課件：大學(xué)課件病毒感染的檢查方法與防治原則.ppt

第24章 病毒感染的檢查方法與防治原則,/sundae_meng,1）掌握標(biāo)本的采集與送檢原則、病毒感染的快速診斷； 2）熟悉病毒感染的免疫預(yù)防、抗病毒治療； 3）了解病毒的分離培養(yǎng)。,學(xué)習(xí)要求,/sundae_meng,病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷有三個(gè)方面： 直接檢測(cè)和分離鑒定； 檢測(cè)病毒核酸和抗原成分； 檢測(cè)特異性抗體。,/sundae_meng,第一節(jié) 病毒感染的檢查方法,一、標(biāo)本采集與送檢：,1、采集的標(biāo)本：通常采集血液、鼻咽分泌液、咯痰、糞便、腦脊液、皰疹內(nèi)容物、活檢組織或尸檢組織等。,（一）供病毒分離培養(yǎng)、檢測(cè)核酸和抗原,/sundae_meng,2、采集原則,（1）時(shí)間:在發(fā)病初期（急性期）采取，較易檢出病毒，越遲陽(yáng)性率越低。 （2）類(lèi)型:在感染部位采取。如呼吸道感染采取鼻咽洗漱液或咯痰； （3）運(yùn)輸:冷藏速送。病毒離活體后在室溫下很易死亡，故采得檢材應(yīng)盡快送檢。遠(yuǎn)距離運(yùn)送，應(yīng)將檢材放入裝有冰塊或干冰的空器內(nèi)送檢。病變組織則應(yīng)保存于50%的甘油緩沖鹽水中。 （4）處理：無(wú)菌操作；污染檢材，加雙抗生素或氯仿處理。如鼻咽分泌液、糞便等應(yīng)加入青霉素、鏈霉素等，以免雜菌污染細(xì)胞或雞胚，而影響病毒分離。,/sundae_meng,（二）供血清學(xué)檢查的標(biāo)本的采集原則,1、檢測(cè)特異性抗體需要采取急性期與恢復(fù)期雙份血清，第一份盡可能在發(fā)病后立即采取，第二份在發(fā)病后23周采取。 2、血清標(biāo)本放4-20保存，試驗(yàn)前血清標(biāo)本以5630分鐘處理去除非特異性物質(zhì)及補(bǔ)體。 3、無(wú)菌性腦炎患者也可取腦脊液檢測(cè)特異性lgM。,/sundae_meng,二、形態(tài)學(xué)檢查,電子顯微鏡（EM）:能觀察病毒顆粒的形態(tài)和大小。 光學(xué)顯微鏡:能觀察病毒感染細(xì)胞內(nèi)的病理變化，如包涵體或多核巨細(xì)胞等。 例如，狂犬病病毒感染后可在腦神經(jīng)細(xì)胞漿中檢出嗜酸性包涵體，稱(chēng)為內(nèi)基小體，可輔助診斷狂犬病。,/sundae_meng,三、病毒的分離培養(yǎng),（一）病毒分離的一般程序是,鑒定病毒種型(血清學(xué)方法),檢驗(yàn)標(biāo)本殺滅雜菌(青、鏈霉素)接種,易感的動(dòng)物出現(xiàn)病狀 雞胚病變或死亡 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞病變,/sundae_meng,/sundae_meng,（二）分離病毒的鑒定,1病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指征 （1）細(xì)胞致病作用(Cytopathogenic effect,CPE):病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖引起細(xì)胞退形性變，表現(xiàn)為細(xì)胞皺縮、變圓、出現(xiàn)空泡、死亡和脫落。某些病毒產(chǎn)生特征性CPE，普通光學(xué)倒置顯微鏡下可觀察上述細(xì)胞病變，結(jié)合臨床表現(xiàn)可做出預(yù)測(cè)性診斷。 （2）紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象 （3）干擾現(xiàn)象 （概念、作用機(jī)理、意義） 2病毒感染性的定量測(cè)定 ：,/sundae_meng,病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指標(biāo),正常細(xì)胞,病變細(xì)胞,/sundae_meng,干擾現(xiàn)象,概念：兩種不同病毒或同種異型病毒、感染同一細(xì)胞時(shí)，一種病毒抑制另一病毒增殖的現(xiàn)象。