流式細胞分析.ppt

1,流式細胞術(shù)及臨床應(yīng)用,吳林軍 樂山市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科,2,01,流式細胞術(shù)的原理,流式細胞術(shù)是以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下經(jīng)熒光標記的單細胞（生物顆粒），通過檢測產(chǎn)生的散射光和熒光素發(fā)射熒光的強度，從而對細胞進行定性或者定量檢測，實現(xiàn)對目的細胞分析或分選的技術(shù)。,樣本傳輸與聚焦,信號產(chǎn)生與收集,信號檢測與存貯,整體架構(gòu)的支持和布局,3,fcm 的結(jié)構(gòu)一般分為5 部分： 流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng)； 激光光源及光束成形系統(tǒng)； 光學(xué)系統(tǒng)； 信號檢測、存貯、顯示、分析系統(tǒng)； 細胞分選系統(tǒng),4,流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng) 液流系統(tǒng)的作用是依次傳送待測樣本中的細胞到激光照射區(qū)，其理想狀態(tài)是把細胞傳送到激光束的中心。而且在特定時間內(nèi)，應(yīng)該只有一個細胞或粒子通過激光束。 鞘液的作用是將樣品流環(huán)包，鞘液流是一種穩(wěn)定流動，操作人員無法隨意改變其流動的速度，樣品流在鞘液的環(huán)包下形成流體力學(xué)聚焦，使樣品流不會脫離液流的軸線方向，并且保證每個細胞通過激光照射區(qū)的時間相等，從而得到準確的細胞熒光信息。如下圖。 因此，必須在流動室內(nèi)把細胞注入鞘液流。流動室是液流系統(tǒng)的核心部件。在流動室內(nèi)細胞液柱聚焦于鞘液中心，細胞在此與激光相交。,5,flow cell,injector tip,fluorescence,signals,focused laser,beam,sheath fluid,6,7,。 高流速適用于定性測量，如免疫表型。樣本流變寬，細胞間距離縮短，這樣在單位時間內(nèi)流經(jīng)激光照射區(qū)的細胞數(shù)量增加，可以快速獲取數(shù)據(jù)。 低流速促使樣本流變窄，單個細胞得以依次通過，這樣大多數(shù)細胞可流經(jīng)激光束的中心，細胞受激光照射的能量比較均一，因而低流速適用于檢測分辨率要求高的實驗，如dna分析,8,激光光源與光束成形系統(tǒng),目前臺式機fcm，大多采用氬離子氣體激光器。激光（light amplification by stimulated emission of radiation , laser）是一種相干光源，它能提供單波長、高強度及穩(wěn)定性高的光照，是細胞微弱熒光快速分析的理想光源，這是因為由于細胞快速流動，每個細胞經(jīng)過光照區(qū)的時間僅為1 微秒左右，每個細胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)出的熒光信號強弱，與被照射的時間和激發(fā)光的強度有關(guān)，因此細胞必須達到足夠的光照強度。,9,光學(xué)系統(tǒng),fcm 的光學(xué)系統(tǒng)是由若干組透鏡、濾光片、小孔組成，它們分別將不同波長的熒光信號送入到不同的電子探測器 在fcm 的光學(xué)系統(tǒng)中主要光學(xué)原件是濾光片（filter），主要分成3 類：長通濾片（long-pass filter, lp）、短通濾片（short-pass filtr, sp）及帶通濾片（band-pass filter, bp）。