禽流感、哈獸研傾情相送.ppt

禽 流 感 病 毒,-哈爾濱獸醫(yī)所 組員：王馥梅、郭瑩瑩、郭利敏 孫芬芬、王亞欣、張美晶 許傲天、黃文強(qiáng)、高立,流感病毒的命名,病毒粒子特點(diǎn),禽流感病毒是正粘病毒科流感病毒屬的一個(gè)成員。病毒顆粒呈球形、桿狀或長(zhǎng)絲狀，為多形性。,直徑為80一120 nm，表面有一層棒狀和蘑菇狀的纖突，前者對(duì)紅細(xì)胞有凝集性，稱(chēng)血凝素（HA），后者有能將吸附在細(xì)胞表面上的病毒粒子解脫下來(lái)的作用，稱(chēng)神經(jīng)氨酸酶（NA）。纖突的一端鑲嵌在病毒的脂囊膜，囊膜下面有一層膜蛋白，緊緊地包裹著呈螺旋狀對(duì)稱(chēng)的核衣殼。核衣殼的直徑為915nm，由RNA、核蛋白及三個(gè)多聚酶所組成。,根據(jù)核糖核蛋白抗原性不同分為三個(gè)類(lèi)型，即A、B、C三型。其中B、C兩型僅能對(duì)人致病，A型可對(duì)人、豬、馬和禽致病。 依據(jù)病毒表面的兩種糖蛋白血凝素和神經(jīng)氨酸酶可將A型流感病毒分成若干亞型。目前已有16種HA和9種NA，不同的H抗原或N抗原之間無(wú)交叉反應(yīng)。,核酸為單股負(fù)鏈RNA，分為8個(gè)不同的片段，在核酸外面包被著螺旋排列的殼粒，主要是由核蛋白(NP)構(gòu)成。,8個(gè)核酸片段：,A 型和B 型AIV中,1 個(gè)6 個(gè)片段均編碼單個(gè)蛋白,分別為PB2 、PB1 、PA 、HA 、NP 和NA ;第7 個(gè)和第8 個(gè)片段均編碼2 個(gè)蛋白,分別為M1 、M2 和NS1 、NS2 。這10 個(gè)病毒蛋白中,有8 個(gè)是病毒粒子的組成成分( HA、NA、NP、M1 、M2 、PB1 、PB2 和PA) ,分子質(zhì)量最小的RNA 段編碼2 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白,即NS1 和NS2 。,流感病毒病毒有囊膜，對(duì)乙醚、氯仿、丙酮等脂溶劑敏感。20%乙醚4處理2h 可使病毒裂解，但血凝滴度不受影響。常用消毒藥容易將其滅活，如福爾馬林、-丙內(nèi)酯、去氧膽酸鈉、稀酸、氨離子、鹵素化合物(如漂白粉和碘劑等)、重金屬離子等都能迅速破壞其傳染性。禽流感病毒對(duì)熱比較敏感，65加熱30分鐘或煮沸(100) 2分鐘以上均可滅活。病毒在糞便中存活1周，在水中可存活1個(gè)月，在pH 4.1的條件下也具有存活能力病毒對(duì)低溫抵抗力較強(qiáng)，在有甘油保護(hù)的情況卜，可保持活力1年以上。病毒在直接陽(yáng)光下40-48小時(shí)即可滅活，紫外線直接照射，可迅速破壞其傳染性。對(duì)凍融作用相對(duì)較穩(wěn)定，但反復(fù)凍融，最終可使病毒滅活。,流行病學(xué),禽流感病毒在自然條件下，能感染多種禽類(lèi) 。病毒在這些野禽中大多形成無(wú)癥狀的隱性感染，而成為禽流感病毒的天然貯毒庫(kù)。 家禽中以火雞最為敏感，雞、雉雞、鴿、鵪鶉、鷓鴣、鴕鳥(niǎo)等均可受禽流感病毒的感染而大批死亡。,傳染源：主要來(lái)自野生禽類(lèi)（尤其是野生水禽）、受感染的家禽以及觀賞鳥(niǎo)等。,傳播途徑：禽流感是高度接觸性的傳染病，可通過(guò)多種途徑傳播感染，被感染禽群的糞便及分泌物污染的飼料、飲水、空氣中的塵埃以及籠具、蛋品、種苗、衣物、運(yùn)輸工具，均可通過(guò)各種渠道進(jìn)入其他的健康禽群。帶病毒的候鳥(niǎo)和野生水禽在遷棲過(guò)程中，沿途可散播病毒。觀賞鳥(niǎo)、參賽的鴿子以及其它參加展覽的鳥(niǎo)類(lèi)都可直接或間接將病毒散播到敏感禽群內(nèi)。