2013.4.15瘧原蟲血片制作染色.ppt_第1頁
2013.4.15瘧原蟲血片制作染色.ppt_第2頁
2013.4.15瘧原蟲血片制作染色.ppt_第3頁
2013.4.15瘧原蟲血片制作染色.ppt_第4頁
2013.4.15瘧原蟲血片制作染色.ppt_第5頁
已閱讀5頁,還剩26頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

VIP免費(fèi)下載

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

2019/6/30,1,瘧原蟲血片制作及染色技術(shù),湖北省疾病預(yù)防控制中心,血片制作所需設(shè)備,載玻片 具有磨砂面,且規(guī)格是玻片寬度乘長度在25.2*75.2mm,厚度1mm1.2mm為好。 推玻片 有專用的。但現(xiàn)在一般選擇邊緣光滑整齊的載玻片替代推玻片。 采血針 使用一次性的采血針。 玻片盒 木制/塑料均可以。 75%酒精棉球 用于采血部位的消毒。 記號筆/B2鉛筆 用于載玻片上編寫號碼。 Whatman(沃特曼)903號;將濾紙切成10*2cm大小的紙片,以口徑為1.2cm的大孔管,在濾紙上壓出兩個圓形印跡備用。,2019/6/30,3,載玻片的清洗,載玻片 用以涂制血膜的載玻片,必須清潔無油跡。有油跡的載玻片涂制的厚血膜容易脫落,薄血膜涂不均勻。 新玻片處理 應(yīng)浸于有液態(tài)洗滌劑清水中1020分鐘,然后用干凈棉巾逐個擦拭,再用清水沖洗干凈,晾干后用干凈柔軟的棉巾擦亮備用。也可以95%的乙醇浸泡510分鐘,再用紗布擦干擦亮備用。 舊玻片處理 用過的玻片浸泡洗滌劑溶液中12天或者浸泡于煮沸好的5%肥皂水中12小時,逐個擦去玻片上的舊血膜痕跡,用清水漂洗干凈擦干擦亮。 洗凈載玻片處理 每1020張用白紙包好或者裝原玻片盒里再放入塑料袋內(nèi),保存于干燥環(huán)境中備用。,2019/6/30,4,取血部位及方法,取血部位及方法 取血部位以耳垂較為合適,也可在手指末端采血,嬰兒可從拇趾或足跟取血。先用75%酒精棉球消毒取血部位后,以一次性采血針迅速刺入取血部位12毫米深,然后用左手大拇指、食指和右手中指協(xié)同擠出血滴。,2019/6/30,5,采血時間,取血時機(jī) 現(xiàn)癥病人一般可隨時取血,瘧疾普查時可不考慮取血時機(jī)。但在診斷或需要某期瘧原蟲作標(biāo)本時,則應(yīng)掌握適宜的取血時機(jī)。 間日瘧在寒熱發(fā)作時,外周血液中主要可見環(huán)狀體期;發(fā)作后數(shù)小時,環(huán)狀體發(fā)育到滋養(yǎng)體期,瘧色素形成,形態(tài)較易辯認(rèn),為診斷瘧疾的有利時機(jī);3648小時,可檢出裂殖體;發(fā)作一、二次后,配子體出現(xiàn)較多。 惡性瘧較理想的取血時間是在發(fā)作后至20小時內(nèi)取血,初發(fā)患者退熱后常查不到瘧原蟲。,涂制血膜規(guī)則,用于檢查瘧原蟲的血涂片有兩種:一種是將血液涂呈薄膜狀,稱薄血膜;一種是血液涂成圓盤狀,稱厚血膜。薄血膜上的血細(xì)胞要求平輔在玻片上面。 涂片順序,先厚后??;位置分配,血片自左向右:薄-厚-標(biāo)簽;推薄片用玻片短邊。,制作厚血膜,制作薄血膜,2019/6/30,7,厚血膜血量及涂片法,厚血膜 用推片的一角,從取血部位刮取約45微升血量(相當(dāng)于火柴頭大小),使血滴與平置的載玻片接觸,再由里向外一個方向旋轉(zhuǎn),轉(zhuǎn)24圈,涂成直徑0.81厘米大小圓形厚血膜,血膜厚薄均勻,過厚易于脫落,過薄達(dá)不到檢出率的要求。,2019/6/30,8,薄血膜血量及涂片法,薄血膜 取潔凈的載玻片2張,1張平置在桌上,以左手拇指,食指夾持載玻片兩端(手指切勿接觸玻片表面),用另一張邊緣平滑(最好為磨口邊緣)的載玻片做推片,用推片一端邊緣的中點(diǎn)從取血部分刮取約11.5微升的血量(相當(dāng)于1/4火柴頭大小),使血滴與平置的載玻片接觸,并形成2535度夾角,待血液向兩側(cè)擴(kuò)展約2厘米寬度時,均勻而迅速地輕輕向左推出(約2.5厘米長)且邊緣帶有“舌狀”的薄血膜。,2019/6/30,9,涂制厚、薄血膜的位置,通常是將厚、薄血膜涂在一張載玻片上。