,10,pmt,pmt,pmt,pmt,dichroic,filters,bandpass,filters,example channel layout for laser-based flow cytometry,laser,1,2,3,4,flow cell,11,信號檢測與分析系統(tǒng),當細胞攜帶熒光素標記物，通過激光照射區(qū)時，受激光激發(fā)，產(chǎn)生代表細胞內(nèi)不同物質(zhì)、不同波長的熒光信號，這些信號以細胞為中心，向空間360 度立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光和熒光信號。,12,（1）散射光信號：散射光分為前向角散射（forward scatter,fsc）和側(cè)向角散射（sidescatter,ssc），散射光不依賴任何細胞樣品的制備技術(shù)（如染色），因此被稱為細胞的物理參數(shù)或稱固有參數(shù) 前向角散射：前向角散射與被測細胞的大小關(guān)，確切說與細胞直徑的平方密切相關(guān)，通常在fcm 應(yīng)用中，選取fsc 作閾值，來排除樣品中的各種碎片及鞘液中的小顆粒，以避免對被測細胞的干擾。 側(cè)向角散射：側(cè)向角散射是指與激光束正交90o 方向的散射光信號，側(cè)向散射光對細胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，可提供有關(guān)細胞內(nèi)精細結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。 以上兩種信號都是來自激光的原光束，其波長與激光的波長相同，目前采用這兩個參數(shù)組合，可區(qū)分裂解紅細胞處理后外周血白細胞中淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞三個細胞群體，或在未進行裂解紅細胞處理的全血樣品中找出血小板和紅細胞等細胞群體。,13,forward angle light scatter 前向角,14,90 degree light scatter 90度側(cè)向角,15,（2）熒光信號：當激光光束與細胞正交時，一般會產(chǎn)生兩種熒光信號。一種是細胞自身在激光照射下，發(fā)出微弱熒光信號，稱為細胞自發(fā)熒光；另一種是經(jīng)過特異熒光素標記細胞后，受激發(fā)照射得到的熒光信號，通過對這類熒光信號的檢測和定量分析，就能了解所研究細胞參數(shù)的存在與定量,16,流式細胞儀產(chǎn)生的信號,非熒光信號,顆粒度,細胞大小,17,上述兩種信號都是來自于激光原光束，目前采用這兩個參數(shù)組合，可區(qū)分不同種類的細胞亞群，同時可獲得細胞相關(guān)的重要信息，下圖（圖3-2）為fsc和ssc組成的二維散點圖，從圖中可以很容易把全血樣本中淋巴細胞、單核細胞及粒細胞區(qū)分開。,18,19,fcm 測量數(shù)據(jù)的存貯、顯示和分析,目前fcm 數(shù)據(jù)的存貯的方式均采用列表排隊（list mode）方式。因為目前fcm 所采用的都是多參數(shù)指標，熒光參數(shù)標記物如是4 個，采用list mode 方式可大量地節(jié)約內(nèi)存和磁盤容量。當一個細胞被測4 個參數(shù)，那么獲取10000 個細胞，所占容量為410000 個（字或雙字）。同時當只檢測1 個參數(shù)時（如dna），可靈活的關(guān)閉其它3 個參數(shù)，節(jié)省3/4 的空間。數(shù)據(jù)文件雖然有易于加工處理分析的優(yōu)點，但缺乏直觀性。數(shù)據(jù)的顯示通常有一維直方圖、二維點圖、等高線圖、密度圖等幾種。