與帶毒的人或豬的接觸也可能引起病毒的傳播。,該病一年四季均可流行，但以冬季和氣溫驟冷驟熱的季節(jié)更易暴發(fā)。,癥狀,產(chǎn)蛋雞在感染H9N2等低致病力病毒后，最常見(jiàn)的癥狀是產(chǎn)蛋率下降，但下降程度不一。,小鴨流鼻汁癥狀,病鴨的呼吸癥狀,肉雞、未開(kāi)產(chǎn)的種雞和蛋雞除沒(méi)有產(chǎn)蛋下降的變化外，其余的癥狀與上述產(chǎn)蛋雞相似。鴿、雉、珍珠雞、鴕鳥(niǎo)、鵪鶉、鷓鴣等感染低致病力禽流感后，臨床癥狀與雞相似。,由高致病力毒株，如H5N1禽流感病毒感染雞后形成的高致病力禽流感，其臨床癥狀多為急性經(jīng)過(guò)。,病雞頭部腫脹，冠和肉髯發(fā)黑，眼分泌物增多，眼結(jié)膜潮紅、水腫，拉稀糞。褪色蛋、無(wú)殼蛋、畸形蛋增多， 雞腳鱗片下呈紫紅色或紫黑色。少數(shù)病雞出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，包括轉(zhuǎn)圈、前沖、后退、頸部扭歪或后仰望天等。,雞冠腫脹壞死， 眼臉及周?chē)叨饶[脹,雞冠與肉呈腫脹紫紺,腳鱗的紫變 感染AIV的病雞多呈腳鱗的紫變與雞冠壞死、 出血為本病的特征，本圖所示者為腳膝關(guān)節(jié) (圖上方)周?chē)淖仙兓?病鴨角弓反張,病變,常見(jiàn)的肉眼病理變化為喉氣管充血、出血，在氣管叉處有黃色干酪樣物阻塞，氣囊膜混濁，典型的纖維素性腹膜炎，輸卵管黏膜充血、水腫，卵泡充血、出血、變形，腸黏膜充血或輕度出血，胰腺有斑狀灰黃色壞死點(diǎn)。,腺胃乳頭、腺胃與肌胃交界處、腺胃與食道交界處、肌胃角質(zhì)膜下、十二指腸黏膜出血。,腺胃及肌胃出血,鴨流感胰腺出血病變,流感病毒的研究情況：,1 病毒結(jié)構(gòu)蛋白M2： M2基因包含1439 和728995兩個(gè)部分,其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在剪切40727位的內(nèi)含子后, 拼接成成熟的mRNA后翻譯成M2蛋白。M2蛋白是97個(gè)氨基酸的跨膜蛋白,大量表達(dá)于感染細(xì)胞表面,包括細(xì)胞外氨基端(23個(gè)氨基酸殘基) 、跨膜區(qū)(2543氨基酸殘基) 以及位于細(xì)胞內(nèi)的羧基端( 54 個(gè)氨基酸殘基) 。,M2蛋白是一個(gè)相對(duì)較小的病毒成分,其生物活性形式是一個(gè)寡四聚體。M2蛋白包括3個(gè)半胱氨酸殘基Cys217、Cys219 和Cys250,大多數(shù)M2 通過(guò) Cys217和Cys219形成二硫鍵連接成M2二聚體,再 由非共價(jià)鍵連接形成同源四聚體,而Cys250 被酰基 化。,M2蛋白在病毒復(fù)制中具有重要作用,也是抗病毒藥物作用靶點(diǎn) M2蛋白是重要的病毒抗原,在疫苗發(fā)展中具有重要意義,2 病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1： NS1主要在核內(nèi),在感染的早期就被大量合成，A型流感病毒NSl基因全序列為890個(gè)核苷酸,有兩個(gè)編碼區(qū)。第1個(gè)編碼區(qū)編碼含202個(gè)237個(gè)氨基酸的NSl 蛋白,在不同病毒株系間有差異。第2 個(gè)編碼區(qū)編碼含121個(gè)氨基酸的NS2蛋白,其5端有56個(gè)核苷酸與NSl相同,整個(gè)mRNA 包含一個(gè)中斷的含473個(gè)核苷酸的區(qū)域。