臨床本科3-溶貧檢測.ppt

1、第三節(jié) 溶血性貧血檢測,溶血性貧血定義： 紅細(xì)胞的生存時間縮短1520天以下，破壞速度超過骨髓的代償造血能力時，才出現(xiàn)貧血 發(fā)病機(jī)制分類： RBC內(nèi)在因素（遺傳性/先天性） RBC外在因素（獲得性）,溶貧的臨床表現(xiàn),急性：發(fā)熱、畏寒，可出現(xiàn)Hb尿，腎功能改變 慢性：貧血、黃疸、脾腫大、免疫指標(biāo)異常，膽紅素代謝異常,紅細(xì)胞破壞增多的依據(jù) RBC壽命15天 血片見RBC碎片 血漿游離Hb增高（血管內(nèi)溶血） Hb尿檢測（），醬油色 尿含鐵血黃素試驗(yàn)（） 血清非結(jié)合膽紅素增高 尿膽原增高 血清結(jié)合珠蛋白減低 血漿高鐵血紅素白蛋白檢測,球形紅細(xì)胞,破碎紅細(xì)胞、盔形紅細(xì)胞等,一、溶貧篩查試驗(yàn),1、血漿游離

2、Hb測定正常值：50mg/L 意義：血管內(nèi)溶血的指征,2、血清結(jié)合珠蛋白測定,正常值：0.71.5g/L 各種溶血時結(jié)合珠蛋白均可減低，嚴(yán)重血管內(nèi)溶血明顯減低，甚至測不出（血漿游離血紅蛋白超過1.3g /L時）。 巨幼細(xì)胞貧血、嚴(yán)重肝病、口服避孕藥、先天性無結(jié)合珠蛋白血癥等減低或消失。 增高見于炎癥、感染、組織壞死、惡性腫瘤、風(fēng)濕性疾病、口服避孕藥、類固醇激素治療。,3、血漿高鐵血紅素清蛋白檢測,正常： 陰性 嚴(yán)重血管內(nèi)溶血時呈陽性 4、RBC壽命測定（最佳） 正常值：2532天 51Cr同位素標(biāo)記，半衰期15天，說明有溶血存在。,5、尿含鐵血黃素試驗(yàn)（Rous test),正常值：陰性 溶貧

3、中陽性只占1020%,二、 紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn) 1、RBC滲透脆性試驗(yàn) 檢測紅細(xì)胞在不同濃度 低滲鹽水中的抵抗力 RBC表面積/RBC容積比值 與RBC脆性成反比,參考值： 開始溶血0.42%0.46% (NaCl液) 完全溶血0.28%0.32% (NaCl液) 意義： 脆性增高 遺傳性球形細(xì)胞增多癥 脆性減低 地中海貧血、缺鐵性貧血,2、自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn),正常人紅細(xì)胞經(jīng)孵育48h后，溶血率很低4.0%，加葡萄糖或ATP后更低（0.6%） 膜缺陷性溶貧時，溶血率升高，但可被糾正 G6PD缺陷 ：ATP：可糾正 但不能糾至正常 G： 同上 PK缺陷： ATP：可糾正 G： 不糾正,三、

4、酶缺陷的檢驗(yàn),1、 高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn) G6PD 高鐵血紅蛋白還原酶 G6P NADP 還原型美蘭 HbFe3+ 6PG NADPH 氧化型美蘭 HbFe2+ NaNO2,正常值：定性法（） 半定量法 還原率75% G6PD缺陷：定性（），半定量70%。,2、氰化物-抗壞血酸試驗(yàn),原理：略 結(jié)果：正常血液幾小時后變暗色 意義：G6PD缺乏者血液變成棕色（巧克力色），純合子在2h內(nèi)即變色，雜合子要34h變化,3、變性珠蛋白小體生成試驗(yàn),受檢RBC乙酰苯肼 作活體染色（甲基紫） 3712h 有變性珠蛋白小體，則膜上形成紫黑色顆粒 下一張,G6PD缺乏致GSH減少，高鐵Hb增多，形成Heinz小體

5、,體外活體染色后，光鏡下發(fā)現(xiàn)的12m顆粒狀折光小體。 結(jié)果：正常人30% 意義：見于不穩(wěn)定血紅蛋白病、G6PD缺陷癥和芳香族苯胺或硝基類化合物中毒所致的溶貧。,4、G6PD PK活性測定,四、珠蛋白生成異常試驗(yàn) 包括血紅蛋白電泳、 HbF定量測定（堿變性試驗(yàn)）等,五、免疫性溶血的檢驗(yàn),1、抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs test） 直接法、間接法,直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAGT）,測RBC表面結(jié)合的抗體（更重要，價值高） 受檢者RBC懸液+等量抗人球蛋白試劑 低速離心后觀察凝集 37，15min,間接法（IAGT）： 測游離特異的抗體（先使RBC致敏，再與抗人球蛋白血清結(jié)合）,Coombs tes

