西南大學藥學綜合資料藥物分析第十五章甾體激素類藥物的分析.ppt

第十五章,（Analysis of Steroid Hormones),甾體激素類藥物的分析,更多藥綜資料找西大16年考本學院學姐QQ：1003050289,第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)與分類,內(nèi) 容,第二節(jié) 鑒別試驗,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,第四節(jié) 含量測定,藥 物 分 析,基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷并多氫菲,第一節(jié) 結(jié)構(gòu)與分類,一 、基本結(jié)構(gòu),二、分類及結(jié)構(gòu),結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,甾體激素,腎上腺皮質(zhì)激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,性激素,腎上腺皮質(zhì)激素,氫化可的松,C17 -醇酮基,4-3-酮基,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,醋酸地塞米松,腎上腺皮質(zhì)激素,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,4-3-酮基,醋酸曲安奈德,腎上腺皮質(zhì)激素,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,地塞米松磷酸鈉 肌注時可延長作用時間,腎上腺皮質(zhì)激素,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,腎上腺皮質(zhì)激素類結(jié)構(gòu)特點,A環(huán)4-3-酮基： UV、與羰基試劑反應 C17 -醇酮基: 還原性 （或醇酮基的醇羥基與酸成酯）,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,雄 性 激 素,甲睪酮,C17 羥基,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,4-3-酮基,雄 性 激 素,丙酸睪酮,4-3-酮基,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,蛋白同化激素,苯丙酸諾龍,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,4-3-酮基,雄性激素及蛋白同化激素類特點,A環(huán)4-3-酮基 UV、與羰基試劑反應 C17 :醇羥基 可成酯,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,孕 激 素,黃體酮（天然孕激素）,4-3-酮基,C17 甲酮基,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,醋酸甲地孕酮 (megestrol acetate ),孕 激 素,炔諾酮,4-3-酮基,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,A環(huán)4-3-酮基 UV、與羰基試劑反應 C17 :甲酮基（黃體酮、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羥孕酮） 與亞硝基鐵氰化納反應 C17 :乙炔基（炔諾酮、左炔諾孕酮）,孕激素結(jié)構(gòu)特點,雌二醇,A環(huán)3OH 苯環(huán),C17 羥基,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,雌 激 素,炔雌醇,A環(huán)3OH 苯環(huán),C17 乙炔基,C17 羥基,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,A環(huán)3OH 苯環(huán) UV、與重氮苯磺酸鹽反應 C17 :C17 乙炔基 與AgNO3反應 C17 羥基 可成酯,雌激素類結(jié)構(gòu)特點：,結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分類,第二節(jié) 鑒別試驗,一、化學鑒別法,二、紫外-可見分光光度法,三、紅外分光光度法,四、色譜法,甾體激素類藥物,呈色,H2SO4或H3PO4 、 HClO4或HCl,（一）與強酸的呈色反應（母核）,一、化學鑒別法,與硫酸顯色反應,顯色 熒光 加水稀釋,潑尼松龍 深紅 絮狀灰,潑尼松 橙 黃藍綠,炔雌醚 橙紅 黃綠 紅色,炔雌醇 橙紅 黃綠 絮狀玫紅,醋酸可的松 黃或微帶橙 褪色并澄清,鑒別試驗,（二） 官能團的反應,1 C17 醇酮基 （腎上腺皮質(zhì)激素類）還原性,（1）呈色反應,醋酸潑尼松,紅色,氯化三苯四氮唑試液 NaOH,（2） 沉淀反應,腎上腺皮質(zhì)激素藥物,氨制硝酸銀,Ag黑色,堿性酒石酸銅,Cu2O橙紅色,醋酸可的松,黃色,2. C3酮基和C20酮基,常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼,硫酸苯肼試液,70，,黃體酮,異煙肼,甲醇、稀鹽酸,黃色,鑒別試驗,3. C17 甲酮基,黃體酮,其他甾體激素類,亞硝基鐵氰化納,藍紫色,淡橙色 不顯色,具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物，可與亞硝基鐵氰化納、間二硝基酚、芳香醛呈色。