,（1）NSl 蛋白對(duì)宿主細(xì)胞蛋白合成有抑制作用 研究表明,AIV 的NSl 蛋白具有RNA 結(jié)合活性,其可以通過(guò)以下方式抑制宿主細(xì)胞蛋白的合成:抑制宿主細(xì)胞mRNA 的多聚腺苷酸化; 與宿主細(xì)胞內(nèi)的多種蛋白質(zhì)相互作用; 結(jié)合宿主細(xì)胞發(fā)生多聚腺苷酸化的mRNA 并抑制宿主細(xì)胞mRNA的核輸出; 與小核RNA 結(jié)合,阻斷前mRNA 的剪接過(guò)程,（2）NSl 蛋白有利于病毒的合成與表達(dá) AIV 的NSl 蛋白在與宿主細(xì)胞核蛋白相互作用,抑制宿主細(xì)胞核內(nèi)mRNA 輸出的同時(shí),也大大 提高了宿主細(xì)胞的前mRNA 在細(xì)胞核內(nèi)的濃度與 壽命,因?yàn)椴《镜拿币蕾?lài)性?xún)?nèi)切酶能從宿主細(xì)胞前 mRNA 上將多聚腺苷酸帽子切下來(lái)并用來(lái)作為合 成病毒RNA 的引物,所以宿主細(xì)胞前mRNA 在細(xì) 胞核內(nèi)的積累有利于病毒mRNA 的合成。,（3）NS1 蛋白與宿主細(xì)胞凋亡的關(guān)系 NSl 蛋白通過(guò)上調(diào)表達(dá)PKR 細(xì)胞內(nèi)抑制物的濃度來(lái)抑制PKR 的激活,或是通過(guò)直接結(jié)合PKR 和抑制IRF23 ( IFN regulatory factor3 ,IRF3) ,來(lái)抑制PKR 的激活,從而延緩細(xì)胞凋亡。,（4）NS1 蛋白的干擾素及腫瘤壞死因子的頡頏作用 流感病毒NSl 基因在抑制干擾素、細(xì)胞因子和NF2B 通路中發(fā)揮了關(guān)鍵性作用。 NS1 蛋白可作為一種鑒別診斷標(biāo)志,通過(guò)檢測(cè)抗NS1 蛋白的抗體來(lái)區(qū)分野毒感染和疫苗免疫,并可作為早期感染的依據(jù)。,3 禽流感病毒抗原的變異與效應(yīng)： （1）禽流感病毒抗原變異 1.1點(diǎn)突變 流感病毒的RNA復(fù)制酶缺乏校正閱讀能力,編碼HA和NA蛋白質(zhì)的基因非同義替換的積累使其基因容易發(fā)生突變而發(fā)生抗原漂移. 流感病毒HA 基因的突變率較高,據(jù)估計(jì),每個(gè)復(fù)制周期中每個(gè)核苷酸的突變幾率為2 10- 3 ,也就是說(shuō)病毒每復(fù)制一代, HA基因上大約有一個(gè)堿基發(fā)生變異.,1.2基因重排 A型流感病毒是分節(jié)段、單股負(fù)連的RNA病毒,有8個(gè)基因片段. 當(dāng)2個(gè)或2個(gè)以上的不同病毒粒子同時(shí)感染1個(gè)宿主細(xì)胞時(shí),在病毒的增殖過(guò)程中,不同毒粒子的8個(gè)基因組片段可以隨機(jī)相互交換,從而發(fā)生核酸片段水平上的重新組合,理論上通過(guò)基因片段的重排有可能產(chǎn)生256種遺傳不同的子代病毒. 在自然界,這種混合感染的現(xiàn)象比較常見(jiàn),例如日本在20世紀(jì)80年代和90年代曾從發(fā)生豬流感(H3N2 , H1N1 )混合感染的豬群中分離到H1N2 基因重組型流感病毒. 通過(guò)基因重排有可能產(chǎn)生高致病力的毒株,幸運(yùn)的是,迄今為止,造成嚴(yán)重?fù)p失的均為H5 和H7 亞型.,(2)禽流感病毒抗原變異引起的效應(yīng)： HA受體結(jié)合位點(diǎn)變異 切割位點(diǎn)附近的氨基酸變異 HA切割位點(diǎn)附近的潛在糖基化位點(diǎn)改變,4 致病機(jī)制： 流感病毒的感染過(guò)程,吸附、穿膜與脫殼,與病毒表面蛋白血凝素有關(guān) 血凝素裂解為兩個(gè)由二硫鍵連接的亞基（HA1與HA2）是誘發(fā)感染的前提 流感病毒的受體結(jié)合部位(receptor binding site)位于HA頭部頂端 