GB 5009.258-2016 食品安全國家標準 食品中棉子糖的測定.pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準 G B5 0 0 9.2 5 82 0 1 6 食品安全國家標準 食品中棉子糖的測定 2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發(fā)布2 0 1 6 - 0 9 - 2 0實施 中華人民共和國 國家衛(wèi)生和計劃生育委員會 發(fā) 布 G B5 0 0 9.2 5 82 0 1 6 1 食品安全國家標準 食品中棉子糖的測定 1 范圍 本標準規(guī)定了食品中棉子糖含量測定的離子色譜方法。 本標準適用于嬰幼兒配方食品、 嬰幼兒谷類輔助食品、 嬰幼兒罐裝輔助食品、 飲料及豆粉食品中棉 子糖含量的測定。 2 原理 試樣采用乙腈沉淀、 高速離心的方式去除樣品中的蛋白質(zhì)和脂肪, 經(jīng)固相萃取柱凈化后, 注入離子 色譜儀, 氫氧化鈉溶液為淋洗液, 經(jīng)陰離子交換柱分離, 脈沖安培檢測器檢測。保留時間定性, 外標法 定量。 3 試劑和材料 除非另有說明, 本方法所用試劑均為優(yōu)級純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。 3.1 試劑 3.1.1 乙腈(C2H3N) : 色譜純。 3.1.2 5 0%氫氧化鈉溶液(N a OH) : 色譜純。 3.1.3 -淀粉酶: 酶活力1.5U/ m g 。 3.1.4 氮氣(N2) : 純度9 9.9 9%。 3.2 試劑配制 氫氧化鈉溶液( 2 5 0mm o l /L) : 在2L塑料試劑瓶中加入5 0 0m L經(jīng)過0. 2 2m尼龍濾膜過濾的蒸 餾水, 移取1 3. 1m L氫氧化鈉(3.1.2) 溶液至水面以下, 加蒸餾水至10 0 0m L, 通入氮氣保護后, 搖勻 備用。 3.3 標準品 棉子糖標準品( C1 8H3 2O1 6) : 純度9 9.0%。 3.4 標準溶液配制 3.4.1 標準儲備溶液(10 0 0m g/L) : 準確稱取棉子糖1 0 0m g( 精確到0.1m g) 于5 0m L燒杯中, 用蒸餾 水溶解, 轉(zhuǎn)移到1 0 0m L容量瓶中, 用水定容。搖勻, 4保存, 有效期為1個月。 3.4.2 標準使用溶液(5 0.0m g/L) : 準確吸取5m L標準儲備溶液于1 0 0m L容量瓶中, 用蒸餾水定容 至刻度。現(xiàn)用現(xiàn)配。 3.4.3 標準系列工作溶液: 分別準確吸取棉子糖標準使用溶液0 m L、1 m L、2 m L、5 m L、1 0 m L、 G B5 0 0 9.2 5 82 0 1 6 2 2 0m L、5 0m L于1 0 0m L容量瓶中, 用蒸餾水定容。得到標準曲線工作溶液濃度分別為0.0 0 0m g/L、 0.5 0 0m g/L、1.0 0m g/L、2.5 0m g/L、5.0 0m g/L、1 0.0m g/L、2 5.0m g/L。 4 儀器和設備 4.1 離子色譜儀: 配置脈沖安培檢測器。 4.2 天平: 感量為0.1m g。 4.3 離心機: 轉(zhuǎn)速1 00 0 0r/m i n。 4.4 渦旋混合器。 4.5 超聲波清洗器。 4.6 固相萃取裝置。 4.7 培養(yǎng)箱:6 02。 4.8 固相萃取柱:O n G u a r d R P柱( 填料為反相聚二乙烯基苯聚合物) 和O n G u a r d H柱( 填料為 H型聚苯乙烯基強酸樹脂) , 或其他等效柱。規(guī)格為1.0m L,H柱為6 5 0m g,R P柱為3 5 0m g。 4.9 0.2 2m水性濾膜針頭濾器。 4.1 0 注射器:1 5m L。 5 分析步驟 5.1 試樣制備 5.1.1 試樣預處理 5.1.1.1 乳粉、 米粉、 豆粉等試樣: 取試樣約1 0 0g( 其他固體試樣先進行粉碎、 研磨) ,裝入能夠容納2倍 試樣體積的帶蓋容器中, 通過反復搖晃和顛倒容器使試樣充分混勻直到使試樣均一化。 5.1.1.2 液體試樣: 取試樣約1 0 0m L,裝入能夠容納2倍試樣體積的帶蓋容器中, 通過反復搖晃和顛 倒容器使試樣充分混勻直到使試樣均一化。 