,20,fl5 (pe-cy7),fl3 (percp),fl2 (pe),fl1 (fitc),ss,488/10,530/30,fs,488/10,585/40,670lp,785/60,491/lp,550lp,645lp,660/20,785/60,740lp,488/10,反光鏡,fl6 (apc-cy7),fl4 (apc),反光鏡,fl1,fl2,01,流式細胞儀工作原理模擬圖,21,流式細胞儀臨床應(yīng)用,22,01,流式細胞術(shù)的檢測范圍及特點,流式細胞術(shù)在流動狀態(tài)中檢測細胞或顆粒的各項特性,檢測范圍 樣本種類：各種細胞（如外周血，骨髓，細針穿刺，灌洗液，實體組織，懸浮或貼壁培養(yǎng)的細胞）微生物，人工合成微球等; 可檢測免疫復(fù)合物、dna、rna、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)體、細胞器、ca2+等,特點 特異性強、靈敏度高、速度快；并能實現(xiàn)多參數(shù)分析；,紫色采血管,血液樣本要求： 抗凝（edta)全血2-3ml 樣本常溫保存不超過24小時 進行免疫球蛋白或白蛋白治療患者，三天內(nèi)不送檢,23,02,流式項目淋巴細胞亞群,24,免疫系統(tǒng),02,感染性疾病、自身免疫病、過敏性疾病、妊娠失敗、移植排斥、惡性腫瘤、衰老與亞健康等都有免疫平衡的異常變化,25,淋巴細胞亞群與免疫功能,02,t4細胞（cd3+cd4+） 誘導(dǎo)/輔助性t細胞,t8細胞（cd3+cd8+） 抑制/細胞毒性t淋巴細胞,b細胞（cd3-cd19+) 分泌抗體,nk細胞（cd3-cd16+cd56+）,t細胞（cd3+） 細胞免疫主力軍,特異性免疫,體液免疫主力軍,非特異性免疫,淋巴細胞亞群（t/b/nk）：淋巴細胞及其亞群的消長最能反映機體在不同條件下免疫功能的變化。 主要用于與免疫系統(tǒng)明顯相關(guān)疾病的輔助診斷、判斷病情、評估預(yù)后、指導(dǎo)治療及療效監(jiān)測,免疫力指標分析：,26,淋巴細胞亞群分析方法比較,02,淋巴細胞亞群檢測方法包括： 顯微鏡法、酶聯(lián)免疫法和流式細胞術(shù)法 流式細胞術(shù)操作簡便、快速、標本用量少，特異性高、穩(wěn)定性和重復(fù)性好，臨床實驗室檢測淋巴細胞亞群的標準方法。,淋巴細胞亞群檢測規(guī)范,27,淋巴細胞亞群分析腫瘤疾病,02,腫瘤發(fā)生、發(fā)展與免疫： 惡性腫瘤患者常存在免疫抑制現(xiàn)象。受損的免疫系統(tǒng)不能有效識別和殺傷腫瘤細胞。 淋巴細胞亞群的分類和計數(shù)，能夠真實反映腫瘤患者的免疫功能狀態(tài)，在腫瘤的鑒別診斷、臨床分期、療效監(jiān)測和預(yù)后判斷中發(fā)揮著重要作用。,1 診斷與鑒別診斷 對淋巴細胞惡性增殖性疾病進行初步篩查，如，淋巴瘤，淋巴瘤白血病等。 通過淋巴細胞亞群檢測有助于良性與惡性腫瘤的鑒別。 肺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌患者常表現(xiàn)為cd3細胞、cd4細胞及cd4/cd8比值降低，cd8細胞升高。 肺良性疾病、卵巢良性腫瘤和子宮肌瘤患者與健康對照者的細胞亞群和cd4/cd8比值無明顯明顯。,28,動態(tài)監(jiān)測免疫功能腫瘤疾病,02,2 臨床分期 不同發(fā)展階段的腫瘤患者，免疫功能狀態(tài)也存在很大差異。 隨病程進展，cd3、cd4、cd4/cd8逐漸降低，cd8逐漸增高。 期：cd4、cd8未見明顯抑制，cd4/cd8比值基本正常； 期：cd4減少明顯，cd8增高，cd4/cd8比值下降； -期：cd4顯著減少，cd8明顯降低，cd4/cd8下降或倒置。,29,動態(tài)監(jiān)測免疫功能腫瘤疾病,02,3 療效觀察 監(jiān)測治療前后患者免疫功能恢復(fù)的動態(tài)過程，有助于醫(yī)生確認治療方案是否有效。,現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)2010年09月第18卷第09期,4 判斷預(yù)后 惡性腫瘤病人的免疫功能多異常，手術(shù)、放療、化療等往往造成患者免疫功能進一步低下；導(dǎo)致患者發(fā)生感染、腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移或者二次腫瘤的危險增高。 