6、t臨床意義 正常人抗人球蛋白試驗(yàn)直接、間接均陰性 自身免疫性溶血性貧血（溫抗體型 37條件下作用最強(qiáng) IgG）,(冷抗體型 4條件下進(jìn)行試驗(yàn) IgM) 新生兒同種免疫溶血病、SLE、RA、HD、NHL 可陽性。,2、冷熱溶血試驗(yàn),檢測補(bǔ)體依賴性冷熱溶血素 存在D-L雙向抗體，則（+） 正常為（-），（+）見于PNH 3、冷凝集素試驗(yàn)參考值：效價1:40 意義：AIHA ,六、PNH相關(guān)檢測 屬于紅細(xì)胞膜缺陷，慢性血管內(nèi)溶血,PNH不同時間尿樣,1、酸化溶血試驗(yàn)（Ham test） 特異性高，是國內(nèi)外公認(rèn)的PNH確診試驗(yàn) 利用補(bǔ)體在弱酸性環(huán)境中激活，并攻擊RBC膜，致溶血 。 正常人陰性，PNH

7、陽性。,2、蔗糖溶血試驗(yàn) 特異性敏感性均不如Ham試驗(yàn)，僅做篩選。 參考值：陰性 3、蛇毒因子溶血試驗(yàn) 特異檢測PNH,第四節(jié) 血型鑒定與交叉配血,血型定義： 紅細(xì)胞系統(tǒng)血型：,一、ABO系統(tǒng)與臨床意義,1、分型原則 根據(jù)紅細(xì)胞膜上含有抗原和血漿中含有相應(yīng)抗體分為A、B、AB、O四型,血型（表型）紅細(xì)胞上抗原 血漿中抗體 基因型,A A 抗B AA、AO,B B 抗A BB、BO,O 無 抗A、 抗B、抗AB OO,AB A、B 無 AB,父母的血型與子女的血型關(guān)系,2、抗原,A、B抗原（含H抗原）在胚胎期已形成，出生時抗原性不強(qiáng)，故胎兒、新生兒定血型時凝集性差。 血型抗原終生不變。H抗原屬分

8、泌型物質(zhì)，存在各組織中，以唾液為多，可輔助鑒定ABO血型。,3、抗體,抗A、 抗B、抗AB屬IgG 或IgM型，天然性抗體以IgM為主，免疫性以IgG為主（如輸血、妊娠后）。 O血型血清內(nèi)抗體屬IgG。新生兒溶血與IgG有關(guān)。 抗體也終生不變,抗A、抗B在生后3-6月才開始產(chǎn)生, 5-6歲達(dá)高峰，故嬰幼兒定血型時， 抗體效價低，抗原位點(diǎn)少，易誤定,ABO亞型,亞型是指屬同一血型抗原，但抗原結(jié)構(gòu)或抗原位點(diǎn)數(shù)有一定差異。 最多見的最有意義亞型是A型中的A1、A2 （A1A、A1B 、A2B)。 A2B含有A1抗體。 凡在血型鑒定過程中出現(xiàn)不明顯或可疑結(jié)果時應(yīng)做亞型鑒定。,4、血型鑒定,正向直接定型

9、： 用已知抗體血清檢查紅細(xì)胞的抗原 反轉(zhuǎn)定型： 用已知血型的紅細(xì)胞檢查血清中抗體,正定型 反定型 抗A 抗B 抗AB A細(xì)胞 B細(xì)胞 O細(xì)胞 + - + - + - A -+ + + - - B + + + - - - AB - + + - O,血 型,三、交叉配血、輸血原則,1、交叉配血 主側(cè)交叉配血： 次側(cè)交叉配血:：,2、輸血原則,輸血前復(fù)查血型， 做交叉配血;輸同型 血，多個不同血源 間互相交叉配血; 嚴(yán)格掌握輸血指征; 提倡成分輸血,意義,輸血； 輔助診斷新生兒溶血病； 器官移植； 遺傳分析； 其他,二、Rh系統(tǒng)與臨床意義,1900年發(fā)現(xiàn)ABO血型，1940年發(fā)現(xiàn)Rh血型 。 抗原有C c D E e五種 ，一般以D定型。,含有D抗原的紅細(xì)胞稱為Rh陽性，不含D抗原的為Rh陰性.我國人群漢族