5.1.1.3 肉泥等其他半固體試樣: 稱取試樣5 0.0g, 稱取等量的水與之混合, 渦旋混勻, 超聲2 0m i n。 5.2 試樣處理 5.2.1 米粉等含淀粉的試樣: 稱取混合均勻的試樣1g 5g( 精確至0.1m g, 含有棉子糖約為2 0m g) 于 離心管中, 加入1g -淀粉酶, 固體試樣需用約5 0m L4 55 0的水使其溶解, 混合均勻后充氮, 蓋 上管蓋, 置于6 02培養(yǎng)箱內(nèi)酶解3 0m i n。冷卻至室溫后, 用水定容至1 0 0m L。 5.2.2 乳粉、 豆粉、 飲料、 肉泥等其他試樣: 稱取混合均勻的試樣1g5g( 精確至0.1m g, 含有棉子糖 約為2 0m g) 于1 0 0m L燒杯中, 加水溶解, 固體試樣需用約5 0m L4 55 0的水使其溶解, 轉(zhuǎn)移到 1 0 0m L容量瓶中, 用水定容。 5.3 凈化 5.3.1 吸取5m L經(jīng)過處理的試樣溶液于5 0m L具塞錐形瓶中, 加入1 0m L水, 搖勻, 超聲3 0m i n, 轉(zhuǎn) 移到5 0m L容量瓶中, 加入3 0m L乙腈, 用水定容。轉(zhuǎn)移到5 0m L離心管中, 于1 00 0 0r/m i n離心 1 0m i n, 取上清液備用( 可以根據(jù)樣液中棉子糖含量調(diào)整稀釋倍數(shù)) 。 5.3.2 固相萃取柱的活化: 將O n G u a r dR P柱使用前依次用1 0m L甲醇、1 5m L蒸餾水進行活化; O n G u a r d H柱用1 0m L蒸餾水進行活化。必要時可以使用固相萃取裝置, 液體流速控制在1m L/m i n。 5.3.3 將1 5m L注射器的柱筒部分、0.2 2m水性濾膜針頭濾器、O n G u a r d R P柱、O n G u a r d H G B5 0 0 9.2 5 82 0 1 6 3 柱順序連接, 接在固相萃取裝置上。取備用的上清液( 5.3.1) 約1 5.0m L加入注射器柱筒, 調(diào)節(jié)固相萃 取裝置, 液體流速控制在1m L/m i n。棄去前面3m L流出液, 收集后面的流出液待測。 5.4 儀器參考條件 5.4.1 色譜柱:C a r b o P a cP A 2 0(1 5 0mm3mm) ; 保護柱:C a r b o P a cP A 2 0(3 0mm3mm) , 或性能相 當?shù)碾x子色譜柱。 5.4.2 淋洗液: 水+2 5 0mm o l /L氫氧化鈉溶液=5 8+4 2, 等度洗脫。 5.4.3 流速:0.4m L/m i n。 5.4.4 檢測器: 脈沖安培檢測器, 金電極, A g /A g C l參比電極, 檢測池溫度為3 0。 5.4.5 柱溫:3 0。 5.4.6 進樣體積:1 0L。 5.5 測定 5.5.1 標準曲線的制作 將標準系列工作溶液按照從低濃度到高濃度的順序依次進樣, 得到各濃度標準溶液的色譜圖。以 棉子糖的濃度( m g /L) 為橫坐標, 以峰面積為縱坐標, 繪制標準曲線或計算線性回歸方程( 標準溶液離子 色譜圖見圖A. 1) 。 5.5.2 測定 在與標準曲線測定相同的工作條件下, 取1 0L試樣溶液注入離子色譜儀, 以保留時間定性, 測得 峰面積, 根據(jù)標準曲線得到待測樣液中棉子糖的濃度( 試樣溶液離子色譜圖參見圖A. 2) 。 6 分析結果的表述 試樣中棉子糖含量按式( 1) 計算: X=C VK m10 0 0 (1) 式中: X 試樣中棉子糖的含量, 單位為克每千克(g/ k g ) ; C 試樣測定液中棉子糖質(zhì)量濃度, 單位為毫克每升( m g /L) ; V 試樣制備時定容體積, 單位為毫升(m L) ; K 試樣溶液稀釋倍數(shù), 包括試樣制備和凈化過程的兩步稀釋; m 試樣質(zhì)量, 單位為克(g) 。 計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示, 結果保留三位有效數(shù)字。 7 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的1 0%。 8 其他 檢出限和定量限: 取樣量為1. 0g, 定容體積為1 0 0m L, 稀釋倍數(shù)為1 0時, 測定棉子糖的檢出限為 0.1g/ k g ; 定量限為0. 3g /