臨床隨訪中動態(tài)檢測免疫功能有助于判斷病情的發(fā)展狀態(tài) 免疫狀態(tài)的恢復(fù)者，常預(yù)后較好，復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移幾率小 免疫狀態(tài)惡化則預(yù)示較高的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險，預(yù)后差,化療期間若聯(lián)合使用免疫增強劑（如干擾素、左旋咪唑等），流式檢測淋巴細胞亞群可見患者細胞免疫功能提高，化療副作用減輕，患者生存質(zhì)量提高。,30,動態(tài)監(jiān)測免疫功能腫瘤疾病,02,案例：對39例術(shù)后化療的期胃腺癌患者，利用流式細胞術(shù)，分別對術(shù)前第1天，術(shù)后1、3和6個月的靜脈血液循環(huán)中淋巴細胞亞群（cd3/cd4/cd8/cd19/cd16+56/cd25）進行檢測,結(jié)果顯示，在整個觀察期，復(fù)發(fā)組患者外周血的cd3+和cd4+t細胞和cd4+/cd8+比值始終低于未復(fù)發(fā)組 提示與cd3+和cd4+ t細胞減少相關(guān)的免疫抑制是iii期胃癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的危險因素,31,動態(tài)監(jiān)測免疫功能腫瘤疾病,02,案例：隨訪研究提示循環(huán)系統(tǒng)中cd19+淋巴細胞比例高的胃癌患者較cd19+淋巴細胞比例低的患者預(yù)后良好,32,動態(tài)監(jiān)測免疫功能腫瘤疾病,02,5 指導(dǎo)腫瘤免疫治療 免疫因子制劑(il-2,干擾素)、胸腺肽、活化的淋巴細胞(cik,lak),腫瘤疫苗等是目前臨床常用提高腫瘤患者免疫功能的方法,淋巴細胞亞群檢測在整個細胞治療過程中的質(zhì)量控制和療效評價環(huán)節(jié)起到至關(guān)重要的作用,33,動態(tài)監(jiān)測免疫功能腫瘤疾病,02,【臨床案例】 乳腺癌患者，女，52歲，經(jīng)左乳切除和化療治療。停藥一年后，腫瘤轉(zhuǎn)移至肺。 t淋巴細胞亞群檢測：cd4、cd3、cd4/cd8在化療期間和停藥各階段均明顯降低，而cd8則在停藥后06月、612月升高，提示該患者細胞免疫功能低下，免疫功能明顯受抑制。,治療（化、放療等）前后精確檢測t淋巴細胞亞群，準確判斷患者免疫功能 由粗放化向精細化轉(zhuǎn)變,改善治療： 化療中，同步給予免疫增強劑（如干擾素、左旋咪唑等）后， cd8下降，cd4、cd4/cd8升高，機體自身抗腫瘤免疫效得到有力發(fā)揮，患者恢復(fù)良好,34,淋巴細胞亞群分析風(fēng)濕免疫病,02,疾病機理 風(fēng)濕免疫病多由于自身免疫耐受的破壞，機體產(chǎn)生自身反應(yīng)性淋巴細胞和自身抗體，免疫功能的紊亂，常表現(xiàn)為淋巴細胞亞群不同程度地升高或降低 比如： ra活動期常表現(xiàn)為cd4+細胞、cd4/cd8比值 ，cd8+細胞 sle活動期常表現(xiàn)為cd4+細胞、cd4/cd8比值 ，cd8+細胞 非活動期，淋巴細胞亞群與正常人無明顯差異，故可根據(jù)cd4+、cd8+、cd4/cd8情況判斷活性期與非活性期,（clin rheumatol. 2000, 19:270274）,35,淋巴細胞亞群分析風(fēng)濕免疫病,02,免疫指標療效監(jiān)測 tbnk檢測是療效觀察的重要依據(jù)，治療有效時常表現(xiàn)為cd4、cd8、cd4/cd8比值恢復(fù)正常 舉例：sle治療前，cd4/cd8降低；聯(lián)合使用激素和甲氨蝶呤治療后，比值恢復(fù)正常，,（clin rheumatol. 2000, 19:270274）,36,淋巴細胞亞群分析風(fēng)濕免疫病,02,風(fēng)濕免疫病生物治療的療效預(yù)測監(jiān)測 美羅華（利妥昔單抗） 首個以b細胞為靶標治療ra的藥物。