方法是將載玻片分為3等分(留出標(biāo)簽或磨砂面位置后的3等分)。厚血膜涂在載玻片靠近標(biāo)簽或磨砂面方向的右1/3中央處,圓形、厚薄均勻、邊緣整齊。薄血膜涂在載玻片1/2至左1/3的中部位置,舌狀、厚薄均勻。,2019/6/30,10,血片編號,血膜制成后,立即將受檢者的個人編號寫在玻片磨砂面上(血片的編號要與血檢登記本上編號一致)以防差錯。,2019/6/30,11,制作血膜的注意事項(xiàng),1. 玻片清洗時,避免玻片碰撞、磨損。制作血膜的載玻片必須完全清潔而毫無油漬或污垢。制片時,手指只能持載片的邊緣,不能接觸玻片表面,以免油污使薄血膜產(chǎn)生空白區(qū)以及厚血膜脫落。作為推片的玻片邊緣一定要平滑,才能使推出的血膜均勻一致。,2019/6/30,12,制作血膜的注意事項(xiàng),2. 剛涂制的血膜要平放在標(biāo)本盒內(nèi)或者實(shí)驗(yàn)臺面上。厚血膜未干前勿使標(biāo)本片傾斜,以免未干的血膜傾向一側(cè),造成血膜厚薄不均,厚處不易溶血和著色而影響檢查結(jié)果;晾干血膜時應(yīng)注意防塵、防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸血膜,干后應(yīng)及時裝入標(biāo)本盒內(nèi)。新木制標(biāo)本盒需敞開放置一段時間,讓木醇揮發(fā)后才能使用,以免厚血膜血紅蛋白被其固定,不能溶血或染色效果不佳。,2019/6/30,13,制作血膜的注意事項(xiàng),3. 血膜讓其自然干燥,切忌用太陽曬或火烤,干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天標(biāo)本盡可能2448小時內(nèi)固定染色;冬天也不能超過72小時。放置時間越久,厚血膜越不易溶血,染色效果也差。若不能及時染色,薄血膜宜先用甲醇固定(13分鐘)然后用過濾清水或自來水對厚血膜溶血,晾干后包好置干燥器于冰箱內(nèi)保存,用時將干燥器置室溫中12小時后取出染色。,血片的染色 (一)染液的種類及染色原理,染液種類:目前所用的血片染色液,雖然名稱很多,但都是從羅門諾夫斯基氏創(chuàng)造的染液變化過來的??偟目煞譃樗芤汉途凭芤簝纱箢?,前者包括羅氏、西氏(Simon)、J.S.B氏染液等,后者包括利氏(Leishman)、瑞氏和吉氏染液(被國家推薦使用)等。這些染液中的主要染劑都包含美蘭、伊紅和由美蘭氧化所成的天青,所以稱為多色性染劑。,2019/6/30,15,血片的染色 (一)染液的種類及染色原理,染色原理:伊紅是酸性水溶性鈉鹽,美蘭是堿性水溶性鹽酸鹽,當(dāng)它們各自溶化水中時,就離解為帶陽電和陰電的離子。伊紅主要離解為酸性的陽離子,在遇到堿性的蛋白質(zhì)如血紅蛋白、嗜伊紅白血球顆粒等即可結(jié)合成不易溶于水的沉淀物染成紅色。美蘭主要離解為堿性的美蘭離子,美蘭就與瘧原蟲、淋巴和大單核細(xì)胞的胞漿、嗜堿性白細(xì)胞的顆粒等酸性蛋白質(zhì)結(jié)合染成蘭色。,2019/6/30,16,血片的染色 (一)染液的種類及染色原理,染色原理:美蘭與伊紅都不能使原蟲和白細(xì)胞的核著色,必須由天青作為媒介(染媒)才能使其著色。天青雖然也是堿性染劑,但又具有染媒作用,使原蟲核和白細(xì)胞核等原來只能染上極淡蘭色的結(jié)構(gòu)染上顯著的酸性染劑伊紅,這樣,就使白細(xì)胞粗大的核染成顯著的既蘭又紅的紫蘭色,而較小或菲薄的原蟲核和淋巴細(xì)胞原漿中的顆粒染成紫紅色。,2019/6/30,17,血片的染色 (一)染液的種類及染色原理,注意:蛋白質(zhì)是二性電解質(zhì),當(dāng)其處于較等電點(diǎn)為酸的溶液中時,便呈堿的作用,即與酸或陰離子結(jié)合,這就說明為何在染液偏酸時,伊紅的著色力強(qiáng),使紅細(xì)胞著色鮮艷而淋巴細(xì)胞和原蟲的胞漿著色不顯著;反之,蛋白質(zhì)在偏堿的溶液中呈酸的作用而中和堿基,也就說明為何染液偏堿時,紅細(xì)胞和嗜伊紅白細(xì)胞的顆粒等被染成紫蘭色。 伊紅在水溶液內(nèi)遇到美蘭或天青,即可互相化合而產(chǎn)生沉淀從而失去染色力,因此,吉氏染液的母液絕對不能進(jìn)水。