病毒與細胞間的相互作用.ppt

第四章 病毒與細胞間的相互作用,第一節(jié) 病毒的細胞培養(yǎng) 第二節(jié) 病毒與細胞的相互作用,第一節(jié) 病毒的細胞培養(yǎng),病毒是嚴格的細胞內寄生微生物，培養(yǎng)病毒必須使用細胞。根據(jù)病毒的不同選用敏感動物（動物接種）、雞胚（雞胚接種）或離體細胞進行分離培養(yǎng)（細胞培養(yǎng)）。,一、動物接種,接種后通常以動物發(fā)病、死亡作為感染的指標。,按病毒侵襲部位不同選擇適當?shù)慕臃N途徑。嗜神經病毒接種在小鼠的腦內。痘苗病毒和單純皰疹病毒接種于家兔角膜。,動物接種的優(yōu)缺點：,優(yōu)點：（1）不需要復雜的儀器設備； （2）技術簡單； （3）易成功,缺點：（1）個體差異大 （2）價格昂貴 （3）數(shù)量有限 （4）需要隔離畜舍,二、雞胚接種,一種比較經濟簡便的方法。,卵殼,殼膜,雞胚接種的優(yōu)缺點：,優(yōu)點：技術簡單、來源充沛、價格低廉、數(shù)量可大， 不需特殊設備,缺點：很多病毒不能適應，主要是哺乳動物的病毒。,細胞培養(yǎng)(cell culture)是指利用機械、酶或化學方法使動物組織或傳代細胞分散成單個乃至24個細胞團懸液進行培養(yǎng)。,三、細胞培養(yǎng),每個細胞生理特性基本一致，對病毒易感性相等 無個體差異，準確性和重復性好 可嚴格執(zhí)行無菌操作 細胞培養(yǎng)本身就能顯示病毒的生長特征 應用空斑技術可進行病毒的克隆化,優(yōu)點：,根據(jù)細胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)，可分為三種類型： 原代細胞：動物組織經胰蛋白酶消化處理，使細胞分散而得到的細胞。 二倍體細胞：將長成單層的原代細胞消化分散成單個細胞，繼續(xù)培養(yǎng)傳代，其染色體數(shù)與原代細胞一樣，保持其二倍染色體數(shù)目的細胞，稱為二倍體細胞。 傳代細胞：能在體外持續(xù)增殖傳代的細胞，大多數(shù)由癌細胞或二倍體細胞突變而成。,（一）細胞的類型,（二）細胞培養(yǎng)的方法,靜置培養(yǎng)：實驗室常用。細胞懸液裝瓶，5%CO2溫箱靜置培養(yǎng)，細胞沉降并貼附在玻面上生長分裂，最后長成單層。 旋轉培養(yǎng)：大規(guī)模生產疫苗。細胞在玻瓶內生長時，玻瓶不斷緩慢旋轉，細胞貼附于玻瓶四周，長成單層。,第二節(jié) 病毒與細胞的相互作用,殺細胞感染 非殺細胞感染 引致持續(xù)感染，對細胞代謝無影響。 產生干擾素,由病毒感染導致的細胞損傷。CPE能在光學顯微鏡下觀察。 細胞圓縮，如痘病毒和呼腸孤病毒等； 細胞聚合，如腺病毒； 細胞融合形成合胞體，如副粘病毒和皰疹病毒； 有些病毒能形成包涵體。,一、病毒引致的殺細胞變化,（一）細胞病變效應(cytopathic effect,CPE),正常細胞,CPE,CPE觀察,正常單層A72細胞,接種CCV后出現(xiàn)細胞拉網(wǎng) 的的單層A72細胞,CPE觀察,CPE觀察,正常單層A72細胞,接種犬冠狀病毒（CCV）后形成合胞體的的單層A72細胞,合胞體（syncytia）是病毒感染后導致感染細胞及相鄰細胞細胞膜融合的產物，表現(xiàn)為若干細胞的相鄰細胞膜消失，成為多核巨細胞。,能夠使半數(shù)組織細胞在一定條件下發(fā)生細胞病變的病毒量。用于判定病毒的毒力。,50%組織細胞感染量（TCID50）,（二）空斑試驗,將適當濃度的病毒懸液加入單層細胞培養(yǎng)中，當病毒吸附細胞后，再覆蓋一層融化的瓊脂。病毒在細胞內復制后產生局限性病灶，病灶逐漸擴大，肉眼也能看見，此即空斑試驗。,空斑是由一個感染性病毒粒子復制形成的，類似于細菌的菌落，稱為空斑形成單位（PFU）。病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU來表示。,CELLS,空斑試驗的用途：,1. 測定病毒數(shù)量 2. 純化病毒 單個空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，可獲得病毒克隆。 3. 鑒定病毒 不同病毒的空斑具有不同的特征。,（三）包涵體（inclusion body),定義：是某些病毒感染細胞產生的特征性的形態(tài)變化，在普通光學顯微鏡下可見胞漿或胞核內出現(xiàn)的呈嗜酸性或嗜堿性染色、大小數(shù)量不等的圓形或不規(guī)則形的團塊狀結構，稱為包涵體。,包涵體的性質,病毒成分的蓄積，如狂犬病毒的Negri氏體 大量晶格樣排列的病毒顆粒組成，如腺病毒的包涵體 細胞變性的產物，不含病毒，如皰疹病毒的包涵體,狂犬病毒包涵體（Negri body）,定義：由病毒或誘生劑刺激機體細胞產生的具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調節(jié)作用的糖蛋白。 種類：、干擾素。 抗病毒作用：干擾素不直接作用于病毒，而是作用于鄰近的細胞，使其產生抗病毒蛋白，這些抗病毒蛋白降解病毒mRNA、抑制蛋白合成。 干擾素作用具有宿主特異性，而無病毒特異性。,二、干擾素（IFN）