細(xì)胞受體是位于細(xì)胞膜糖蛋白或糖脂鏈末端的唾液酸,血凝素結(jié)構(gòu),流感病毒的復(fù)制及調(diào)控,只有當(dāng)vRNA與NP同時(shí)存在時(shí)，vRNA才可轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核內(nèi) NP、RNA聚合酶亞基和NS1在感染后最初數(shù)小時(shí)即生成 其他蛋白質(zhì)如HA、NA、M1、M2和NS2合成較晚 流感病毒在特定時(shí)間內(nèi)合成的蛋白成分均要通過(guò)宿主細(xì)胞的介入進(jìn)入核內(nèi)完成vRNP的組裝 M1是vRNP向核外轉(zhuǎn)運(yùn)的動(dòng)力，只有在細(xì)胞中合成M1，并且進(jìn)人細(xì)胞核后才發(fā)生vRNP的核外轉(zhuǎn)運(yùn),病毒的組裝、成熟與釋放,NP在細(xì)胞漿內(nèi)合成后 ，很快進(jìn)人細(xì)胞核與vRNA結(jié)合形成核殼體 M1蛋白合成后到達(dá)細(xì)胞膜，緊貼于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)面 病毒膜蛋白合成后先要進(jìn)行結(jié)構(gòu)上的修飾和加工 ，然后被轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞膜上 病毒以出芽方式釋放子代病毒顆粒,流感病毒感染發(fā)病機(jī)制,流感病毒感染和病毒復(fù)制主要在上呼吸道上皮細(xì)胞，但常引起機(jī)體局部炎癥和全身性反應(yīng) 機(jī)體反應(yīng)主要與炎癥性細(xì)胞因子、趨化因子、誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(iNOS)、粘附分子和微小纖溶酶表達(dá)與活化有關(guān),激活p53和phosphatidylinositol 3 - kinase ( PBK) /Akt信號(hào)通路誘導(dǎo)病毒的增殖 誘導(dǎo)IKK-NF-B信號(hào)通路，利于病毒復(fù)制 直接激活Fas/FasL細(xì)胞凋亡信號(hào)，導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡 NS1蛋白能通過(guò)作用于其特定的靶目標(biāo),例如NF-、PKR及IRF3等來(lái)激活干擾素所誘導(dǎo)的連鎖反應(yīng),從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡,禽流感的診斷技術(shù),禽流感的確診主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)室方法，實(shí)驗(yàn)室方法診斷方法主要包括病原學(xué)，血清學(xué)和分子診斷三部分。,病原學(xué)檢測(cè)技術(shù),1病毒的分離培養(yǎng) 病毒的分離培養(yǎng)是檢測(cè)禽組織中AIV 的一種經(jīng)典、準(zhǔn)確、敏感的病原學(xué)診斷方法，可以作為AIV 檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。 目前常用的方法有雞胚分離培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。 缺點(diǎn)：檢測(cè)周期長(zhǎng)，操作程序繁雜，不適用于該病的快速診斷。 2神經(jīng)氨酸酶促試驗(yàn) 利用AIV囊膜表面的NA能夠水解含有N乙酰神經(jīng)氨酸的底物來(lái)檢測(cè)病毒的存在與否。 