鈣鎂磷的測(cè)定.ppt

實(shí)驗(yàn)十七 偶氮胂法測(cè)血鈣,血漿中約含鈣2.1mmol/(8.410.2mg/dl)，以三種形式存在：非擴(kuò)散鈣(non-difusional calcium)：是指與血漿蛋白相結(jié)合的鈣，占血漿總鈣的45%；離子鈣(ion calcium)：是具有生理活性的部分，約占血漿總鈣的50%；絡(luò)合鈣(chelating calcium)：主要指與枸櫞酸結(jié)合的鈣，是體內(nèi)鈣的一種運(yùn)輸方式，約占血漿總鈣的5%左右。鈣離子和絡(luò)合鈣都能透過毛細(xì)血管壁，故統(tǒng)稱為擴(kuò)散鈣。血鈣的測(cè)定方法很多，一般可分為總鈣測(cè)定和離子鈣測(cè)定法。前者包括同位素稀釋質(zhì)譜法(isotope diluting mass spectrometry)、原子吸收光譜法(atomic absorption spectroscopy，AAS)、分光光度法(spectrophotography)和絡(luò)合滴定法(chelating titration)等。AAS是最常用的準(zhǔn)確測(cè)定血漿總鈣含量的參考方法，但費(fèi)用昂貴，不適于常規(guī)工作；分光光度法中以甲基百里香酚藍(lán)比色法（methyl thymol blue colorimetry）和偶氮胂比色法（Arsenazo colorimetry）最常用。絡(luò)合滴定法簡便易行，但判斷終點(diǎn)受主觀因素影響，有被淘汰趨勢(shì)，但不少基層實(shí)驗(yàn)室仍延用。離子選擇電極法測(cè)定離子鈣已在臨床廣泛應(yīng)用。分光光度法已被廣泛用自動(dòng)生化分析議分析。,【實(shí)驗(yàn)原理】 在堿性條件下，樣品中鈣與偶氮胂作用生成藍(lán)色復(fù)合物，其顏色深淺與鈣濃度成正比，通過在660nm波長處測(cè)定吸光度的變化值，與經(jīng)過同樣處理的鈣校準(zhǔn)液進(jìn)行比較，即可計(jì)算出樣品中鈣含量。,【操作步驟】 測(cè)定管（U） 標(biāo)準(zhǔn)管（S） 空白管（B） 試劑（ml） 2.0 2.0 2.0 37恒溫5分鐘 蒸餾水（ml） - - 0.02 標(biāo)準(zhǔn)液（ml） - 0.02 - 血清 0.02 - - 混勻，37恒溫2分鐘，660nm波長，以空白管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度。,【計(jì)算】 樣品鈣含量（mmol/L）= 2.50 【參考范圍】血清鈣：2.12.6mmol/L 【臨床意義】 （1）低鈣血癥見于 攝入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹瀉、阻塞性黃疸；需要增加：妊娠后期及哺乳期婦女；吸收減少：佝僂病、甲狀旁腺功能減退癥；腎臟疾病：急、慢性腎衰竭、腎病綜合征、腎小管性酸中毒；壞死性胰腺炎。 （2）高鈣血癥見于 攝入鈣過多：靜脈用鈣過量、大量飲用牛奶等；原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥、腎癌等使血鈣升高；服用維生素D過多，鈣吸收作用增強(qiáng)；骨?。鹤冃涡怨茄?、轉(zhuǎn)移性骨癌、多發(fā)性骨髓瘤等，骨溶解增加；具有異位內(nèi)分泌作用的腫瘤；長期制動(dòng)引起骨骼脫鈣。,【評(píng)價(jià)】 1. 線性范圍：0.006.00mmol/L，0.99。 2. 精密度：批內(nèi)、批間平均CV分別5.0% 3. 準(zhǔn)確度：不準(zhǔn)確度10% 4. 試劑空白吸光度值0.35。 【注意事項(xiàng)】 1. 樣品中鈣含量超過5.00mmol/L，則用生理鹽水稀釋后測(cè)定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。 2. 測(cè)試溫度無嚴(yán)格規(guī)定，但色素對(duì)溫度敏感，應(yīng)保持反應(yīng)體系恒溫。 3. 高脂樣本會(huì)引起測(cè)定結(jié)果假性升高，可用樣本空白管校正。 4. 反應(yīng)形成的色素可穩(wěn)定2小時(shí)。 5. 所用試驗(yàn)器材必須清潔，沒有鈣污染。 6. 試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。 