課件原料中非蛋白氮的檢測(cè).PPT

,原料中非蛋白氮的檢測(cè),1. 器皿和設(shè)備 1.1 立體顯微鏡 1.2 實(shí)驗(yàn)室用粉碎機(jī) 1.3 PH計(jì) 1.4 漩渦混合器 1.5 45 目篩 1.6 試管 1.7 培養(yǎng)皿 1.8 滴管 1.9 點(diǎn)滴板 1.10 常規(guī)化驗(yàn)設(shè)備和玻璃器皿,2. 化學(xué)試劑 2.1 尿素酶，Merck # 1.08489.00005(或等效) 2.2 溴百里香酚蘭，分析純 2.3 氫氧化鈉，分析純 2.4 鹽酸 37%，分析純 2.5 二苯胺，分析純 2.6 Chromotropic acid(C10H6O8S2Na2)，分析純 2.7 硫酸 98%，分析純 2.8 碘化鉀，分析純 2.9 氯化汞，分析純 2.10 石油醚，分析純 2.11 無水乙醇，分析純 2.12 三聚氰酸，分析純 2.13 尿素，分析純 2.14 硝酸鉀，分析純 2.15 氯化銨，分析純 2.16 三聚氰胺，分析純 2.17 生物蛋白精 ESB 2.18 尿醛聚合物 2.19 蒸餾水,3. 試劑準(zhǔn)備 3.1 0.4尿素酶 取 0.4g 尿素酶溶于 100ml 蒸餾水中，放在冰箱里保存。 3.2 0.1的溴百里酚藍(lán) 取 0.1g 溴百里酚藍(lán)溶于1.6ml 0.1N NaOH(NaOH 0.4g 溶于 100ml 水)，混勻，用蒸餾水定容到 100 ml，用 0.1N HCL(量取 0.88ml HCL加入到 100ml 蒸餾水中)標(biāo)定PH 2.32.4，之后將溶液轉(zhuǎn)入棕色玻璃試劑瓶，放在冰箱里保存。 3.3 0.5二苯胺 取 0.5g 二苯胺，倒入 20ml 蒸餾水，再慢慢加入 80ml 硫酸混勻即可。 3.4 0.5的變色酸 取 0.5g 變色酸，倒入 100ml 硫酸中，攪勻即可。 3.5 20% NaOH 取 20g NaOH溶于蒸餾水里，然后定容到 100 毫升，混勻，室溫保存。 3.6 奈斯勒試劑 3.5g KI加入 1.25g HgCl2 加入 80ml 蒸餾水，攪拌，加 12g NaOH ，用蒸餾水定容到 100ml，用濾紙過濾溶液，將濾液保存到棕色玻璃試劑瓶中。,3.7 75% H2SO4 緩慢將 25ml 濃硫酸注入 25ml 蒸餾水中，混勻，室溫保存。 3.8 40% 乙醇 將 40ml 乙醇與 60ml 蒸餾水混勻，室溫保存。 3.9 飽和三聚氰酸溶液 取 1g 三聚氰酸溶于 100ml 80蒸餾水中，混勻，室溫保存。 3.10 參照物準(zhǔn)備,3.10 參照物準(zhǔn)備 通過將幾種非蛋白氮化學(xué)藥品混合到原料中制備非蛋白氮的參照物，按參照物樣品重量為100克計(jì)算。,為了使樣品結(jié)果有效，NPN參照樣品必須和待測(cè)樣品一起檢測(cè)。,4. 檢測(cè)步驟 檢測(cè)方法包括對(duì)尿素、銨鹽、硝酸鹽/亞硝酸鹽、尿醛聚合物、生物蛋白精和三聚氰胺的檢測(cè)。如果樣品在檢測(cè)前需要脫脂，下面有兩種脫脂方法。 