乙肝患者血清HBV外膜大蛋白與HBVDNA檢測的關系及意義.doc

乙肝患者血清hbv外膜大蛋白與hbv dna檢測的關系及意義?2054?檢測gpi和rfigm可以提高ra的診斷率,有較好的臨床應用和研究價值.4參考文獻1schallerm,burtondr,ditzelhj.autoantibodiestogpiinrheumatoidarthritis:linkagebetweenananimalmodeandhumandiseasej.natimmunol,2001,2(8):746.2kimjy,leemh,jungki,eta1.detectionofanitibodiesagainstglucose6phosphateisomeraseinsynovialfluidofrheu?-matoidarthritisusingsurfaceplasmonresonancej.expmolmed,2003,35(4):310.3schubead,schmidtm,eaissd,eta1.autoantibodiestogpiandcreatinekinaseinraj.natimmunol,2002,3(5):411.4kassahnd,kolbc,so!mons,eta1.fewhumanautoimmuneseradetectgpij.natimmumol,2002,3(5):411.5jouenf,vittecoqo,legnillouf,eta1.diagnosticandprognosticvaluesofantiglucose6phosphateisomeraseanti-bodiesincommunityrecruitedpatientswithveryearlyarthritisj.clinexpimmunol,2004,137(3):606.6matsumotoi,leedm,goldbachmanskyr,eta1.lowprevalenceofantibodiestoglucose6phosphateisomeraseinpatientswithrheumatoidarthritisandaspectrumofotherchronic乙肝患者血清hbv外膜吉林醫(yī)學2009年9月第3o卷第18期autoimmunedisordersj.arthritisrheum,2003,48(4):944.7herveca,waitr,venablespj.glucose一6一phosphateisomeraseisnotaspecificautoantigeninrheumatoidarthritisj.rheumatology(oxford),2003,42(8):986.8kouskoffv,korganowas,duchatellev,eta1.organspecificdiseaseprovokedbysystemicautoimmunityj.cell,1996,87(5):811.9schallerm,stohlw,benoitv,eta1.patientswithinflammarionarthriticdiseasesharborelevatedsefulnandsynovialfluidleveloffreeandimmuneeomplexedglucose一6一phosphatedisomerase(g6pi)j.biochembiophyrescommun,2006,349(2):838.1o鮑春德,葉萍,陳曉翔,等.血清中6一磷酸葡萄糖異構(gòu)酶抗原升高在類風濕性關節(jié)炎中的意義探討j.中華風濕病學雜志,2005,9(5):277.11何東儀,鐘麗民,沈杰,等.葡萄糖6一磷酸異構(gòu)酶檢測在類風濕關節(jié)炎中的意義j.現(xiàn)代免疫學,2008,28(4):326.12董建玲,楊南萍,張杰,等.葡萄糖一6一磷酸異構(gòu)酶抗原對類風濕關節(jié)炎診斷的意義j.中華風濕病學雜志,2009,13(4):263.收稿13期:20090711編校:楊宇大蛋白與hbvdna李軍(長鋼總醫(yī)院檢驗科,四川江油621701)檢測的關系及意義摘要目的:通過對乙型肝炎(簡稱乙肝)患者血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白(hbvlp)和hbvdna的檢測,探討二者在判斷乙肝病情和hbv復制情況時的相關性及其在臨床上的意義.方法:采用熒光定量pcr方法對238份乙肝患者血清hbvdna進行檢測,采用酶聯(lián)免疫吸附(elisa)試驗,對上述標本進行hbvlp和hbv血清免疫學標志物(hbvm)模式的檢測.結(jié)果:hbvlp檢出度與hbvdna的檢出度差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05),不同hbvm模式的hbvdna與hbvlp的檢出結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05),但hbvdna拷貝數(shù)與hbvlp的表達相關性差異有統(tǒng)計學意義(r=0.677,p<0.05).