實(shí)驗(yàn)一X染色質(zhì)標(biāo)本制備與觀察.ppt

實(shí)驗(yàn)一 X染色質(zhì)標(biāo)本制備與觀察,目的要求 （1）掌握X染色質(zhì)標(biāo)本制備方法及其原理。 （2）掌握X染色質(zhì)的形態(tài)特征及其臨床意義。,實(shí)驗(yàn)原理,一個(gè)個(gè)體不論其細(xì)胞中有幾條X染色體，均只有一條具有轉(zhuǎn)錄活性，其余的X染色體均失活形成異固縮的X染色質(zhì)。正常女性間期細(xì)胞核中X染色質(zhì)陽(yáng)性率一般約為10一30，有的可高達(dá)50以上。其出現(xiàn)率的高低與個(gè)體不同生理狀態(tài)、染色方法、染色技術(shù)以及X染色體在細(xì)胞核中的位置不同有關(guān)。在男性間期細(xì)胞核中則平均低于1。一般檢查X染色質(zhì)確定性別時(shí)，觀察200個(gè)細(xì)胞，X染色質(zhì)出現(xiàn)5以上者為女性?，F(xiàn)在，X染色質(zhì)檢查已廣泛應(yīng)用于臨床，作為性別測(cè)定和性染色體數(shù)目異常的一種輔助診斷方法。,實(shí)驗(yàn)用品,(1)器材：顯微鏡、載玻片、牙簽。 (2)試劑 ：Giemsa染液、0.2甲苯胺藍(lán)染液 、5mol/L HCl溶液 、95乙醇、pH 6.8 PBS (3)材料：人口腔黏膜上皮細(xì)胞。,（一） Giemsa染色法 (1)取材制片：先讓受檢者用水漱口數(shù)次，然后用牙簽鈍頭部刮取口腔下唇內(nèi)側(cè)面，棄去第一次刮到的細(xì)胞，在同一部位連刮幾次，將刮取物均勻涂在干凈的載玻片上晾干。 (2)固定：將帶有標(biāo)本的載玻片置入裝有新配置的甲醇-冰醋酸固定液（3：1）的染色缸中固定10min后取出，空氣干燥。 (3)水解：玻片標(biāo)本置于5mol/L HCl中，室溫水解20 min。用新鮮蒸餾水沖洗四次，充分洗去殘留的HCl。 (4)染色：置Giemsa染液中染色10min ，蒸餾水沖洗后晾干，酒精燈上過(guò)火脫水，以二甲苯透明(1-2min)，樹(shù)膠封片。,（二）甲苯胺藍(lán)染色法,(1)取材制片：先讓受檢者用水漱口數(shù)次，然后用牙簽鈍頭部刮取口腔下唇內(nèi)側(cè)面，棄去第一次刮到的細(xì)胞，在同一部位連刮幾次，將刮取物均勻涂在干凈的載玻片上晾干。 (2)固定：用95%乙醇固定30分鐘。 (3)水解：玻片標(biāo)本置于5mol/L HCl中，室溫水解20 min。用新鮮蒸餾水沖洗四次，充分洗去殘留的HCl。 (4)染色：0.2甲苯胺藍(lán)染液染色510min。 (5)鏡檢：自來(lái)水漂洗，空氣干燥后油鏡下觀察。,觀察與結(jié)果,高倍鏡下可見(jiàn)許多染成藍(lán)色的細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)不著色或不明顯。選擇核較大，染色清晰，輪廓完整，核質(zhì)呈均勻細(xì)網(wǎng)狀的細(xì)胞進(jìn)行觀察。找到核膜內(nèi)側(cè)緣有藍(lán)色濃染小體的細(xì)胞核后，換油鏡進(jìn)一步觀察。油鏡下X染色質(zhì)為藍(lán)色平凸形、三角形、扁平形的濃染小體。,注意事項(xiàng),(1)取材前要漱口，以免口腔中的雜質(zhì)影響觀察效果。 (2)HCl水解要充分，使X染色質(zhì)易于顯現(xiàn)。 (3)臨床檢查時(shí)要選擇形態(tài)好的細(xì)胞觀察，計(jì)算100個(gè)細(xì)胞中X染色質(zhì)出現(xiàn)的頻率。,