還用于sle和多發(fā)性硬化癥（ms）等自身免疫性疾病。 是全球第一個被批準用于臨床治療非霍奇金淋巴瘤（nhl）的單克隆抗體，用于復(fù)發(fā)或化療抵抗性b淋巴細胞型nhl。 作用機理自身免疫病的發(fā)病與b細胞相關(guān)，美羅華可選擇性地殺滅b細胞 美羅華治療后，b 淋巴細胞的下降得越早、清除得越徹底（0.1個/l），治療效果越好,（ arthritis rheum. 2013, 65:2783-90 ）,37,淋巴細胞亞群分析風(fēng)濕免疫病,02,免疫指標美羅華治療不良反應(yīng)的監(jiān)測 美羅華的副作用消除 b 淋巴細胞的同時，部分患者的 t 淋巴細胞也會下降。cd4+低于500個/l，可能導(dǎo)致機會性感染的發(fā)生。 tbnk檢測用于監(jiān)測美羅華治療過程中cd4+t細胞的水平。若出現(xiàn)cd4+細胞低于500個/l，需要醫(yī)生考慮預(yù)防性使用抗生素或改變治療方案,（ arthritis rheum. 2013, 65:2783-90 ）,38,淋巴細胞亞群分析風(fēng)濕免疫病,02,淋巴細胞亞群在風(fēng)濕免疫病治療中不良反應(yīng)監(jiān)測中的作用,一些細胞毒藥物（具有較強骨髓抑制作用），激素等，也可用于風(fēng)濕免疫病的治療。均對免疫功能有較大影響，因此應(yīng)定期通過tbnk監(jiān)測病人的免疫狀態(tài)。若免疫細胞數(shù)量低于正常值，臨床應(yīng)考慮預(yù)防性使用骨髓刺激藥物和抗生素。 臨床上可以通過白細胞計數(shù)、tbnk檢測等監(jiān)測免疫功能的變化。但由于化療藥物主要抑制的是各種淋巴細胞，因此以淋巴細胞亞群作為監(jiān)測項目更有意義。,常用治療藥物 甾體抗炎藥：如布洛芬 細胞毒藥物：如環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、環(huán)孢素a 糖皮質(zhì)激素：如潑尼松 生物制劑：如美羅華（利妥昔單抗）,39,老年人群的免疫功能評估,02,老年人群中普遍存在免疫老化現(xiàn)象：隨年齡增長，機體各器官功能下降，免疫系統(tǒng)功能發(fā)生退行性改變，機體對感染性疾病易感性升高。 免疫老化所致的免疫紊亂，是導(dǎo)致心腦血管疾病、腫瘤、感染等老年性疾病的重要因素。,40,老年病人手術(shù)圍手術(shù)期免疫監(jiān)測術(shù)前風(fēng)險評價，預(yù)防術(shù)后感染,02,心臟手術(shù) 示例：心臟手術(shù)后，年齡越大的老年患者（如75歲）總淋巴細胞數(shù)、cd3細胞數(shù)和b細胞數(shù)更低（與60歲的老年患者比較），該結(jié)果提示高齡老年患者術(shù)后免疫功能低下，具高度感染的風(fēng)險,骨關(guān)節(jié)手術(shù) 老年人骨質(zhì)疏松，易發(fā)生骨折。如進行關(guān)節(jié)成形術(shù)的老年患者，當免疫功能低下，易誘發(fā)感染。 如術(shù)后發(fā)生肺炎常表現(xiàn)：cd4、cd8和b細胞百分比減少發(fā)生泌尿系統(tǒng)感染：cd4細胞、cd8細胞減少。因此淋巴細胞亞群百分比降低是術(shù)后感染的一個重要危險指標。 不同年齡患者，其b細胞、cd4細胞百分比也呈現(xiàn)不同水平，特別是cd4細胞百分比隨著年齡增大逐漸降低。,（ rev ortop traumatol (madr.). 2007, 51:309-13）,（ journal of laboratory and clinical medicine. 1997, 129:592-602）,特點：手術(shù)創(chuàng)傷、麻醉、圍手術(shù)期輸血均可產(chǎn)生免疫抑制；,【術(shù)前】可預(yù)測患者手術(shù)預(yù)后情況，特別是老年患者（提高老年患者免疫水平，可增加手術(shù)安全性）。 