常見臨床標本的細菌學檢驗.ppt

常見臨床標本的細菌學檢驗,一、常見臨床標本 1、血液 2、尿液 3、糞便、肛拭子 4、膿汁及膿拭子 5、穿刺液（胸水、腹水、心包液、關節(jié)液、 腦脊液、鞘膜液） 6、痰 7、膽汁 8、咽拭子 9、空氣,二、標本采集的一般原則,1、應在病程的一定階段（一般為發(fā)病早期）盡可能在施實抗生素療法、化學方法、血清學療法之前采集標本。 2、方法要恰當,標本應來自真正的感染部位，避免其它微生物特別是正常微生物的污染。 3、所有采集的標本均應置于無菌容器中（滅菌不能使用消毒劑）加入適當保存液 。 4、標本應盡快接種（最好是床邊接種），若必須傳送時，應根據(jù)培養(yǎng)目的作保溫、冷藏、厭氧運送。防止污染及擴散。 5、檢樣不宜過少，否則易干燥死亡。,三、常見標本的采集（一般由臨床醫(yī)師執(zhí)行）,（一）血液： 1、一般在發(fā)熱高峰期采集（發(fā)熱初期1-2天，此時陽性率較高）盡量在實施血清療法、化學療法和抗生素療法之前進行。 2、采血部位：一般為靜脈（動脈陽性率更高些）。 3、采血量：5-1ml，直接加入酚紅葡萄糖肉湯中（血/肉湯=1：10）（防止血凝、稀釋Ab等因子）如不能直接接種應置入已滅菌適量20%枸櫞酸鹽瓶中。盡快送檢。,4 、如病人已實施治療，應在酚紅葡萄糖肉湯中加入相應對抗劑。 磺胺類藥物對氨基苯甲酸5mg/100ml. 青霉素2u青霉素酶/ml 其他抗生素MgSO4 5mg/100ml （二）糞便： 1、應盡量在用藥前自然排便；取有朧血、粘液部分2-3 g（新鮮）液壯便應取絮壯物1-2ml于無菌廣口瓶中。,2、如無法獲取糞便，應用直腸拭子，小兒入肛門2-3cm。成人入肛門4-5cm.取直腸粘液入無菌試管/保存液。 3、如需保送運送測量PH7.0甘油PSB中（0.033mol/L PSB與等體積甘油混勻。PH7.0),( 三）、膿汁 1、創(chuàng)傷：先以無菌NS清洗創(chuàng)口周圍，再以棉簽來取膿汁/分泌物膿拭子置無菌試管。 2、膿腫：先消毒患部表面皮膚，再以注射器抽吸/切開膿時接留膿汁1-2ml置無菌試管。 3、厭氧菌：一定要由傷口深處取樣，半小時內接種完畢。,（四）咽拭子： 1、由咽部扁桃體處采集分泌物（注意部位、方式） 2、如凝為白喉患者，則應先除去咽不表層分泌物去深層組織分泌物，再取樣。 3、凝為百日咳患者，可采用咳碟法。,（五）痰： 1、先讓病人用清水嗉口數(shù)次，以除去口腔內大量雜菌。 2、取清晨第一口咳出的痰，（晨痰） 3、作結核桿菌培養(yǎng)可收集24h痰。（冰箱保存）,（六）膽汁： 1、行十二指腸引流水收集“膽汁乙”10-15ml。 膽汁甲膽總管（ ） 膽汁乙膽素（檸黃色） 膽汁丙肝膽管（金黃色） 膽汁丁十二指腸（ ）,（七）穿刺液： 1：原則上由臨床醫(yī)生先穿刺獲得。 2：采樣量：胸水，腹水：5-10ml 3：如需抗凝：3.8%枸櫞酸鈉。1：10,（八）尿液： 1、一般用導尿.5-10ml，也可用中段尿.（應消注明），留中段尿應沖洗尿道口/外陰部（1：1000高錳酸鉀，2%紅汞.1：1000新潔爾滅，先消毒液沖洗，再無菌紗布或干棉球拭干）。 2、作結核桿菌培養(yǎng)，留取24h尿，將沉淀部分送檢。,3、腎盂尿，應標明右、左，每側分3份留聯(lián)（導尿管插入輸尿管。） 4、通常宜取清晨第一次尿。 5、采集后應立即送檢，接種，一般不得超過1h，冰箱保存，不過6h。,四、常見臨床標本鑒定程序,染色鏡檢 變濁、色、 質 BA 菌落 染色鏡檢 1血液酚紅葡萄糖肉湯 有菌落 無改變BA 報告：無菌生長 無菌落 無菌落 BA 有菌落染色鏡檢 變濁、色、質BA菌落染色鏡檢 2穿刺液 血肉湯 有菌落 無改變BA 報告：無菌生長 無菌落 染色,3，拭子（咽、膿）,BA,菌落分類、編號、染色鏡檢,染色鏡檢,注：接種血平板時，拭子作原劃線、接種環(huán)劃開,4、痰,BA,菌落分類、編號、染色,TB培養(yǎng),羅氏斜面（先消化處理）,4%NaOH 6%H2SO4,5、尿液,BA（直徑=9.0cm，接種量0.01ml） 注：將標本充分劃開,集菌（3000n/min 15）,沉渣,革蘭氏染色,BA,無菌落,報告：無菌生長,有菌落,染色鏡檢,菌落計數(shù),報告：檢出*菌 *個/ml 