植物組培外植體消毒詳解.doc

植物組培外植體消毒詳解 外植體的消毒 植物組織培養(yǎng)用的外植體大部分取自田間，表面上附著大量的微生物，這是組織培養(yǎng)的一大障礙。因此在材料接種培養(yǎng)前必須要消毒處理，消毒一方面要求把材料表面上的各種微生物殺滅，同時(shí)又不能損傷或只輕微損傷組織材料而不影響其生長(zhǎng)。因此，外植體的消毒處理是植物組織培養(yǎng)工作中的重要一環(huán)。 （1）常用的消毒劑 常用的消毒劑如下表所示。理想的消毒劑應(yīng)具有消毒效果好，易被無(wú)菌水沖洗掉或能自行分解，對(duì)材料損傷小，對(duì)人體及其他生物無(wú)害，來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉。 常用消毒劑的使用方法及效果 酒精 酒精是最常用的表面消毒劑，以70%75%酒精殺菌效果最好，95%或無(wú)水酒精會(huì)使菌體表面蛋白質(zhì)快速脫水凝固，形成一層干燥膜，阻止了酒精的繼續(xù)滲入，殺菌效果大大降低。 酒精具有較強(qiáng)的穿透力，使菌體蛋白質(zhì)變性，殺菌效果好。同時(shí)它還具有較強(qiáng)的濕潤(rùn)作用，可排除材料上的空氣，利于其他消毒劑的滲入。但酒精對(duì)植物材料的殺傷作用也很大，浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，植物材料的生長(zhǎng)將會(huì)受到影響，甚至被酒精殺死，使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制時(shí)間。但酒精不能徹底消毒，一般不單獨(dú)使用，多與其他消毒劑配合使用。 升汞 又稱(chēng)氯化汞，Hg2+可以與帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白質(zhì)變性，從而殺死菌體。升汞的消毒效果極佳，但易在植物材料上殘留，消毒后需用無(wú)菌水反復(fù)多次沖洗。升汞對(duì)環(huán)境危害大，對(duì)人畜的毒性極強(qiáng)，使用后應(yīng)做好回收工作。 次氯酸鈉 次氯酸鈉是一種較好的消毒劑，它可以釋放出活性氯離子，從而殺死菌體。其消毒能力很強(qiáng)，不易殘留，對(duì)環(huán)境無(wú)害。但次氯酸鈉溶液堿性很強(qiáng)，對(duì)植物材料也有一定的破壞作用。 漂白粉 漂白粉的有效成分是次氯酸鈣Ca(ClO)2，消毒效果很好，對(duì)環(huán)境無(wú)害。它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。 過(guò)氧化氫 也稱(chēng)雙氧水，消毒效果好，易清除，又不會(huì)損傷外植體，常用于葉片的消毒。 新潔爾滅 這是一種廣普表面活性消毒劑，對(duì)絕大多數(shù)植物外植體傷害很小，殺菌效果好。 （2）消毒方法 莖尖、莖段及葉片等的消毒 消毒前先對(duì)植物組織進(jìn)行修整，去掉不需要的部分，然后用自來(lái)水沖洗。對(duì)于一些表面不光滑或長(zhǎng)有絨毛的材料，可用洗滌劑清洗，必要時(shí)用毛刷充分刷洗，硬質(zhì)材料可用刀刮。 消毒時(shí)在超凈臺(tái)上操作，先用70%酒精浸泡1030s，以無(wú)菌水沖洗23次，然后按材料的老、嫩和枝條的堅(jiān)實(shí)程度，分別采用2%次氯酸鈉浸泡1015min或用0.1%升汞浸510min。消毒時(shí)要不斷攪動(dòng)，使植物材料與消毒劑充分地接觸。若材料有絨毛，最好在消毒液中加入幾滴Tween-20，最后用無(wú)菌水沖洗35次。 果實(shí)及種子的消毒 先用自來(lái)水沖洗1020min，再用酒精迅速漂洗一下。果實(shí)用2%次氯酸鈉浸10min，后用無(wú)菌水沖洗23次。種子則先用10%次氯酸鈉浸泡2030min，難以消毒的可用0.1%升汞消毒510min。對(duì)于種皮太硬的種子，也可預(yù)先去掉種皮，再用4%次氯酸鈉浸泡810min。 花藥的消毒 用于組織培養(yǎng)的花藥多未成熟，其外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，處于無(wú)菌狀態(tài)。消毒時(shí)將整個(gè)花蕾或幼穗用70%酒精浸泡數(shù)秒鐘，然后用無(wú)菌水沖洗23次，再在漂白粉中浸泡10min，最后用無(wú)菌水沖洗23次。 根及底下部器官的消毒 由于這類(lèi)材料生長(zhǎng)于土壤中，表面帶菌量大，消毒較為困難。可先用自來(lái)水沖洗，軟毛刷刷洗，用刀切去損傷及污染嚴(yán)重部位，再用酒精漂洗后，置于0.1%升汞中浸510min或2%次氯酸鈉中浸1015min，最后用無(wú)菌水沖洗3次。 在操作時(shí)要根據(jù)材料的大小、幼嫩、