優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，檢測(cè)結(jié)果十分可靠。但該方法并未被廣泛應(yīng)用到臨床中,血清學(xué)診斷技術(shù),血凝與血凝抑制試驗(yàn) 神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 免疫熒光技術(shù) 中和試驗(yàn) 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),分子診斷技術(shù),RT-PCR 和Realtime RT-PCR 熒光RT-PCR、 RT-PCR-ELISA 依賴(lài)核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)(NASBA) 環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP) 基因芯片技術(shù),防治措施,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，建立完善的生物安全體系 做好免疫接種, 增強(qiáng)機(jī)體特異抵抗力 規(guī)范免疫方法及免疫程序,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，建立完善的生物安全體系,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理, 提供營(yíng)養(yǎng)全價(jià)平衡的飼料,增強(qiáng)水禽的體質(zhì)，提高水禽的抵抗力。 要控制禽流感, 就要降低環(huán)境中野毒的含量。對(duì)禽舍內(nèi)、外環(huán)境一周兩次消毒。 家禽場(chǎng)實(shí)行“ 全進(jìn)全出”制度。避免各種日齡的家禽混養(yǎng)。 高致病力禽流感被OIE 列為A 類(lèi)疫病，一旦發(fā)生應(yīng)立即通報(bào)。 一旦發(fā)生高致病力禽流感，應(yīng)采取果斷措施(封鎖、隔離、消毒、焚燒發(fā)病雞群) 防止病毒擴(kuò)散。,做好免疫接種, 增強(qiáng)機(jī)體特異抵抗力,免疫預(yù)防是最佳選擇。 由于禽流感病毒不斷發(fā)生變異, 為疫苗研制造成困難。 盡管如此， 疫苗接種仍然是預(yù)防禽流感的一種非常有效措施。 目前，禽流感疫苗的種類(lèi)主要有滅活疫苗、重組載體疫苗、和核酸疫苗,免疫方法及程序,免疫方法 頸部后段皮下注射、肌肉注射 免疫接種劑量 15日齡的肉雞，每只一次0.3ml，日齡較大的雞每只0.5ml；中鵝每只1ml，成年鵝每只2ml3ml；小鴨每只0.3ml，中鴨每只0.5ml，成鴨每只注射1ml2ml。 關(guān)于疫苗的接種時(shí)間和次數(shù) 在生產(chǎn)中使用時(shí)，由于個(gè)體差異、操作失誤、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件、其他疾病及藥物的影響等，實(shí)際保護(hù)時(shí)間要比室內(nèi)試驗(yàn)短些，所以每3個(gè)月接種一次為妥；對(duì)于飼養(yǎng)期較長(zhǎng)的家禽，可在515日齡時(shí)接種一次，5060日齡時(shí)接種一次，開(kāi)產(chǎn)前接種一次，以后每3個(gè)月再接種一次。,思 考,病毒基因節(jié)段的重配是一種常見(jiàn)的現(xiàn)象，而禽流感病毒的重配正是科學(xué)家們最擔(dān)心的一個(gè)問(wèn)題，因?yàn)槿绻娴漠a(chǎn)生了既具有禽流感的高