直抗陽性和免疫溶貧.ppt

直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)陽性和免疫溶血性貧血,抗球蛋白試驗(yàn) - 檢測 IgG,通過抗人球蛋白抗體的特異性橋連作用，促進(jìn)紅細(xì)胞的凝集。可分為直接和間接抗球蛋白試驗(yàn)。,直接抗球蛋白試驗(yàn),檢查受檢者紅細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)是否被抗體致敏 產(chǎn)生直抗陽性的條件 自身免疫溶血性貧血 溶血性輸血反應(yīng) 新生兒溶血病,間接抗球蛋白試驗(yàn),證實(shí)紅細(xì)胞在體外被抗體結(jié)合的試驗(yàn) 是檢查血清中IgG抗體特異性 或紅細(xì)胞抗原的重要手段 可用于 未知抗體的檢出與確認(rèn) 交叉配合試驗(yàn) 確認(rèn)抗原,間接抗球蛋白試驗(yàn),步驟1：致敏 步驟2：洗滌 步驟3：加入抗人球蛋白試劑（AHG）,增強(qiáng)介質(zhì),可以增強(qiáng)反應(yīng)性和減少孵育時間 LISS 電解質(zhì)增加溶液的介電常數(shù)，減弱了抗原抗體的靜電作用。降低離子強(qiáng)度可以顯著增加抗原抗體結(jié)合率 Polybrene 堿性高分子物質(zhì)，有效中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，降低zeta電位，縮短紅細(xì)胞之間的距離 PeG 極強(qiáng)的親水性，減少紅細(xì)胞與抗體周圍的水分 22Bovine albumin Enzymes,增強(qiáng)介質(zhì),柱凝集（Column agglutination） 固相技術(shù)（Solid-phase technology） 復(fù)合方法,Red blood cells panel,Plasma or serum,Screen Diluent,NanoLys,Anti-Human Globulin (AHG),2. Incubation 20 at 37C 3. Shake and Magnetize in the same time,12 l of serum or plasma,H1,H2,H3,60 l of NanoLys,15 l of Hemascreen1,2,3,60 l of Screen Diluent,抗體篩選方法,1.Dispensing,抗體篩選方法,DAT陽性血液標(biāo)本的收集,EDTA抗凝血 提供紅細(xì)胞 DAT測定，定型，洗脫，自身吸收 不抗凝血 提供血清 抗體篩選，抗體鑒定,DAT陽性血清學(xué)研究,多特異性抗球蛋白，抗IgG，抗C3 測定附著在紅細(xì)胞上的免疫球蛋白的類型 血清抗體篩選與鑒定 自身抗體，同種抗體 自身同種抗體 放散試驗(yàn) 確認(rèn)附著抗體的特異性 直抗（IgG）陽性，而血清與洗脫液皆無反應(yīng) 需進(jìn)一步研究： 藥物處理細(xì)胞，A和B細(xì)胞，酶處理細(xì)胞,紅細(xì)胞鑒定,定型 ABO/Rh，磷酸氯奎放散，收集網(wǎng)織紅細(xì)胞 DAT IgG，C3 放散 陰性：A和B細(xì)胞，酶處理，藥物處理細(xì)胞 陽性：同種抗體，自身抗體，同種自身 自身吸收,血清抗體鑒定,陽性 自身抗體 溫抗體，冷抗體 同種抗體 特異性鑒定 自身吸收鑒定同種抗體 陰性 IgG抗A，抗B抗體 酶處理細(xì)胞 藥物依賴抗體,抗體放散方法,紅細(xì)胞疾病,紅細(xì)胞增多 紅細(xì)胞減少 紅細(xì)胞生成減少 紅細(xì)胞破壞過多（溶血性貧血） 紅細(xì)胞丟失過多,溶血性貧血,紅細(xì)胞內(nèi)在缺陷 遺傳性紅細(xì)胞增多癥 紅細(xì)胞酶缺乏的貧血 珠蛋白生成障礙性貧血 異常血紅蛋白病 陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥 紅細(xì)胞外來因素 免疫溶血性貧血 機(jī)械性溶血性貧血 其它因素引起的溶血性貧血,免疫溶血性貧血的分類,自身免疫溶血性貧血（AIHA） Warm AIHA (WAIHA) Cold Agglutinin Syndrone (CAS) Mixed-type AIHA Paroxysmal Cold Hemoglobinura (PCH) DAT-negative AIHA 同種免疫溶血性貧血 Hemolytic Transfusion Reaction Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn (HDFN) 藥物誘發(fā)的免疫溶血性貧血 