 白細胞 正常上皮細胞 造血干細胞等區(qū)分開來 每10mL血液中可能僅含有幾個到幾十個循環(huán)腫瘤細胞 而10mL血液中含有的白細胞約有1億個 紅細胞有500億個 10 三種技術 過濾法 ISET IsolationbySizeofEpithelialTumorcells8 m孔徑過濾膜 漏檢體積較小的腫瘤細胞敏感性低 梯度密度法 腫瘤細胞和單核細胞密度小于1 077g mlCTC純度低 混入較多白細胞腫瘤細胞會遷移至血漿層 而聚集后容易下沉聚蔗糖 泛影葡胺 Ficoll Hypaque 對細胞有毒性 免疫磁珠法 腫瘤細胞表面抗原CTC純度低 混入較多白細胞不能有效排除細胞碎片假陽性和假陰性高 CellSearch 免疫磁珠 流式細胞分析 化學發(fā)光 11 CellSearch是全球第一也是唯一經(jīng)FDA批準可用于臨床的循環(huán)腫瘤細胞 CTC 產(chǎn)品 1983磁流體 12 JClinOncol 2011Apr20 29 12 1556 63 Epub2011Mar21 Evaluationandprognosticsignificanceofcirculatingtumorcellsinpatientswithnon small celllungcancer 背景 13 實驗流程 14 患者入組標準 未做過化療 且4周內(nèi)未做過放療病理學確診為非小細胞肺癌IIIA IIIB IV期準備進行標準的細胞毒療法5年內(nèi)未患過惡性腫瘤 實驗方法 CellSave專用收集管采集血液采集血后于室溫儲存并于96小時內(nèi)進行檢測Cellsearch系統(tǒng)進行檢測 15 患者化療前CTC數(shù)量 基線CTC 與臨床特征的關系 IV期患者CTC數(shù)量明顯多于IIIB期患者 IIIB期患者的CTC數(shù)量又明顯多于IIIA期患者 16 肝轉(zhuǎn)移及骨轉(zhuǎn)移患者中CTC數(shù)量明顯多于其它轉(zhuǎn)移患者 患者化療前CTC數(shù)量與腫瘤轉(zhuǎn)移地點的關系 17 所有非小細胞肺癌病人 所有 期非小細胞肺癌病人 基線CTC數(shù)量與無進展生存期和總生存期的關系 基線CTC數(shù)量少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于基線CTC數(shù)量大于等于5的患者 18 化療前后CTC數(shù)量與患者無進展生存期和總生存期的關系 化療后CTC數(shù)量少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于CTC數(shù)量大于5的患者 化療前后CTC數(shù)量都少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于只有一次測出CTC數(shù)量少于5的患者 19 化療前后CTC的數(shù)量變化反映臨床療效 化療前 化療后 化療后CTC數(shù)量減少患者的臨床療效好于CTC數(shù)量增加的患者 20 結(jié)論 CTC能在IV期非小細胞肺癌患者中檢出 CTC數(shù)量的變化反映了臨床療效 CTC數(shù)量與OS和PFS相關 是非小細胞肺癌的一個新的預后判斷因子 21 CTC在判斷是否存在轉(zhuǎn)移中有重要參考價值 對于原發(fā)性肺癌患者 CTC計數(shù)在有遠處轉(zhuǎn)移的肺癌患者中有顯著升高 相關性優(yōu)于CEA 22 CTC升高對于判斷遠處轉(zhuǎn)移的敏感性達71 特異性達83 CTC計數(shù)和血清CEA水平在不同切點的診斷價值 23 治療前和治療后CTC的數(shù)量變化反映療效 大多數(shù)患者的CTC數(shù)量在第一個化療療程后 22天 下降 提示療效好 24 TheAnnalsofThoracicSurgeryVolume87 Issue6 June2009 Pages1669 1675CirculatingTumorCellsinPulmonaryVenousBloodofPrimaryLungCancerPatients 鱗癌中periCTC和pvCTC的數(shù)量明顯高于腺癌 25 NEnglJMed2008 359 366 77 DetectionofMutationsinEGFRinCirculatingLung CancerCells 背景 26 CTC中EGFR突變與腫瘤組織中EGFR突變的一致性 SARMS方法 CTC中EGFR基因型有17個與腫瘤組織中的一樣 準確率為94 27 CTC數(shù)量與病情進展的關系 吉非替尼治療后CTC數(shù)量下降 伴隨著疾病進展CTC數(shù)量也隨之上升 腫瘤大的患者CTC數(shù)量比腫瘤小的患者多 CTC數(shù)量 影像學腫瘤變化 28 檢測CTC中EGFR的基因型與組織中檢測結(jié)果高度符合 可以通過CTC來檢測非小細胞肺癌患者腫瘤的基因型 CTC數(shù)量與疾病進展密切相關 結(jié)論 29 小細胞肺癌患者活檢組織及相對應的CTC中的CD56 活檢組織中的CD56和CTC中的CD56表達具有一致性 肺癌組織 肺癌肝轉(zhuǎn)移組織 30 BaselinebloodCAC 腫瘤細胞 a monosomy6p11 q12 b amplificationEGFR c MYC EGFR red 5 p15 3 green 6p11 q12 aqua c MYC yellow c trisomyCEP3andmonosomyCEP17 d polysomyCEP3 CEP7 CEP17and9p21 3 CEP3 red CEP7 green CEP17 aqua 9p21 3 yellow 外周循環(huán)腫瘤細胞的異常情況與手術切除的腫瘤細胞具有高度一致性 BaselinebloodCTC 腫瘤細胞 31 CTC中的染色體異常分子標記物與疾病的復發(fā)和生存密切相關 32 CTC的應用 從細胞計數(shù)到分子特性 33 FISH分析CTC生物學特性 白細胞有兩份CEP7 綠色 EGFR 紅色 和MET 藍色 CTC中 EGFR 紅色 和MET 藍色 基因擴增 34 微列陣 實時定量RT PCR 對CTC進行基因表達分析 35 BIOTECAN寶藤 J J強生 國內(nèi)首個CELLSEARCH商業(yè)實驗室CH商業(yè)實驗室 36 CTC檢測樣本準備 使用CellSave儲存管采集靜脈血液標本10ml輕輕顛倒8次 防止凝塊樣本室溫條件 15 30攝氏度 下96小時之內(nèi)接受處理接受阿霉素治療的患者給藥之后 至少需要等待7天 樣本溶血及結(jié)塊不能用于CTC檢測 NOTICE 37 樣本處理流程 7 5ml血液采集于CellSave儲存管 加入6 5ml緩沖液離心CellTracks AutoPrep 系統(tǒng)自動處理流程系統(tǒng)自動將被捕獲的 經(jīng)過染色的細胞置入MagNest裝置的