【術(shù)后】及時掌握手術(shù)后恢復(fù)進程，減少患者手術(shù)并發(fā)癥、術(shù)后感染發(fā)生率及死亡率（老年患者，術(shù)后3d內(nèi)是并發(fā)感染的危險期）。,41,淋巴細胞亞群分析健康體檢,02,免疫與健康 免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定與平衡是人體抵抗病原微生物的侵襲，保持健康的前提。 不良的生活習(xí)慣、長期處于競爭激烈、超負荷運轉(zhuǎn)的強壓緊張狀態(tài)中，均容易引起機體免疫功能紊亂，形成亞健康狀態(tài)。 免疫功能紊亂會導(dǎo)致身體抵抗力差，體質(zhì)變的敏感，不僅容易被細菌或病毒感染，還容易發(fā)生過敏反應(yīng)，甚至出現(xiàn)自體免疫錯亂，產(chǎn)生自身免疫病。 定期進行體檢，監(jiān)測機體免疫狀態(tài)，有助于預(yù)防疾病的發(fā)生。,42,淋巴細胞亞群分析與健康體檢亞健康、慢性疲勞綜合癥,02,慢性疲勞綜合癥患者可見免疫功能紊亂 慢性疲勞綜合癥常表現(xiàn)各種不適的自我感覺，但臨床各項檢查和化驗結(jié)果常為陰性。 淋巴細胞亞群檢測可見患者免疫功能紊亂，若不加以干預(yù)，免疫力進一步低下會誘發(fā)各種疾病。,健康體檢與免疫“識別”亞健康人群 一項針對廣州市非體力勞動者的亞健康狀況的流行病學(xué)研究表明，亞健康人群免疫力低下表現(xiàn)為： cd3細胞、cd4細胞百分比和cd4cd8比值顯著降低 cd4細胞絕對值降低。,43,免疫功能檢測與中醫(yī)藥完美結(jié)合,02,中醫(yī)診病療特點：辨證論治，從機體整體入手，扶正祛邪 中醫(yī)的重要貢獻：治未病（治未病之?。?淋巴細胞亞群： 反映機體免疫功能的重要指標，可為中醫(yī)臨床辨證分型和治療提供客觀的免疫學(xué)依據(jù)。,證候是中醫(yī)學(xué)理論的核心。 施治之時，皆據(jù)證議法，譴藥立方，其著眼點全在于證候。,44,中醫(yī)藥免疫檢測與亞健康狀態(tài),03,免疫力檢測使得這個理念完美結(jié)合 許多白領(lǐng)、公務(wù)員、教師、醫(yī)生工作繁忙透支生命，處于亞健康狀態(tài)，這時免疫力處于低下狀態(tài)。檢測 cd 系列細胞數(shù)值偏低，中醫(yī)辨證為“虛證”。 雖然未發(fā)?。ㄎ麽t(yī)無法診斷出疾?。枰{(diào)理和干預(yù)，應(yīng)用中醫(yī)的理論辯證施治，有明顯的效果，起到西醫(yī)起不到的作用。,“上醫(yī)治未病” 扁鵲曰：上醫(yī)治未病之病，中醫(yī)治將病之病，下醫(yī)治已病之病 中醫(yī)、中藥治未病之病，這是防病、治病的重要理念。,45,中醫(yī)藥免疫監(jiān)測與亞健康狀態(tài),02, 女，28歲，主訴疲倦乏力、睡眠不佳，易感冒，無其他器質(zhì)性疾病。舌淡，苔薄白，表面粗糙，脈浮虛。屬正氣不足，元氣虛弱。輔以t淋巴細胞亞群檢測，cd4偏低、cd4/cd8在正常范圍下限。 治療：用玉屏風(fēng)散，生黃芪120克，炒白術(shù)180克，防風(fēng)60克，制成散劑，每日9克，代茶飲。,一療程后，患者cd4、cd4/cd8顯著升高，主訴癥狀明顯改善，感冒次數(shù)減少，說明患者正氣提升，免疫功能得到有效提高。,論文發(fā)表：加味玉屏風(fēng)湯對提高慢性病患者cd4指標臨床觀察 上海中醫(yī)藥雜志,2007年第41期第10卷,46,免疫功能與感染性疾病,02,免疫功能紊亂，易引發(fā)感染性疾病,感染，同時可直接抑制、干擾和損傷免疫系統(tǒng),淋巴細胞介導(dǎo)的免疫功能在人體抗感染中發(fā)揮重要作用 在抗菌或抗病毒時，進行免疫調(diào)節(jié)，提高療效，可少用或慎用抗菌素。指導(dǎo)抗菌素的應(yīng)用。