,2019/6/30,18,血片的染色 (二)吉氏染液母液配置方法,取吉氏粉0.5克置于研缽中,加少量甘油充分研磨,再加再磨,至25毫升加完為止,倒入60或100毫升帶有玻塞的有色玻瓶中。在研缽中加少量甲醇,洗去甘油染液混入瓶內(nèi),至25毫升甲醇洗凈缽中甘油染液為止,塞緊瓶塞,充分搖勻,置于5560水浴中或溫箱內(nèi)24小時或室溫內(nèi)35天,多加搖動,即成原液。吉氏染液是目前較優(yōu)良的血膜染劑,即使在炎熱天氣中,亦可經(jīng)久不變。,材料: 1、吉氏粉0.5克 2、甘油25毫升 3、甲醇25毫升,2019/6/30,19,血片的染色 (三)吉氏染液血片染色方法,血膜干燥后,用甲醇或無水酒精固定薄血膜,用過濾清水或自來水對厚血膜溶血,然后再進(jìn)行染色。 成批血片染色:將已固定薄血膜的血片插入染色缸,倒入2%吉氏染液稀釋液(2毫升原液加中性蒸餾水98毫升稀釋均勻即成),同時對厚薄血膜染色30分鐘(如染液不合標(biāo)準(zhǔn)時,得酌情增減染色時間),然后用清水輕輕將染液沖去,再用清水輕輕沖洗一次,干凈后將血片標(biāo)本(血膜面朝下)插于晾干板上,待干鏡檢。,2019/6/30,20,血片的染色 (三)吉氏染液血片染色方法,單張血片染色:薄血膜經(jīng)甲醇固定干燥后,用2%吉氏染液稀釋液12毫升,滴入血片標(biāo)本上染色30分鐘左右,或用中性蒸餾水12毫升,加吉氏母液12滴,混合均勻后滴入血片標(biāo)本上,染色2030分鐘,然后用清水輕輕將片上的染液沖洗干凈,晾干鏡檢。,2019/6/30,21,影響染色效果的因素,血片染色好壞除了與玻片是否清潔,血片制作質(zhì)量好壞等有關(guān)外,還受到以下幾個因素的影響: (1)染料溶劑的質(zhì)量 染料、甲醇和甘油如果不純,常使配制的染液偏酸或偏堿而影響染色效果。因此必須用分析純的甲醇和中性甘油,而且在配制時所用的器具必須干凈而無水份。,2019/6/30,22,影響染色效果的因素,(2)染液的新舊 新配制的染液因色素尚未充分溶解,染色力較弱且常呈現(xiàn)偏堿性。染液存放時間越久,染色力越強(qiáng)。通常在染液配制12周后才使用,盛裝染液的瓶子應(yīng)加塞蓋密。以防吸潮而影響染液質(zhì)量。,2019/6/30,23,影響染色效果的因素,(3)染液稀釋后使用時間 吉氏和瑞氏染液的主要成份是美藍(lán)、伊紅和由美藍(lán)氧化產(chǎn)生的天青,三者能在酒精溶液中溶解,但在水溶液中伊紅遇到美藍(lán)和天青即產(chǎn)生沉淀。因此,必須在稀釋染液當(dāng)時使用,一般在半小時內(nèi)染色力最強(qiáng)。,2019/6/30,24,影響染色效果的因素,(4)染液的稀釋濃度 染液的濃度高其著色就快而深,從而瘧原蟲寄生紅細(xì)胞的薛氏點(diǎn)粗大顯著,但顏色常偏堿;染液濃度過低則染色時間久,顏色偏酸,薛氏點(diǎn)不明顯或消失。,2019/6/30,25,影響染色效果的因素,(5)染色時間 染色時間長染色效果好,反之較差。室溫高則著色快,染色時間可略縮短,氣溫低可適當(dāng)延長。因此染色時間應(yīng)根據(jù)染液的質(zhì)量、新舊、稀釋濃度和氣溫而適當(dāng)增減。,2019/6/30,26,影響染色效果的因素,(6)染色用水 染液的稀釋用水和染色后沖洗用水應(yīng)選擇Ph7.07.2清潔水,通常使用的新鮮的蒸餾水或過濾的冷開水,以及自來水、井水、河水、泉水和雨水等。如果偏酸或偏堿,可用緩沖蒸餾水調(diào)整。染色后發(fā)現(xiàn)血膜顏色偏藍(lán)(偏堿)或偏紅(偏酸)時,可用與之相反的酸、堿度水沖洗血片予以糾正。,2019/6/30,27,影響染色效果的因素,(7)染色后不要直接將染液殘?jiān)沟?,?yīng)沿玻片或染色缸邊緣加水使染液表面一層溢出,并輕輕沖洗,以免染液色素顆粒沾污染片血膜。,注:用于薄血膜的染色和一般漂洗時,用蒸餾水稀釋至1 000ml,用于厚血膜及同一張玻片上厚血膜與薄血膜的染色時,用蒸餾水稀釋至500ml。,配制pH6.67.4緩沖液兩種貯備液用量表,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論