,鑒別試驗,碳酸鈉，醋酸鈉,黃體酮,藍紫色,鑒別試驗,4. 酚羥基（雌激素類）,雌激素類藥物,重氮苯磺酸,紅色偶氮染料,鑒別試驗,5. 乙炔基（炔雌醇、炔諾酮）,白,鑒別試驗,苯環(huán) 280nm,二、 UV法,C=C-C=O -3-酮 240nm,鑒別試驗,專屬性高。幾乎所有的甾體激素原料藥都采用了IR法鑒別。,三、IR法,-OH 3750 3300cm-1,CH 3320 cm-1,C-H 3000 2700cm-1,C=O 1900 1650cm-1,C=C 1650 1450cm-1, =CH 1000 650cm-1,鑒別試驗,1630cm-1,3420cm-,亞甲基、角甲基吸收帶,1750cm-1,1232cm-1,1052cm-1,醋酸可的松,結(jié)構(gòu)特征：43酮、C17 OH C20 酮基、 C11 酮基、醋酸酯,1590cm-1,3505cm-,3300cm-1,1505cm-1,3610cm-,酚羥基,醇羥基,1616cm-1,苯環(huán)的骨架振動,炔雌醇,結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17 OH C17 乙炔基 、苯環(huán),（一） TLC法,主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別,方法：對照品法,鑒別試驗,（二） HPLC法,主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）,方法：對照品法 要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。,四、色譜法,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,甾體激素類藥物中“有關(guān)物質(zhì)”的檢查,1. 來源：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物等“其他甾體” 2. 特點: 結(jié)構(gòu)類似，具有相似的甾體母核結(jié)構(gòu)，采用色譜法檢查,TLC法：供試品自身稀釋對照法 顯色：堿性四氮唑藍試液、硫酸-乙醇、熒光等 HPLC法（主成分自身對照法）,3.方法,炔孕酮中有關(guān)物質(zhì)檢查,溶劑CHCl3-MeOH(3:1) 硅膠G 展開劑CHCl3-MeOH(95:5) 展開后晾干 120加熱5min 365nm比較熒光強度,黃體酮中“有關(guān)物質(zhì)”檢查,供試液1 mg/ml,對照溶液0.02mg/ml,供試品溶液的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過1個，其面積不得大于對照液的主峰面積的3/4,0.01 mg/ml,四、含量測定,（一）HPLC法,（二）UV法,（三）比色法,（一）HPLC法,RPHPLC,由于“其它甾體”有關(guān)物質(zhì)的存在，色譜法可消除它們的干擾,含量測定,定量方法：,ChP(2005年版)及以前 大多內(nèi)標法,固定相：ODS柱 流動相：甲醇-水或乙腈-水,3、樣品測定：供試品+內(nèi)標,i內(nèi)標 r 對照品 x 待檢雜質(zhì),1、系統(tǒng)適用性試驗：,2、校正因子f 的測定：對照品+內(nèi)標,含量測定,內(nèi)標法,ChP（2010年版）附錄 D 高效液相色譜法,色譜系統(tǒng)的適用性試驗通常包括理論板數(shù)、分離度、重復性和拖尾因子等四個指標。其中，分離度和重復性是系統(tǒng)適用性試驗中更重要的參數(shù)。,己烯雌酚,黃體酮,黃體酮含量測定的HPLC圖,示例：地塞米松磷酸鈉的外標法測定 ChP（2010年版）,示例：醋酸曲安奈德乳膏的內(nèi)標法測定 ChP（2010年版）,色譜柱：ODS柱,流動相：三乙胺溶液（磷酸調(diào)pH值為3.00.05 ）-甲醇-乙腈（55:40:5）,檢測波長：242nm,色譜柱：ODS柱,流動相：甲醇-水（60:40）,檢測波長：242nm,內(nèi)標：炔諾酮,（二）UV法,-3-酮 max 240nm （）,腎上腺皮質(zhì)激素 雄性激素和蛋白同化激素孕激素,苯環(huán) max 280nm （）,雌激素,（三）比色法,1、四氮唑比色法：C17 -醇酮基 強還原性,含量測定,2、異煙肼比色法：C3酮基,3、Kober反應比色法：雌激素,ChP（2010年版）醋酸地塞米松注射液,ChP（1977年版）地塞米松磷酸鈉注射液,ChP（2010年版）復方炔諾孕酮滴丸中炔雌醇的測定,1、四氮唑比色法,- 2e,含量測定,分子重排,腎上腺皮質(zhì)激素 C17 -醇酮基 強還原性,含量測定,氯化三苯四氮唑（TTC、紅四氮唑）,ChP、BP：,2e,（深紅色）,max 480-490nm,藍四氮唑（BT）,USP：,2e,單甲瓚,2e,雙甲瓚,（暗藍色）,max 525nm,四氮唑鹽：,甲瓚,三苯甲瓚深紅,含量測定,含量測定,藍四氮唑（BT）,雙甲瓚（暗藍）,原 理,HCl,2、異煙肼比色法：C3酮基,異煙腙（黃色）,含