Drug-dependent Drug-independent,自身免疫溶血性貧血的血清學(xué)特征,溫抗體型自身免疫溶血性貧血(WAIHA),發(fā)病率 1/80000，女性比男性高，年齡多數(shù)40 病因分類 網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞腫瘤 慢性淋巴瘤;霍奇金病;非霍奇金淋巴瘤病 膠原病 系統(tǒng)性紅斑狼瘡;類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等 免疫性疾病 免疫缺陷綜合癥;低球蛋白血癥等 胃腸道疾病 某些良性腫瘤,WAIHA 發(fā)病機(jī)制,免疫調(diào)節(jié)紊亂 免疫器官對自身紅細(xì)胞失去識別能力 紅細(xì)胞膜損傷，改變膜的抗原性,WAIHA 診斷標(biāo)準(zhǔn),臨床表現(xiàn) 起病慢，數(shù)月后才發(fā)現(xiàn)貧血，表現(xiàn)為全身虛弱及頭昏。 各有1/3患者皮膚粘膜蒼白及黃膽，半數(shù)以上有脾腫大。 實(shí)驗(yàn)室檢查 1.貧血：程度不一，可暴發(fā)急性溶血現(xiàn)象。外周血涂片上可見 多量球形細(xì)胞及數(shù)量不等的幼紅細(xì)胞，； 2.骨髓涂片：呈幼紅細(xì)胞增生象； 3.再生危象：網(wǎng)織紅細(xì)胞極度減少，骨髓象呈細(xì)胞再生障礙， 血象呈全細(xì)胞減少； 4.DAT試驗(yàn)陽性，為抗IgG和抗C3型。,WAIHA 診斷依據(jù),直抗陽性 患者近4個月無輸血或特殊藥物服用史，結(jié)合臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查，可診斷為溫抗體型自身免疫溶血性貧血。 直抗陰性 但臨床表現(xiàn)較符合本病癥狀，腎上腺皮質(zhì)激素或切脾術(shù)有效，其它溶血性貧血除外，可診斷為抗球蛋白蛋白試驗(yàn)陰性的溫抗體型自身免疫溶血性貧血。,WAIHA 療效標(biāo)準(zhǔn),緩解 患者臨床癥狀消失 部分緩解 患者臨床癥狀基本消失。血紅蛋白量在80g/L以上，網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)在5以下，血清總膽紅素測定34umol/L（2mg/dl）。直抗陰性/陽性。 無效 患者治療后仍有不同程度的貧血或溶血癥狀，實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果未能達(dá)到部分緩解標(biāo)準(zhǔn)者。,溫自身抗體與Rh血型抗體,單一的Rh特異性 自身抗-e 復(fù)合的Rh特異性 Mimicking抗體,自身抗體同效（mimicking）同種抗體,一位rr型患者的血清中有抗C及抗e抗體，盡管患者的紅細(xì)胞缺乏C抗原，但事實(shí)上此抗C的反應(yīng)性，是因溫反應(yīng)性自身抗體而引起。這種由于自身抗體所致的反應(yīng)性，可用自身與同種吸收法來研究決定。在上述情況中，抗e為自身抗體，抗C抗體會吸附到自身及同種的r型細(xì)胞上，這與“真實(shí)”同種抗C完全不同，后者僅被C陽性紅細(xì)胞吸收。,溫自身抗體（廣范圍抗dl自身抗e）,CAS 發(fā)病機(jī)制,當(dāng)體溫較低（300C以下）時這種冷抗體能作用于自身紅細(xì)胞抗原而發(fā)生可逆性的紅細(xì)胞凝集。凝集的紅細(xì)胞阻塞微循環(huán)而發(fā)紺，可伴有輕度的溶血。溫度回升，癥狀消失。 原發(fā)性者原因不明 繼發(fā)性者相對多見于支原體肺炎以及傳染性單核細(xì)胞增多癥恢復(fù)期,CAS 診斷標(biāo)準(zhǔn),臨床表現(xiàn) 以中老年患者為多，寒冷環(huán)境使患者耳郭、鼻尖、手指發(fā)紺，但一經(jīng)加溫即消失。除貧血和黃疸外，其他體癥很少 實(shí)驗(yàn)室檢查 1.患者呈慢性輕至中度貧血，外周血中無紅細(xì)胞 畸形，可有輕度高膽紅素血癥； 2.反復(fù)發(fā)作者有含鐵血黃素尿； 3.冷凝集素試驗(yàn)陽性，40C效價(jià)1000； 4.DAT試驗(yàn)陽性，為C3型,PCH 發(fā)病機(jī)制,以全身或局部受寒冷刺激后突然發(fā)生大量血管內(nèi)溶血和血紅蛋白尿?yàn)樘卣鳎币?原發(fā)性發(fā)病者極為罕見 繼發(fā)性主要由梅毒特別是先天性梅毒及晚期梅毒靜止期所引起，現(xiàn)在此病大多出現(xiàn)于某些病毒感染，如麻疹、流行性感冒、水痘、傳染性單核細(xì)胞增多癥等傳染病之后，以兒童居多,PCH 診斷標(biāo)準(zhǔn),臨床表現(xiàn) 患者多數(shù)受寒后即有急性發(fā)作，表現(xiàn)為寒戰(zhàn)、發(fā) 熱（體溫可高達(dá)40 0C），全身無力及腰背痛，隨后即 有血紅蛋白尿，多數(shù)持續(xù)幾小時，偶有幾天 實(shí)驗(yàn)室檢查 1.