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文檔簡介

.Everlab云端實驗室-吞噬細胞吞噬功能檢測實驗實驗概要本文介紹了吞噬細胞吞噬功能檢測（Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte）實驗的基本原理、操作步驟及注意事項等。實驗原理吞噬細胞具有對異物(細菌、綿羊紅細胞、雞紅細胞等)吞噬和消化的功能，在機體非特異性免疫中發(fā)揮重要作用。小鼠腹腔內(nèi)注射硫代乙醇酸鈉，可刺激巨噬細胞的聚集。四日后小鼠腹腔內(nèi)注入羊紅細胞懸液，一小時后解剖收集腹腔吞嗜細胞，染色、鏡檢可觀察對羊紅細胞的吞嗜現(xiàn)象。通過計算吞嗜百分比或吞噬指數(shù)可測定吞噬細胞的吞嗜功能。主要試劑1. PBS 緩沖液2. 3硫代乙醇酸鈉3. 1羊紅細胞懸液4. 瑞氏染液5. 甲醇主要設(shè)備1. 解剖器材2. 注射器3. 尖吸管4. 橡皮吸頭5. 小試管6. 載玻片實驗材料ICR 小鼠實驗步驟1. 實驗準備：用無菌注射器吸取3硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內(nèi)。2. 四日后，注射1羊紅細胞懸液1ml 于小鼠腹腔內(nèi)。3. 注射1 小時后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml 預(yù)溫的PBS，同時用手反復(fù)揉搓腹腔約12 分鐘，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細胞。4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內(nèi)。5. 用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產(chǎn)生氣泡)，吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。6. 觀察結(jié)果，也可以將腹腔液涂片，平放于濕盤內(nèi)，37，孵育30 分鐘。取出涂片，用預(yù)溫的PBS 沖洗3 次，然后用甲醇固定1 分鐘，以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混勻后，滴于涂片上染色5-10 分鐘，以蒸餾水沖洗（切勿先將染液傾去）后，待干，鏡檢。7. 實驗結(jié)果觀察小鼠腹腔巨噬細胞和中性粒細胞對羊紅細胞的吞噬現(xiàn)象，計算吞噬百分比，即每100 個吞噬細胞中吞噬有羊紅細胞的細胞數(shù)。也可用吞噬指數(shù)表示，即將100 個吞噬細胞中所吞噬羊紅細胞的總數(shù)除以100，即為吞噬指數(shù)。吞噬百分比和吞噬指數(shù)一般是平行的。注意事項1. 充分揉搓腹腔，盡可能將吞噬細胞沖洗下來。2. 用尖吸管吸取腹腔液時，盡量避開腹腔臟器，避免損傷血管引起出血，影響實驗結(jié)果。

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