結(jié)論:血清中hbvlp的含量與hbvdna的拷貝數(shù)具有較好的相關性,但hbvlp尚不能完全代替hbvdna的檢測來反映hbv復制情況.關鍵詞】乙型肝炎;乙肝病毒外膜大蛋白;hbvdna;乙肝病毒標志物investigationoftherelationbetweenserumhepatitisbviruslargeproteinandhbv-?dnainpatientswithhepatitisblijun(changganggeneralhospital,jiangyou621701,china)abstract:0bjectivetoapproachthedependabilitybetweenthesignificanceofhepatitisbviruslargeprotein(hbvlp)andhbvdna.methodserumhbvdnalevelwasquantitativelydetectedusingrealtimepolymersechainreaction,hbvlpandhbvmarkersexpressionweremeasuredbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ellsa)in238casesofinfectedseruu1.resultstherewassignificantdifferencebetweenthelevelofhbvdnaandhbvlp(p<0.05).theexpressionofhbvdnaandhbvlphadsig-nificantdifferenceamongvariouspatternsofhbvserologicalmarkers(p<0.05).hbvlpexpressionwasmerelycorrelatedwiththelog-吉林醫(yī)學2009年9月第30卷第18期?2055?afithmofhbvdnalevel(r=0.677,p<0.001).conclusionthereisaprefectcorrelationbetweenthecopiesofhbvdnaandthelevelofhbvlpexpressionstillcannotreflectthereplicationofhbv.keywords:hepatitisb;hepatitisbviruslargeprotein;hbvdna;hbvmarkel8乙型肝炎(簡稱乙肝)是我國發(fā)病率較高的傳染病,已成為危害廣大人民群眾健康的社會公眾性問題.長期以來,臨床上檢測hbv及其復制情況的方法主要有酶免疫法測hbv血清標志物和pcr法測定hbvdna.hbvs基因編碼合成的hbv外膜蛋白由三種蛋白組成,包括主蛋白(即hbsag),中蛋白(即hbsag和pres蛋白)和大蛋白(即hbsag,pres蛋白和pres蛋白)j.近年來隨著對乙肝表面抗原大蛋白中前s區(qū)抗原在乙肝發(fā)病機制,感染與復制等方面研究的深入,研究者們逐漸認識到乙肝表面抗原前s區(qū)具有越來越重要的臨床意義.由于大蛋白是構(gòu)象蛋白,pres抗原作為大蛋白的一部分,無法模擬其拓撲結(jié)構(gòu),在制作單克隆抗體時其序列會被折疊,卷曲而失去暴露表位的機會.這樣低級結(jié)構(gòu)抗原制作出來的單克隆抗體檢測可能會導致漏檢.因此,筆者利用構(gòu)象型前s區(qū)的高親和力,高特異性的單抗體檢測乙肝病毒外膜大蛋白(hbvlp),對238例乙肝患者血清進行檢測,探討hbvlp與乙肝病毒復制的關系及其臨床意義.1材料與方法1.1材料:收集2007年12月一2008年12月間我院門診和住院的乙型肝炎患者血清標本238例,其中男144例,女94例,年齡1556歲.全部病例均符合病毒性肝炎防治方案中乙型肝炎病原學診斷標準j.所有標本靜脈抽血分離血清后于一20qc保存.1.2方法:hbv核酸擴增(pcr)熒光定量檢測試劑盒購自深圳匹基生物工程有限公司;乙肝血清標志物檢測酶標試劑盒購自上海復星長征醫(yī)學科學有限公司;hbvlp的單克隆抗體酶標試劑盒由北京熱景康生物技術(shù)有限公司提供.乙肝血清標志物和hbvlp的檢測嚴格按照試劑說明書操作.1.3儀器:酶標法采用深圳雷杜電子有限公司的rt一2100c自動酶免疫分析儀測定;pcr法采用美國abi公司的700自動熒光pcr分析儀.1.4統(tǒng)計學處理:hbvlp與hbvdna的檢出率用配對資料檢驗;不同乙肝病毒血清標志物中hbvdna陽性率與大蛋白陽性率的比較采行x列表的檢驗;hbvlp含量與hbvdnar拷貝數(shù)的相關性分析用直線相關分析.2結(jié)果2.1大蛋白陽性率與hbvdna陽性率的比較:筆者檢測了238份hbv感染者血清,其中hbvdna陽性的為176份,陽性率為73.9%;hbvdna陰性的62份,其血清標志陽性,符合診斷標志j,但檢測hbvdna拷貝數(shù)低于陽性標準.大蛋白的陽性例數(shù)為202份,總陽性率為84.9%.大蛋白的檢測結(jié)果與hbvdna的檢測結(jié)果經(jīng)配對卡方檢驗,兩者檢出率差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05).