公英青藍(lán)合劑中添加金剛乙胺的測定　超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（定稿）

ICS11.220B 42DB37山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 37/T XXXXXXXXX公英青藍(lán)合劑中添加金剛乙胺的測定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Determination addition of rimantadine in gongyingqinglan mixtureUPLC-MS/MSXXXX - XX - XX發(fā)布XXXX - XX - XX實施山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB37/ XXXXXXXXX目次前言II1 范圍12 規(guī)范性引用文件13 原理14 試劑或材料15 儀器設(shè)備16 試驗步驟26.1 樣品溶液的制備26.2 基質(zhì)匹配對照溶液的制備26.3 儀器參考條件26.4 測定37 試驗數(shù)據(jù)處理38 精密度3附錄A （資料性附錄） 金剛乙胺特征離子質(zhì)量色譜圖4前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省市場監(jiān)督管理局提出并監(jiān)督實施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省獸藥質(zhì)量檢驗所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張傳津、魏秀麗、李有志、陳玲、張志民、趙有軒、張呈軍、章安源、尹伶靈。4公英青藍(lán)合劑中添加金剛乙胺的測定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公英青藍(lán)合劑中金剛乙胺的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于公英青藍(lán)合劑中金剛乙胺的測定。本方法檢測限為2 g/mL，定量限為5 g/mL。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3 原理公英青藍(lán)合劑中的金剛乙胺經(jīng)稀釋后，超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定，依據(jù)保留時間和離子豐度比定性，外標(biāo)法定量。4 試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T 6682一級水的規(guī)定。4.1 甲醇（CH3OH）：色譜純。4.2 甲酸（HCOOH）：色譜純。4.3 流動相：a) 流動相A 甲醇(含0.1 %甲酸)：吸取甲酸（4.2）1.0 mL，加甲醇（4.1）稀釋至1 000 mL，過0.22 m微孔濾膜備用；b) 流動相B 水溶液（含0.1 %甲酸）：吸取甲酸（4.2）1.0 mL，加水稀釋至1 000 mL，過0.22 m微孔濾膜備用；c) 初始比例流動相：量取甲醇（含0.1 %甲酸）（4.3.1）100 mL與水溶液（含0.1 %甲酸）（4.3.2）400 mL，混勻，備用。4.4 金剛乙胺對照品，純度不得小于99.9 %。4.5 金剛乙胺對照儲備液：稱取金剛乙胺對照品（4.4）10 mg（準(zhǔn)確至0.01 mg），置100 mL容量瓶中，加甲醇（4.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻。4 冰箱保存，有效期3個月。4.6 有機(jī)微孔濾膜：0.22 m。5 儀器設(shè)備5.1 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源（ESI）。5.2 分析天平：感量0.000 01 g。5.3 離心機(jī)（5 000 r/min）。6 試驗步驟6.1 樣品溶液的制備公英青藍(lán)合劑搖勻，精密吸取空白公英青藍(lán)合劑0.2 mL，置50 mL離心管中，加19.8 mL甲醇（4.1），超聲處理10 min，5 000 r/min離心5 min，有機(jī)微孔濾膜過濾，精密量取濾液1 mL，置50 mL容量瓶中加初始流動相（4.3.3）稀釋至刻度，搖勻，有機(jī)微孔濾膜濾過，即得空白基質(zhì)溶質(zhì)。待測樣品以上法處理，得供試樣品溶液。6.2 基質(zhì)匹配對照溶液的制備精密吸取金剛乙胺對照儲備液（4.5）0.2 mL，置20 mL容量瓶中，加空白基質(zhì)溶液（6.1）稀釋至刻度，搖勻，從中精密量取1 mL置50 mL容量瓶中，加空白基質(zhì)溶液（6.1）稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得20 ng/ml的對照溶液。 6.3 儀器參考條件6.3.1 高效液相色譜參考條件色譜柱：C18色譜柱，50 mm2.1 mm1.7 m，或性能相當(dāng)者。流動相A：甲醇（含0.1 %甲酸）。流動相B：水溶液（含0.1 %甲酸）。流速：0.3 mL/min。進(jìn)樣量：10 L。柱溫：35 。液相色譜梯度洗脫條件見表1。表1 液相色譜梯度洗脫條件時間/min流速/(mLmin-1)流動相A/%流動相B/%曲線00.320800.50.3208062.00.3802063.00.38020640.32080150.320806.3.2 質(zhì)譜參考條件電離模式：電噴霧正離子（ESI+）。毛細(xì)管電壓：3 kv。離子源溫度：110 。脫溶劑溫度：320 。脫溶劑氮氣流速：550 L/h。檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。金剛乙胺的定性、定量離子對和碰撞能量見表2。表2 定性離子對、定量離子對、錐孔電壓和碰撞能量品名定量離子對定性離子對錐孔電壓/V碰撞能量/eV金剛乙胺180.6163.2180.6163.2180.6107.22020306.4 測定6.4.1 定性測定通過樣品溶液色譜圖的保留時間與相應(yīng)對照溶液的保留時間、各色譜峰的特征離子與相應(yīng)對照溶液各色譜峰的特征離子相對照定性。樣品溶液與對照溶液保留時間的相對偏差不大于2.5 %；樣品溶液特征離子的相對離子豐度與對照溶液的相對離子豐度一致，相對離子豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判斷樣品中存在金剛乙胺。表3 定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度50 %20 %至50 %10 %至20 %10 %允許的相對偏差20 %25 %30 %50 %6.4.2 定量測定取樣品溶液和對照溶液各10 L注入液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，在上述色譜-質(zhì)譜條件下進(jìn)行測定，記錄質(zhì)量色譜圖，外標(biāo)法定量。典型的金剛乙胺對照溶液中特征離子的質(zhì)量色譜圖參見附錄A。7 試驗數(shù)據(jù)處理樣品中金剛乙胺的含量按下式計算：(1)式中：X 試樣中金剛乙胺的含量，單位為毫克每毫升（mg/mL）；C 試樣溶液中金剛乙胺濃度，單位為微克每毫升（g/mL）；V1 試樣溶液總體積（按6.1描述為1 000），單位為毫升（mL）；V 試樣的取樣量，單位為毫