,病毒誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生干擾素:抑制被干擾病毒的生物合成。 競(jìng)爭(zhēng)干擾：一種病毒破壞宿主細(xì)胞的表面受體，因而阻斷另一病毒吸附。 改變宿主細(xì)胞的代謝途經(jīng)：從而阻止第二種病毒的mRNA的合成或其他生物合成過(guò)程。 產(chǎn)生缺陷病毒:其基因不能正常復(fù)制，但能干擾感染性病毒體的復(fù)制，這種缺陷病毒稱(chēng)為缺陷干擾顆粒。,/sundae_meng,四、病毒成分（核酸及抗原）的直接檢出,（一）直接檢出病毒核酸 1核酸雜交 2多聚酶鏈反應(yīng) 3. 基因芯片技術(shù) （二）直接檢測(cè)病毒抗原 1免疫熒光（IF）技術(shù) 2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,/sundae_meng,ELISA,Microplate ELISA for HIV antibody: coloured wells indicate reactivity,/sundae_meng,五、特異性抗體的檢測(cè),病毒感染后通常誘發(fā)針對(duì)病毒一種或多種抗原免疫應(yīng)答，特異性抗體效價(jià)升高或lgM抗體出現(xiàn)有輔助臨床診斷的價(jià)值。 （一）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CF） （二）中和試驗(yàn)（NT） （三）血凝抑制試驗(yàn) （HIA）,/sundae_meng,光鏡-包涵體,電鏡,免疫熒光,ELISA,分子生物學(xué)技術(shù),雜交,PCR,六、病毒感染的快速診斷,/sundae_meng,第二節(jié) 病毒感染的免疫預(yù)防,/sundae_meng,一、人工主動(dòng)免疫,人工主動(dòng)免疫制劑病毒疫苗： （一）減毒活疫苗 是由從自然界或人工突變培育篩選出的致病性減弱或喪失的病毒突變株制備而成的疫苗，如脊髓灰質(zhì)炎活疫苗。 （二）滅活疫苗 是利用某些理化因素處理活病毒，使其失去感染性后制備而成。如乙型腦炎滅活疫苗。 （三）亞單位疫苗 是將病毒中有效的免疫原成分提取制備而成。 （四）基因工程疫苗 利用基因工程技術(shù)制備的病毒疫苗主要有：基因工程亞單位疫苗；基因工程載體疫苗；核酸疫苗。,/sundae_meng,/sundae_meng,二、人工被動(dòng)免疫,常用制劑有： 抗病毒免疫血清:現(xiàn)有抗麻疹、 抗狂犬病、抗乙型腦炎免疫血清等，這些免疫血清具有顯著的預(yù)防作用； 人免疫球蛋白制劑:包括人血清丙種球蛋白、胎盤(pán)球蛋白 特異性免疫球蛋白：從某種病毒感染者的血清中提取、純化后制備的免疫球蛋白，可緊急預(yù)防相應(yīng)的病毒感染，如乙型肝炎免疫球蛋白（HBIg）。,/sundae_meng,1抗病毒的化學(xué)制劑：目前抗病毒化學(xué)藥物主要有核苷類(lèi)藥物。 （1）核苷類(lèi)藥物：通過(guò)阻抑子代病毒基因的合成與表達(dá)，抑制病毒復(fù)制 . 常用藥物有: 用于DNA病毒感染:阿糖腺苷、碘尿苷、無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷（阿昔洛韋）、丙氧鳥(niǎo)苷； 用于HIV感染:疊氮脫氧胸苷（AZT） 廣譜抗病毒:3-氮唑核苷，對(duì)多種RNA或DNA病毒有抑制作用。,第三節(jié) 病毒感染的治療,/sundae_meng,（2）病毒蛋白酶抑制劑：通過(guò)抑制病毒蛋白酶的活性，阻止病毒的復(fù)制. 常用藥物有印地那韋、利多那韋等，對(duì)HIV有一定抑制作用。 （3）其它抗病毒藥物：金剛烷胺或甲基金剛烷胺用于甲型流感的治療，甲酸磷霉素用于皰疹病毒感染的治療。,/sundae_meng,2干擾素及干擾素誘生劑 : 干擾素具有廣譜抗病毒作用，主要用IFN-，副作用小，對(duì)某些病毒性疾病的防治有較好的效果 。 3中草藥: 黃芪、大青葉、板蘭根、貫眾。 4其他:單克隆抗體、治療性疫苗、細(xì)胞因子等免疫制劑。,/sundae_meng,后面內(nèi)容直接刪除就行 資料可以編輯修改使用 資料可以編輯修