雖然二者的陽性檢出率差異有統(tǒng)計學意義,但二者均具有較高的陽性檢出率.詳見表1.2.2不同乙肝病毒血清標志物模式中hbvdna與hbvlp的檢測結(jié)果比較:見表2.經(jīng)統(tǒng)計學分析兩者檢出率差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05).不同的hbvm模式中hbvdna和hbvlp的檢出率不同,由表2可見hbsag和hbeag同時陽性者的dnat和hbvlp均有較高的陽性率,hbeag陰性者dna和hbvlp的陽性率都很低.表1大蛋白陽性率與hbvdna陽性率的比較(例)表2不同乙肝病毒血清標志物中hbvdna與hbvlp的檢測結(jié)果比較例(%)2.3hbvdna與hbvlp的相關性hbvdna拷貝數(shù)的對數(shù)值與hbvlpa值的結(jié)果:見表3.經(jīng)相關性分析,二者的相關系數(shù)r=0.677,p<0.001.從表3也可見hbvdna拷貝數(shù)的對數(shù)值與hbvlpa值具有一定的相關關系.3討論michaelbmns等通過研究鴨乙肝病毒發(fā)現(xiàn),含有嗜肝病毒血清的感染性不僅依賴于具感染性的病毒顆(dane氏顆粒)的多少,而且還依賴于缺乏核酸的亞病毒顆的數(shù)量.研究?2056?表3不同hbvdna拷貝數(shù)的對數(shù)值與hbvlpa值的比較發(fā)現(xiàn)亞病毒顆在hbv感染過程中,能顯著增強細胞內(nèi)的病毒復制和基因表達,而這種增強作用是由hbvlp前s區(qū)的反式激活作用所觸發(fā)的foonc證明hbvlp是導致肝細胞損傷,死亡和纖維化病變的主要原因,因此檢測hbvlp對反映病毒復制情況和預后具有重要的臨床意義.hbvdna定量檢測是直接對hbv的遺傳物質(zhì)dna進行基因擴增,是病毒復制存在的最早期,最靈敏也是最可靠的指標,可對hbv感染作出早期診斷,也可用于判斷乙肝患者傳染性高低.由于dna的檢測要特殊條件,對不具備hbvdna檢測條件的基層醫(yī)院,由于無法判定hbv的復制情況,給臨床治療方案的確定帶來很大的困難.hbvlp的檢測不需要特殊的設備,適合各級醫(yī)院開展.本文通過對hbvlp的研究,以期找到合適的替代方法.通過對238例乙肝患者的檢測,檢出的hbvlp的總陽性率為84.9%,與孫穎等檢出的陽性率(79.4%)相近,但與hbvdna的陽性率(73.9%)相比二者陽性率相近,但hbvlp的陽性率稍高,經(jīng)配對檢驗p<0.05,說明hbvdna和hbvlp的檢出率還存在一定的差異.二者在定性檢測方面,hvclp的陽性率稍高于dna,還不能與hbvdna的陽性率完全一致.這種差異是由于方法學不同,檢測的成份和特異性不同造成的,并不足以說明hbvlp的檢測更敏感,對此還有待進一步研究.二者在定量檢測的相關性研究中,由表3可得hbvlpa值與hbvdna拷貝數(shù)的對數(shù)有較好的相關關系.從表3也能清楚地看出hbvlpa值隨hbvdna拷貝數(shù)的增加而增加,hbvlp的陽性率也隨之增加.可以認為使用酶聯(lián)免疫定量法檢測得出的hbvlpa值一hbvdna定量檢測有良好的一致性,能較可靠地反映hbv復制情況,可以作為hbv感染,復制和乙肝患者診斷,治療和預后的重要參考物,具有較好的臨床應用價值,適用于廣大基層醫(yī)院開展,而hbvlp能否完全或基本代替hbvdna的檢測,則有待進一步的探討.不同的乙肝血清學標志物模式中,hbvdna的檢測,則吉林醫(yī)學2009年9月第3o卷第18期有待進一步的探討.不同的乙肝血清學標志物模式中,hbvdna和hbvlp的陽性率有不同的表現(xiàn),如表2,其中hbsagthbeag同時陽性者的dna-和hbvlp均有較高的陽性率,陽性率分別為97%和95%,二者陽性率相近;hbeag陰性者dna和hbvlp的陽性率都較低,陽性率分別為59%和77%.由此可以說明,hbeag的存在與hbv的復制程度有密切的關系.但由于乙肝兩對半的血清免疫學標志物檢查方法的靈敏度,特異性的限制以及hbv為逃避宿主的免疫反應常發(fā)生變異,導致其檢測結(jié)果失真,出現(xiàn)假陰性.表2中hbeag陰性乙肝患者dna和hbvlp也有一定數(shù)值的陽性率,提示hbeag陰性慢性乙肝患者中確實有很大部分口患者體內(nèi)仍然存在hbv的復制.用hbv一/2檢測能夠反映hbeag陰性乙肝患者體內(nèi)hbv的復制情況,彌補目前兩對半檢測的不足,也是hbvdna檢測的一個有益補充.而目前臨床是否能把hbeag陰性作為無病毒復制的標準還值得探討,需進一步檢測dna和hbvlp,對無條件做基因檢測的醫(yī)院,hbvlp的檢測是目前較理想的檢測方法.4參考文獻1brussv,gerhardte,vielufk,eta1.functionsofthelargehepatitisbvirus8urfaeeproreininviralparticlemorphogenesisj.interavirology,1996,9(1):23.2brussv,vielufk.funct