7. 試劑使用后立即關(guān)緊瓶蓋，避免污染。 8. 使用肝素作為抗凝劑時(shí)濃度不能太高，每毫升血液中肝素濃度應(yīng)小于50單位。不能使用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA等作抗凝劑。,實(shí)驗(yàn)十七 鈣鎂試劑比色法測(cè)血鎂 【目的要求】 1.掌握比色法測(cè)血鎂 2.熟悉血鎂測(cè)定的其他方法 【實(shí)驗(yàn)原理】 血清中的鎂在堿性條件下，與金屬色原染料鈣鎂試劑（calmagite)反應(yīng)生成紫紅色絡(luò)合物。顏色深淺與美的濃度成正比，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)品比較，可以求得鎂的含量。,【操作步驟】 測(cè)定管（U） 標(biāo)準(zhǔn)管（S） 空白管（B） 試劑（ml） 2.0 2.0 2.0 37恒溫5分鐘 蒸餾水（ml） - - 0.02 標(biāo)準(zhǔn)液（ml） - 0.02 - 血清 0.02 - - 混勻，37恒溫2分鐘，540nm波長，以空白管調(diào)零，測(cè)定各管吸光度。,【計(jì)算】 樣品鎂含量（mmol/L）= 1.0 【參考范圍】血清鎂：0.671.04mmol/L 【評(píng)價(jià)】 1. 線性范圍：2.0mmol/L10%。 2. 精密度：批內(nèi)、批間平均CV分別5.0% 3. 準(zhǔn)確度：不準(zhǔn)確度10% 4. 試劑空白吸光度值1.10。,【注意事項(xiàng)】 1. 試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。 2. 測(cè)試溫度無嚴(yán)格規(guī)定，但色素對(duì)溫度敏感，應(yīng)保持反應(yīng)體系恒溫。 3. 高脂樣本會(huì)引起測(cè)定結(jié)果假性升高，可用樣本空白管校正。 4. 反應(yīng)形成的色素可穩(wěn)定1小時(shí)。 5. 所用試驗(yàn)器材必須清潔，沒有鎂污染。 6. 所用試劑具有毒性和腐蝕性，請(qǐng)勿用口吸吸管，如有污染，應(yīng)立刻用大量流水沖洗。,實(shí)驗(yàn)十八 還原鉬藍(lán)法測(cè)血清磷,血液中的磷( phosphorus )主要有兩種形式：有機(jī)磷和無機(jī)磷。血清無機(jī)磷含量與血鈣有一定關(guān)系，兩者濃度的乘積為一常數(shù)（以mg/dl濃度計(jì)算，乘積等于40）。磷參與機(jī)體糖、脂類及氨基酸的代謝，是骨鹽的主要成分，也是轉(zhuǎn)運(yùn)能量的物質(zhì)，磷酸鹽是調(diào)節(jié)酸堿平衡的重要緩沖體系之一。 【目的要求】 1.掌握此法測(cè)血磷的原理。 2.熟悉血磷測(cè)定的其他方法,【實(shí)驗(yàn)原理】 利用磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸復(fù)合物，用對(duì)甲氨基酚硫酸鹽還原生成鉬藍(lán)，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，可求得血磷的含量。試劑中加入聚山梨酯-80以抑制蛋白質(zhì)干擾。,【操作步驟】 測(cè)定管（U）標(biāo)準(zhǔn)管（S）空白管（B） 去離子水（ml） - - 0.1 磷標(biāo)準(zhǔn)液（ml） - 0.1 - 血清 0.1 - - 顯色液（ml） 4.0 4.0 4.0,混勻，37恒溫10分鐘，650nm波長，以空白管調(diào)零， 測(cè)定各管吸光度。,【計(jì)算】 樣品磷含量（mmol/L）= 1.29 【參考值】成人0.97 1.62 mmol/L；兒童1.45 2.10 mmol/L 【臨床意義】 1. 低磷血癥見于 攝入不足和吸收減少：饑餓或惡病質(zhì)、吸收不良綜合征、嘔吐、腹瀉、長期應(yīng)用含鋁的制劑等；磷轉(zhuǎn)移入細(xì)胞內(nèi)：靜脈注射葡萄糖、胰島素及堿中毒、妊娠等；丟失過多：血液透析、腎小管酸中毒、急性痛風(fēng)等；其他：如酒精中毒、糖尿病酮癥酸中毒、維生素D缺乏癥等。 2. 高磷血癥見于 甲狀旁腺功能減退癥、維生素D過多癥、Addison病、肢端肥大癥、多發(fā)性骨髓瘤等。,體重約見5%的無機(jī)鹽主要有C