常規(guī)脫脂 快速脫脂 樣品放在濾紙里包裹好 將樣品放在大燒杯中 加入石油醚沒過樣品 用石油醚浸泡 攪動(dòng)15分鐘 用濾紙過濾收集脫脂樣品 等待2-3小時(shí) 取出濾紙包放到通風(fēng)櫥風(fēng)干 樣品放到通風(fēng)櫥風(fēng)干,稱取2克樣品+10ml蒸餾水,靜置10分鐘,尿素檢測(cè),銨鹽檢測(cè),硝酸鹽檢測(cè),攪拌、混勻10-15秒,取上清液檢測(cè)非蛋白氮,4.1 尿素/銨鹽/硝酸鹽,取上清液檢測(cè)非蛋白氮,靜置10分鐘,取上清液 6-8 滴在點(diǎn)滴板,尿素檢測(cè),加0.1%溴百里香酚蘭 2-3滴，0.4%尿素酶4-5滴。,結(jié)果：藍(lán)色,銨鹽檢測(cè),硝酸鹽檢測(cè),加2-3滴奈氏勒試劑,結(jié)果：深橘紅色變灰,加0.5%二苯胺2-3滴,結(jié)果：中間出現(xiàn)蘭黑色,取上清液 6-8 滴在點(diǎn)滴板,取上清液6-8滴在點(diǎn)滴板,4.2 尿醛聚合物 有兩種方法判斷尿醛聚合物。 4.2.1 方法1 范圍：適合于動(dòng)物類產(chǎn)品和植物類產(chǎn)品。 脫脂后的動(dòng)物類產(chǎn)品(植物類產(chǎn)品不必脫脂) 用45目篩篩得細(xì)粉部分和粗粉部分 取6-8滴0.5%變色酸于點(diǎn)滴板上 取少量篩得的細(xì)粉于0.5%變色酸的點(diǎn)滴板上 結(jié)果：5-10分鐘內(nèi)出現(xiàn)紫羅蘭色,判定最低限 0.15%,4.2.2 方法2 范圍：僅適用于動(dòng)物類產(chǎn)品。 取3g樣品于50ml具塞離心管里 加35ml煮沸的20%NaOH溶液 漩渦混勻后，放置5分鐘 將上清液倒掉，留取下沉物 加35ml蒸餾水 混勻，放置5分鐘 倒掉上清液 用蒸餾水洗滌下沉物3-4次，直至洗滌液透明 下沉物用蒸餾水轉(zhuǎn)移到10ml試管中 加1ml0.5%變色酸，混合后觀察顏色 如果顏色不明顯可以再加1ml0.5%變色酸，混合后觀察顏色 結(jié)果：呈現(xiàn)紫羅蘭色,判定最低限 0.25%,4.3 ESB生物蛋白精檢測(cè) 范圍：適用于動(dòng)物類產(chǎn)品和植物類產(chǎn)品 用45目篩篩得細(xì)粉部分和粗粉部分 取一些篩下細(xì)粉放到點(diǎn)滴板上 滴0.5%二苯胺覆蓋在樣品上 在顯微鏡下觀察結(jié)果 結(jié)果：表面漂浮灰白色或淺藍(lán)色小點(diǎn),判定最低限0.1%,4.4 三聚氰胺檢測(cè) 有兩種方法判定三聚氰胺。 4.4.1 方法1 (0.5%二苯胺/奈斯勒方法) 用45目篩篩得細(xì)粉部分和粗粉部分 取一些篩下細(xì)粉放到點(diǎn)滴板上 滴0.5%二苯胺覆蓋在樣品上 在顯微鏡下觀察三聚氰胺為明顯的晶體 確認(rèn)結(jié)果后繼續(xù)下面操作 從脫脂后的篩下細(xì)粉里挑出懷疑部分 加2滴75%硫酸，等待1分鐘 加5滴奈斯勒試劑，等待3-5分鐘 顯微鏡下觀察 結(jié)果：白色部分呈橘紅色,判定最低限 0.05%,4.4.2 方法2 (三聚氰酸法) 適合于動(dòng)物類產(chǎn)品 適合于植物類產(chǎn)品 取 4g 脫脂樣品 取 5g 樣品 用45目篩篩得細(xì)粉部分放到具塞離心管 用45目篩篩得細(xì)粉部分放到試管里 加 40ml 40%乙醇 用三氯甲烷