,47,淋巴細胞亞群變遷的意義感染性疾病,02,細菌性感染 t4細胞 t8或 t4/t8比值,病毒/胞內(nèi)菌/寄生蟲感染 t8細胞 t4或 t4/t8比值,上述變化是指感染的初期中期； 全身性感染變化幅度大于局部性感染； 不同病原微生物感染引起的變化幅度不同； 不同個體的淋巴細胞反應(yīng)性不同，變化幅度有差別； 晚期，患者t、t4、t8細胞全線減少。,t淋巴細胞,自身免疫性性疾病 b細胞輕微 igm ,細菌性感染 b細胞 igg ,變態(tài)反應(yīng) b細胞 ige ,b淋巴細胞,nk細胞,48,淋巴細胞亞群分析與感染性疾病艾滋病,02,艾滋病 （1）疾病診斷：cd4細胞與hiv/aids診斷 aids患者cd4+t淋巴細胞計數(shù)的進行性減少與疾病惡化進程呈正相關(guān)，是hiv感染的特征性變化之一 who推薦使用cd4+t淋巴細胞計數(shù)作為aids疾病確診及病情惡化程度的檢驗標準。,進行性hiv感染的診斷標準： iii期和iv期臨床癥狀 和/或 cd4細胞350/mm3。 成人及15歲以上青少年符合以下一項者即可診斷為艾滋病 cd4細胞200/mm3 有成人艾滋病指征性疾?。╟組臨床表現(xiàn)） 15歲一下兒童符合以下一項者即可診斷為艾滋病 cd4細胞25%（11月齡），或20%（12-35月齡），或15%（36-59月齡），或 200/mm3 （5-14歲） 有小兒艾滋病指征性疾?。╢組臨床表現(xiàn)）,（ws 293-2008 艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準，2008）,49,淋巴細胞亞群分析與感染性疾病艾滋病,02,cd4細胞與hiv/aids治療啟動治療時機 成人：cd4細胞500/mm3 1-5歲兒童：cd4細胞500/mm3或25% iii期和iv期臨床癥狀 和/或 cd4細胞350/mm3 合并活動性結(jié)核；合并活動性hbv，需要抗hbv治療；妊娠；配偶或固定性伴侶中hiv陽性的一方 1歲嬰兒,治療監(jiān)控 病毒學(xué)監(jiān)測：hiv rna拷貝 免疫學(xué)監(jiān)測：cd4細胞,治療失敗、更換治療方案 病毒學(xué)失?。篽iv rna拷貝 免疫學(xué)失敗：cd4細胞下降到或低于基線水平，或降低至峰值的50%，或持續(xù)低于100/mm3 臨床失敗：機會性感染或腫瘤,50,淋巴細胞亞群分析與感染原發(fā)性免疫缺陷病,02,流式檢測淋巴細胞亞群可作為原發(fā)性免疫缺陷病常規(guī)篩查項目,免疫指標原發(fā)性免疫缺陷病分型和輔助診斷,51,淋巴細胞亞群分析與感染性疾病傳染性單核細胞增多癥,02,細胞免疫傳染性單核細胞增多癥（im） 血象中異型淋巴細胞增多（多為t淋巴細胞，且以cd8+t細胞為主）。 b細胞是ebv的靶細胞 異淋手工鏡檢操作時間長，易受主觀影響 tbnk檢測可輔助傳單的診斷： cd3、cd8細胞明顯 cd4、cd4/cd8、b細胞顯著 ,【案例一】某女孩，11歲診斷傳單，cd4細胞減少，占8%左右，未進行干預(yù)治療，康復(fù)后一直沒有回升，16歲并發(fā)nk細胞瘤。 【案例二】某男孩，16歲診斷傳單，cd4細胞減少，12%左右；臨床給予積極治療，康復(fù)復(fù)查24%左右，至今還是24%。,im有轉(zhuǎn)化成血液病的風(fēng)險 加用免疫調(diào)節(jié)藥物促進疾病的恢復(fù)，隨訪監(jiān)測淋巴細胞亞群。,52,淋巴細胞亞群分析與感染性疾病反復(fù)呼吸道感染,02,廣東醫(yī)學(xué), 2012, 33（4）,通過檢測cd3、cd4、cd8了解rrti患兒用藥前后免疫功能變化，從而判斷藥效，指導(dǎo)選藥方案。,三者聯(lián)合應(yīng)用，能明顯提高患兒免疫功能，減少呼吸道感染發(fā)生率，安全無不良反應(yīng)。,玉屏風(fēng)顆粒聯(lián)合鐵劑和鋅劑，可提高反復(fù)呼吸道感染患兒免疫功能。,兒童反復(fù)呼吸道感染（rrti） 免疫功能低下，與患兒反復(fù)呼吸道感染的發(fā)生密切相關(guān)： 患兒的cd3、cd4、cd4/cd8比值均明