10萬/ml感染,6、糞便,（含肛拭子）,SS、MaC（強弱各1個）,無可疑菌落 報告：無致病菌生長,可疑菌落（透明/半、無酸色）,增菌（一般不進行）,T.T增菌液（四硫磺酸鹽肉湯） M.M增菌液(MgCL2孔雀綠肉湯) S.F增菌液（亞硫酸鹽肉湯）,沙門氏菌,煌綠增菌液 亞硒酸鹽增液,沙志,G.N,志賀氏菌,堿性蛋白胨水,霍亂弧菌,革蘭氏染色,球菌 G+桿菌:根據(jù)菌落特征,細菌染色性,形態(tài)排列選擇恰當生化反應,免疫學反應及動物試驗,報告,G-桿菌,KIA,菌落描述:顏色,大小,溶血性,透明度,硬度,潤濕度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,邊緣整齊度,根據(jù)KIA結果選擇適當生化反應項目,+/+,I M Vi C 七葉,+ + ,-/+,I MAN SUC C U PA,_ _ _ _ I項“+”非沙門氏菌, + + +,I項“+”非志賀氏菌,+ 變+普,-/- I 葡 C 不動桿菌 綠膿桿菌 +/- 一般不會出現(xiàn)，可考慮接種不當，空 氣污染 根據(jù)生化反應結果，結合相應血清學實驗 報告結果,五、空氣細菌計數(shù),將直徑9 .0cm/普通瓊脂平板/血瓊脂平板按五點法/三點法打開蓋暴露20，蓋好37 24h計數(shù)菌落數(shù)，稱出平均每個板菌落數(shù)N,奧梅梁斯基法則： 100cm2 510L A t *10L,At 100*50,XX個/M3= *1000= 39.32N,N *10,At 100*5,50000N At,（49.0；20）,結果報告應注明 “普通瓊脂平板培養(yǎng)”/“血瓊 脂平板培養(yǎng)”,腸桿菌科各屬KIA結果,斜面 底層 產氣 H2S 動力 埃希氏菌屬 A/K A +/- - （+）/- 志賀氏菌屬 K A - - - 沙門氏菌屬 K A +/- d/+ + 枸櫞酸鹽菌屬 d A + d + 克雷伯氏菌屬 A A + - - 腸桿菌屬 A A + - + 歐文氏菌屬 K/A A -/+ +/- +/- 沙雷氏菌屬 K/A A +/- - -/d 哈夫尼亞菌屬 K/A A + - +/- 愛得華氏菌屬 K A +/d +/- +,斜面 低層 產氣 H2S 動力 變形桿菌屬 K A + +/- + 普羅菲登斯菌屬 K A + +/- + 摩根氏菌屬 K A （+） - + 耶爾森氏菌屬 K/d A d/- - - 肥桿菌屬 K A - - - 致病性桿菌屬 K A - - + 克沃爾氏菌屬 A A + - +/（+） 拉思氏菌屬 A A （+） - - 西地西菌屬 K/d A （+）/+ - - 塔特母氏菌屬 - A - - -,注：A 產酸； K 產堿； + 90-100%菌株陽性；（+）76-89%菌株陽性 ；d 26-75%菌株陽性； - 0-10%菌株菌陽性,七、腸桿菌微量快速鑒定,一、機理：不同種細菌有不同酶系。首 先獲得待測菌的純培養(yǎng)物，制成懸液，將其示為酶 予成酶,酶+低物+顯色劑（或其他添加劑）觀察現(xiàn)象,二、裝置：反應板16孔內含16和底物等徑真空， 低溫干燥，密封保存?zhèn)溆谩?2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16,H2S N PD I LD OD M U VP E ONPG SKA AR AD 1N SO,序號 實驗名稱 英文縮寫 陰性 陽性 1 H2S H2S 無色 棕色、黑色 2 硝酸鹽還原 N 淡黃/白色 粉紅 3 苯丙胺酸 P 白色 綠色 4 吲哚 I 白色 粉紅,序號 實驗名稱 英文縮寫 陰性 陽性 5 賴胺酸 LD 黃色 紫蘭色 6 烏胺酸 OD 黃色 桔色 7 丙二酸鹽 M 黃緣色 湖蘭色 8 尿素 U 黃色 粉紅 9 VP VP 白色 粉紅 10 七葉苷 E 白色 棕黑色 11 ONPG ONPG 白色 黃色 12 蔗糖 S 紫色 黃色 13 阿拉伯糖 A 紫色 黃色 14 側金盞花醇 AD 紫色 黃色 15 肌醇 1N 紫色 黃色 1 6 山梨醇 SO 紫色 黃色,1 2 3 4 5 6 7 8,H2S N PD I LD OD M U 2 1 4 2 1 4 2 - - + - + - +