GB 5413.13-2010發(fā)布稿 嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測定 發(fā)布稿.pdf

中華人民共和國國家標準中華人民共和國國家標準GB 5413.132010前 言 本標準代替GB 5413.13-1997嬰幼兒配方食品和乳粉 維生素B6的測定。 本標準與GB 5413.13-1997相比，主要變化如下： 標準名稱改為嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測定； 完善了維生素B6含量的計算。 本標準附錄A為資料性附錄。 本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為： GB 5413-1985、GB 5413.13-1997。 中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實施食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中維生素 B6的測定 National food safety standard Determination of vitamin B6 in foods for infants and young children, milk and milk products GB 5413.132010 I 前 言 本標準代替GB 5413.13-1997嬰幼兒配方食品和乳粉 維生素B6的測定。 本標準與GB 5413.13-1997相比，主要變化如下： 標準名稱改為嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測定； 完善了維生素B6含量的計算。 本標準附錄A為資料性附錄。 本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為： GB 5413-1985、GB 5413.13-1997。 GB 5413.132010 1 食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中維生素 B6的測定 1 范圍 本標準規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中維生素 B6的測定方法。 本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素 B6的測定。 2 規(guī)范性引用文件 本標準中引用的文件對于本標準的應用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。 3 原理 試樣經(jīng)熱水提取等前處理后，經(jīng) C18色譜柱分離，熒光檢測器檢測，外標法定量測定維生素 B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）的含量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的一級水。 4.1 淀粉酶：酶活力1.5 U/mg。 4.2 辛烷磺酸鈉：優(yōu)級純。 4.3 冰乙酸：優(yōu)級純。 4.4 甲醇：色譜純。 4.5 三乙胺：色譜純。 4.6 鹽酸溶液（5.0 mol/L，0.1 mol/L）。 4.7 氫氧化鈉溶液（5.0 mol/L，0.1 mol/L）。 4.8 標準溶液 4.8.1 維生素 B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）標準貯備液（1 mg/mL）：稱取 0.05 g（精確至 0.0001 g）吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標準品，分別置于 50 mL 容量瓶中，用水溶解定容。 4.8.2 維生素 B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）混合標準中間液（20 g/mL）：分別準確吸取吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標準貯備液（4.8.1）1 mL 至 50 mL 容量瓶中，用水定容。 4.8.3 維生素 B6（吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）混合標準系列測定液：分別準確吸取維生素 B6混合標準中間液（4.8.2）0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、5.0 mL，至 100 mL 容量瓶中，用水定容。該標準系列濃度分別為 0.00 g/mL、0.20 g/mL、0.40 g/mL、0.60 g/mL、1.00 g/mL。臨用前配制。 5 儀器和設備 5.1 超聲波振蕩器。 GB 5413.132010 2 5.2 高效液相色譜儀，帶熒光檢測器。 5.3 天平：感量為 0.1 mg。 5.4 pH 計：精度為 0.01。 5.5 培養(yǎng)箱：30 80 。 6 分析步驟 6.1 試樣預處理 6.1.1 含淀粉的試樣：稱取混合均勻固體試樣約 5.0 g（精確至 0.0001 g），加入約 25 mL 45 50 的水，或稱取混合均勻液體試樣約 20.0 g（精確至 0.0001 g）于 150 mL 錐形瓶中。加入約 0.5 g 淀粉酶（4.1），混勻后向錐形瓶中充氮，蓋上瓶塞，置 50 60 培養(yǎng)箱內(nèi)約 30 min。取出冷卻至室溫。 6.1.2 不含淀粉的試樣： 稱取混合均勻固體試樣約 5.0 g （精確至 0.0001 g） ， 加入約 25 mL 45 50 的水，或稱取混合均勻液體試樣約 20.0 g（精確至 0.0001 g）于 150 mL 錐形瓶中?；靹虿⒊浞秩芙猓o置 5 min10 min，冷卻至室溫。 6.2 待測液的制備 6.2.1 用鹽酸溶液（4.6）調(diào)節(jié)試樣溶液的 pH 值至 1.7 0.1，放置約 1 min。再用氫氧化鈉溶液（4.7）調(diào)節(jié)試樣溶液的 pH 值至 4.5 0.1。 6.2.2 將試樣溶液轉(zhuǎn)移至 50 mL 容量瓶中，用水沖洗錐形瓶。洗液合并于 50 mL 容量瓶中，用水定容至 50 mL。 6.2.3 把上述容量瓶放入超聲波振蕩器中，超聲振蕩約 10 min。 6.2.4 另取 50 mL 三角瓶，上面放入三角漏斗和濾紙，把超聲波振蕩的試樣溶液倒入其中，自然過濾。濾液再經(jīng) 0.45 m 微孔濾膜加壓過濾，用試管收集，即為試樣待測液。 6.3 參考色譜條件 色譜柱：C18柱 （粒徑5 m，150 mm 4.6 mm）或同等性能的色譜柱。 流動相：甲醇（4.4）50 mL，辛烷磺酸鈉（4.2）2.0 g，三乙胺（4.5）2.5 mL，用水溶解并定容到1000 mL后，用冰乙酸（4.3）調(diào)pH至3.0 0.1，再經(jīng)0.45 m微孔濾膜加壓過濾。 流速：1.0 mL/min。 檢測波長：激發(fā)波長 293 nm，發(fā)射波長 395 nm。 進樣量：10 L。 6.4 定量分析 6.4.1 標準曲線繪制 將維生素 B6混合標準系列測定液（4.8.3）依次進行色譜測定（其標準樣品色譜圖參見附錄 A 中圖A.1）。記錄各組分的色譜峰面積或峰高，以峰面積或峰高為縱坐標，以標準測定液的濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 6.4.2 試樣測定 將試樣待測液（6.2.4）進行色譜測定。記錄各組分色譜峰面積或峰高，根據(jù)標準曲線計算出試樣待測液中維生素 B6各組分的濃度 ci。 7 分析結果的表述 7.1 試樣中維生素B6各組分的含量的計算 試樣中維生素B6各組分的含量按式（1）計算： GB 5413.132010 3 mVcXii100=（1） 式中： Xi試樣中組分的含量，單位為微克每百克（g/100 g）； ci試樣待測液中維生素B6各組分的濃度，單位為微克每毫升（g/mL）； m試樣的質(zhì)量，單位為克（g）； V試樣溶液的體積，單位為毫升（mL）。 7.2 試樣中維生素B6的含量的計算 試樣中維生素B6的含量按式（2）計算： 006. 1012. 1+=胺醛醇XXXX（2） 式中： X試樣中維生素B6含量，單位為微克每百克（g/100 g）； X醇試樣中吡哆醇含量，單位為微克每百克（g/100 g）； X醛試樣中吡哆醛含量，單位為微克每百克（g/100 g）； X胺試樣中吡哆胺含量，單位為微克每百克（g/100 g）； 1.012吡哆醛的含量換算成吡哆醇的系數(shù)； 1.006吡哆胺的含量換算成吡哆醇的系數(shù)。 注：試樣中維生素B6含量以吡哆醇計。 以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數(shù)字。 8 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10 %。 9 其他 本標準檢出限為：吡哆醇 1.5 g/100 g、吡哆醛 1.3 g/100 g、吡哆胺 1.6 g/100 g。 GB 5413.132010 4 附錄 A （資料性附錄） 維生素 B6標準溶液的液相色譜圖 A.1 維生素 B6標準溶液的液相色譜圖 維生素 B6標準溶液的液相色譜圖見圖 A.1。 F luores cence0