GB 5413.18-2010發(fā)布稿 嬰幼兒食品和乳品中維生素C的測定 發(fā)布稿.pdf

中華人民共和國國家標準中華人民共和國國家標準GB 5413.182010中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部 發(fā)布 2010-03-26 發(fā)布 2010-06-01 實施食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中維生素 C 的測定 National food safety standard Determination of vitamin C in foods for infants and young children, milk and milk products GB 5413.182010 I 前 言 本標準代替GB/T 5413.18-1997嬰幼兒配方食品和乳粉 維生素C的測定。 本標準與GB/T 5413.18-1997相比，主要變化如下： 明確了酶的活力單位； 改變了鄰苯二胺溶液濃度； 含淀粉試樣處理進行了改變； 增加了加入硼酸乙酸鈉溶液后的反應時間； 增加了加入鄰苯二胺溶液后的反應時間。 本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為： GB 5413-1985、GB/T 5413.18-1997。 GB 5413.182010 1 食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中維生素 C 的測定 1 范圍 本標準規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中維生素 C 的測定方法。 本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素 C 的測定。本標準測定的是還原型維生素 C 和氧化型維生素 C 的總量。 2 規(guī)范性引用文件 本標準中引用的文件對于本標準的應用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。 3 原理 維生素 C（抗壞血酸）在活性炭存在下氧化成脫氫抗壞血酸，它與鄰苯二胺反應生成熒光物質，用熒光分光光度計測定其熒光強度，其熒光強度與維生素 C 的濃度成正比，以外標法定量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的三級水。 4.1 淀粉酶：酶活力 1.5 U/mg，根據(jù)活力單位大小調整用量。 4.2 偏磷酸乙酸溶液 A：稱取 15 g 偏磷酸及 40 mL 乙酸（36 %） 于 200 mL 水中，溶解后稀釋至 500 mL 備用。 4.3 偏磷酸乙酸溶液 B：稱取 15 g 偏磷酸及 40 mL 乙酸（36 %）于 100 mL 水中，溶解后稀釋至 250 mL 備用。 4.4 酸性活性炭：稱取粉狀活性炭（化學純，80 目200 目）約 200 g，加入 1 L 體積分數(shù)為 10 的鹽酸， 加熱至沸騰， 真空過濾， 取下結塊于一個大燒杯中， 用水清洗至濾液中無鐵離子為止， 在 110120 烘箱（5.3）中干燥約 10 h 后使用。 檢驗鐵離子的方法：普魯士藍反應。將20 g/L亞鐵氰化鉀與體積分數(shù)為1 %的鹽酸等量混合，將上述洗出濾液滴入，如有鐵離子則產(chǎn)生藍色沉淀。 4.5 乙酸鈉溶液：用水溶解 500 g 三水乙酸鈉，并稀釋至 1 L。 4.6 硼酸乙酸鈉溶液：稱取 3.0 g 硼酸，用乙酸鈉溶液（4.5）溶解并稀釋至 100 mL，臨用前配制。 4.7 鄰苯二胺溶液（400 mg/L）：稱取 40 mg 鄰苯二胺，用水溶解并稀釋至 100 mL，臨用前配制。 GB 5413.182010 2 4.8 維生素 C 標準溶液（100 g/mL）：稱取 0.050 g 維生素 C 標準品，用偏磷酸乙酸溶液 A（4.2）溶解并定容至 50 mL，再準確吸取 10.0 mL 該溶液用偏磷酸乙酸溶液 A（4.2）稀釋并定容至 100 mL，臨用前配制。 5 儀器和設備 5.1 熒光分光光度計。 5.2 天平：感量為 0.1 mg。 5.3 烘箱：溫度可調。 5.4 培養(yǎng)箱：45 1 。 6 分析步驟 6.1 試樣處理 6.1.1 含淀粉的試樣：稱取約 5 g（精確至 0.0001 g）混合均勻的固體試樣或約 20 g（精確至 0.0001 g）液體試樣（含維生素 C 約 2 mg）于 150 mL 三角瓶中，加入 0.1 g 淀粉酶（4.1），固體試樣加入 50 mL 45 50 的蒸餾水， 液體試樣加入 30mL 45 50 的蒸餾水， 混合均勻后， 用氮氣排除瓶中空氣，蓋上瓶塞，置于 45 1 培養(yǎng)箱（5.4）內 30 min，取出冷卻至室溫，用偏磷酸乙酸溶液 B（4.3）轉至 100 mL 容量瓶中定容。 6.1.2 不含淀粉的試樣：稱取混合均勻的固體試樣約 5 g（精確至 0.0001 g），用偏磷酸乙酸溶液 A（4.2）溶解，定容至 100 mL。或稱取混合均勻的液體試樣約 50 g（精確至 0.0001 g），用偏磷酸乙酸溶液 B（4.3）溶解，定容至 100 mL。 6.2 待測液的制備 6.2.1 將上述試樣（6.1.1，6.1.2）及維生素 C 標準溶液（4.8）轉至放有約 2 g 酸性活性炭（4.4）的250 mL 三角瓶中，劇烈振動，過濾（棄去約 5 mL 最初濾液），即為試樣及標準溶液的濾液。然后準確吸取 5.0 mL 試樣及標準溶液的濾液分別置于 25 mL 及 50 mL 放有 5.0 mL 硼酸乙酸鈉溶液（4.6）的容量瓶中，靜置 30 min 后，用蒸餾水定容。以此作為試樣及標準溶液的空白溶液。 6.2.2 在此30 min內， 再準確吸取5.0 mL試樣及標準溶液的濾液于另外的25 mL及50 mL放有5.0 mL乙酸鈉溶液（4.5）和約 15 mL 水的容量瓶中，用水稀釋至刻度。以此作為試樣溶液及標準溶液。 6.2.3 試樣待測液：分別準確吸取 2.0 mL 試樣溶液（6.2.2）及試樣的空白溶液(6.2.1)于 10.0 mL 試管中，向每支試管中準確加入 5.0 mL 鄰苯二胺溶液（4.7），搖勻，在避光條件下放置 60 min 后待測。 6.2.4 標準系列待測液：準確吸取上述標準溶液（6.2.2）0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL 和 2.0 mL，分別置于 10 mL 試管中，再用水補充至 2.0 mL。同時準確吸取標準溶液的空白溶液（6.2.1）2.0 mL 于 10 mL試管中。向每支試管中準確加入 5.0 mL 鄰苯二胺溶液（4.7），搖勻，在避光條件下放置 60 min 后待測。 6.3 測定 6.3.1 標準曲線的繪制 將標準系列待測液（6.2.4）立刻移入熒光分光光度計的石英杯中，于激發(fā)波長 350 nm，發(fā)射波長430 nm 條件下測定其熒光值。以標準系列熒光值分別減去標準空白熒光值為縱坐標，對應的維生素 C質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 6.3.2 試樣待測液的測定 GB 5413.182010 3 將試樣待測液（6.2.3）按（6.3.1）的方法分別測其熒光值，試樣溶液熒光值減去試樣空白溶液熒光值后在標準曲線上查得對應的維生素 C 質量濃度。 7 分析結果的表述 試樣中維生素 C 的含量按式(1)計算： 1000100=mfVcX(1) 式中： X試樣中維生素 C 的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g） ； V試樣的定容體積，單位為毫升（mL）； c由標準曲線查得的試樣測定液中維生素 C