發(fā)作時貧血嚴(yán)重，進(jìn)展迅速，外周血有紅細(xì)胞大 小不一及畸形，并有球形紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、 嗜堿性點(diǎn)彩細(xì)胞及幼紅細(xì)胞； 2.反復(fù)發(fā)作者有含鐵血黃素尿； 3.DL試驗(yàn)陽性； 4.DAT試驗(yàn)陽性，為C3型,DL 冷溶血試驗(yàn),Donath-Landsteiner test DL冷溶血素IgG冷反應(yīng)性抗體，能結(jié)合于幾乎所有正常人紅細(xì)胞均有的P血型抗原，是一種冷溫雙相溫度的冷溶血素，具有強(qiáng)烈的溶血作用。體外最適反應(yīng)溫度0 0C -4 0C，150C以下補(bǔ)體不能按序最終激活，故不發(fā)生補(bǔ)體溶血，回升37 0C時抗體與細(xì)胞解離，但補(bǔ)體卻依次激活，導(dǎo)致溶血。 先置于冰水中約30分鐘，再置于37 0C水浴中2小時，溶血，DL抗體存在。,冷自身免疫溶血性貧血的輸血,慢性冷凝集素病很少需要輸血，但是發(fā)生大量溶血時，病人溫度約40 0C的環(huán)境。當(dāng)紅細(xì)胞輸入開始10分鐘紅細(xì)胞快速在病人血液中破壞，然后破壞速度變慢 陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者很少需要輸血，因抗體反應(yīng)溫度常只到20 0C ，所以很少引起溶血，當(dāng)抗體反應(yīng)溫度如上升到30 0C即可引起溶血。輸P陰性血，但有人成功的輸予沒洗滌，沒加溫，P陽性的細(xì)胞,自身吸收 區(qū)分自身和同種抗體,患者血清：自身抗體+同種抗K 洗滌患者細(xì)胞，56 0C水浴中孵育5分鐘，洗脫部分自身抗體 酶處理洗脫紅細(xì)胞，可增大吸附抗體的能力 37 0C吸附患者血清，移去自身抗體，只留下同種抗體,Blood-Matching Goes Genetic,Hoping to prevent adverse transfusion reactions and save lives, European researchers are lobbying to replace serology-based blood typing with matchingbased on DNA tests 14 MARCH 2008 VOL 319 SCIENCE ,配血步入基因時代,為了預(yù)防輸血不良反應(yīng)和挽救生命，歐州學(xué)者們正在呼吁用DNA檢測替代血清學(xué)方法來鑒定血型 14 MARCH 2008 VOL 319 SCIENCE ,Blood-Matching Goes Genetic,Two decades ago, a 20-year-old man entered Duke University hospital for a hip replacement. He had sickle cell disease and because he was anemic, he needed a blood transfusion before the operation. As with most sickle cell patients, he had received transfusions before. But on this occasion, his body rejected the blood. The doctors tried again and again with different blood, but the mans immune system rebelled against every new transfusion, generating antibodies that killed the new blood cells and some of his own in the process. “He reacted to everything,” says Wendell Rosse, a hematologist at Duke at the time. The mans anemia continued to worsen, and 2 weeks later he died. “There wasnt anything we could do,” Ros