DB33T673-2007水產(chǎn)品中泰樂菌素殘留量的測(cè)定高效液相色譜法.doc

DB DB33浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布2008-01-28實(shí)施2007-12-29發(fā)布水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的測(cè)定高效液相色譜法Determination of tylosin A residues in aquatic productshigh performance liquid chromatographyDB33/T 6732007浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)ICS67.050X 041DB33/T 6732007前 言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)檢中心（舟山）、浙江海博食品有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳雪昌、王堅(jiān)強(qiáng)、陳偉斌、郝云彬、鄭斌。1水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中泰樂菌素A殘留量的高效液相色譜測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品可食部分中泰樂菌素A殘留量的測(cè)定。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理樣品在堿性條件下用乙酸乙酯提取，正己烷脫脂，反相色譜柱分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。4 試劑與材料實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T 6682中一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。試劑除有實(shí)驗(yàn)要求外，其余均為分析純。4.1正己烷。4.2乙酸乙酯。4.3乙腈。4.4磷酸：（85%）。4.5磷酸二氫鉀。4.6磷酸氫二鉀。4.7磷酸鹽緩沖液（pH8.0）：準(zhǔn)確稱取磷酸二氫鉀0.52 g和磷酸氫二鉀16.73 g，加水定容至500 mL。4.8流動(dòng)相用磷酸鹽緩沖液（pH2.5）：0.01 mol/L，準(zhǔn)確稱取1.36 g磷酸二氫鉀，加適量水溶解，以磷酸調(diào)pH為2.5，定容至1000 mL。4.9泰樂菌素A標(biāo)準(zhǔn)品：純度98%。4.10泰樂菌素A標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取適量的泰樂菌素A標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。避光冷藏保存，保存期為一個(gè)月。4.11泰樂菌素A標(biāo)準(zhǔn)工作液：用流動(dòng)相稀釋成各質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.10 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、5.00 mg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用。5 儀器與設(shè)備5.1 液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。5.2 組織搗碎機(jī)。5.3 均質(zhì)機(jī)：大于10 000 rpm。5.4 離心機(jī)：7 000 rpm。5.5 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。5.6 旋渦混勻器。5.7 天平：感量0.01 g和0.0001 g。5.8 pH計(jì)5.9 聚丙烯離心管：50mL、10mL。6 分析步驟6.1 取樣魚去鱗、去皮沿背脊取肌肉；蝦去頭、去殼、去附肢，取可食部分；蟹、中華鱉等取可食部分；取適量樣品經(jīng)組織搗碎機(jī)搗碎，放置密閉容器-18 以下冷凍貯存?zhèn)溆谩?.2 提取稱取樣品10 g（精確至0.01 g），于50 mL聚丙烯離心管中，加入5 mL磷酸鹽緩沖溶液（4.7），均質(zhì)30 s，再加入25 mL乙酸乙酯均質(zhì)30 s，以6000 rpm離心5 min，乙酸乙酯層移入250 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中。加入25 mL乙酸乙酯于離心管中，重復(fù)提取1次，合并乙酸乙酯于250 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶。6.3 凈化將提取液于40 水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入1 mL乙腈溶解殘?jiān)?，移?0 mL聚丙烯離心管中，加入2 mL正己烷渦旋振蕩15 s萃取脫脂，7000 rpm離心5 min，棄去正己烷層，下層液體經(jīng)0.45 m微孔濾膜過濾，供高效液相色譜儀測(cè)定。7 測(cè)定7.1 色譜條件7.1.1 色譜柱：ODS C18，5 m，4.6 mm 250 mm或同類型號(hào)色譜柱。7.1.2 柱溫：35 。7.1.3 流動(dòng)相：乙腈磷酸鹽緩沖液（4.8）=40+60，（V/V）。7.1.4 流速：1.0 mL/min。7.1.5 進(jìn)樣量：20 L。7.1.6 檢測(cè)器波長：280 nm。7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取泰樂菌素A標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用流動(dòng)相稀釋成濃度為0.10 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、5.00 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別取20 L進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品中泰樂菌素A含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.3 色譜測(cè)定取樣品濾液20 L進(jìn)樣，記錄峰面積，保留時(shí)間為5.2min。從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣品提取液中泰樂菌素A的含量。如果上機(jī)液濃度超過線性范圍，用乙腈稀釋后進(jìn)行測(cè)試。8 計(jì)算樣品中泰樂菌素A的含量按公式（1）計(jì)算。.（1）式中：X樣品中泰樂菌素A的含量，單位為毫克每千克（g/g）；C樣品溶液中泰樂菌素A的濃度，單位為毫克每升（g/mL）；m樣品質(zhì)量，單位為克（g）；V樣品溶液體積，單位為毫升（mL）。注：檢驗(yàn)結(jié)果保留2位有效數(shù)字。9 方法檢出限、回收率和精密度9.1 方法檢出限本方法檢出限為0.05 mg/kg。9.2 回收率在0.05 mg/kg2.5 mg/kg的添加濃度下的回收率為70%110