豬偽狂犬病防控探討---臨床篇

1、豬偽狂犬病防控探討 -臨床應(yīng)用篇,陳家锃 博士/主任2017年8月22日,個人介紹,1、預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博士，師從童光志所長、李一經(jīng)院長和田志軍研究員； 2、從事高致病性藍(lán)耳病HuN4-F112的研制及大量的臨床試驗工作； 3、參加國家中長期項目（2008-2020），豬瘟和偽狂犬凈化工作；,2011年所在團(tuán)隊最早發(fā)現(xiàn)了豬偽狂犬變異株，并開展疫苗的研制和偽狂犬疾病的防控工作,國際首次報道 IF 7.327,國內(nèi)首次報道,Virulent Pseudorabies virus (vPRV) （超強毒） Pseudorabies Virus Variant （變異株）,目前主要

2、從事豬病的臨床防控及實驗室診斷工作 擅長的領(lǐng)域： 豬場的免疫程序評估及調(diào)整 豬疫苗評估的動物實驗設(shè)計 病毒性疾病診斷及綜合防控,每個豬場都面臨偽狂犬感染的威脅 不同豬場和感染的不同階段的表現(xiàn) 如何通過實驗室確診和防控偽狂犬 如何科學(xué)地發(fā)揮偽狂犬疫苗的作用 偽狂犬“五步法轉(zhuǎn)陰”及注意事項,主要內(nèi)容,一、每個豬場都面臨偽狂犬感染的威脅,偽狂犬病毒的特性： 1、病毒對外界的抵抗力強 從發(fā)病豬排泄的病毒，37 10天，25 40天，15 120天仍存活； 2、偽狂犬的中間宿主多，散毒方式多樣,豬最具耐受性，是自然界病毒唯一的貯存宿主。 此外，牛、羊、馬、狗、貓、鼠等都能被偽狂犬病毒感染并散毒,體內(nèi)可在

3、多個臟器內(nèi)繁殖，繁殖快。 散毒途徑多樣，可通過唾液、精液等方式散毒,自然感染的途徑： 經(jīng)鼻感染和經(jīng)口感染 空氣傳播 老鼠的傳播 蒼蠅的傳播 虱子傳播 妊娠豬感染給胎兒的途徑： 交配時感染病毒的持續(xù)感染 通過白血球傳送病毒（病毒血癥時間短，很難檢測到）,通過神經(jīng)節(jié)傳播，很難防控 病毒在初感染部位的鼻粘膜，咽喉頭粘膜，扁桃繁殖，其次在其附近的淋巴結(jié)繁殖。 在上部呼吸道繁殖的病毒借助三叉神經(jīng)，嗅覺神經(jīng)，舌咽神經(jīng)到達(dá)中樞神經(jīng)，引起腦炎。 增殖的病毒如果到達(dá)肺部，在肺部迅速繁殖，引起肺炎。,少量的病毒即可感染 大量排毒 潛伏感染 隱性感染,3、病毒在豬體內(nèi)的特征：,接種病毒量和感染成立（島田，2006）

4、,偽狂犬病毒的最低感染劑量只有豬藍(lán)耳的1/30,注：任何疾病都有感染的最小劑量，低于最小劑量后豬不會感染，更不會發(fā)??；,仔豬感染后短時間內(nèi)會呈百萬倍地排毒,PRV接種后病毒分離陽性率及病毒排泄量（島田，2006）,感染3-5天的口腔試子和鼻腔試子排毒量4.0-8.0Log10TCID50，感染8-17天的口腔試子排毒量5.9-8.3Log10TCID50，感染18-25天的口腔試子排毒量6.0Log10TCID50，高峰時空氣中的病毒量為5.3Log10TCID50 按照極致計算，一頭豬感染后的3-5天的排毒量可以感染100萬頭生豬,被感染豬不表現(xiàn)臨床癥狀，病毒粒子本身檢測不到，但感染豬終生帶

5、毒。 病毒的遺傳子潛伏在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)免疫低下時，遺傳子再活性化引起在感染。 被感染豬表現(xiàn)亞臨床癥狀，這種帶毒豬可持續(xù)一年以上排毒。 潛伏感染豬和隱性感染豬成為污染源,PRV的侵入途徑-種豬引進(jìn)和育肥豬散毒是已知的主要傳染源,（美國農(nóng)務(wù)省的調(diào)查結(jié)果）,一點式飼養(yǎng)散毒風(fēng)險大,偽狂犬陰性場引進(jìn)后備必須經(jīng)過檢測確定為偽狂犬陰性!,綜上所述，大多數(shù)豬場都存在偽狂犬發(fā)病的風(fēng)險；中小規(guī)模豬場的風(fēng)險尤為突出；,小結(jié),偽狂犬病毒感染劑量低，中間宿主多，豬感染后排毒量巨大，進(jìn)入豬場途徑多，豬場內(nèi)傳播快，公豬傳播途徑容易被忽視；,變異株的流行導(dǎo)致發(fā)病率持續(xù)上升,2011年以前，由于疫苗普遍接種（很多豬場仔豬只做一

6、針的情況下）臨床典型病例已較少； 配合鑒別診斷技術(shù)，很多豬場實現(xiàn)了偽狂犬轉(zhuǎn)陰或者凈化；,變異株的流行導(dǎo)致發(fā)病率持續(xù)上升,自2011年底自北向南豬場陸續(xù)出現(xiàn)偽狂犬；經(jīng)過鑒定不同省份分離的毒株都是高度同源的變異株；,2011年底最初發(fā)生的省份,至2015年偽狂犬變異株的分布,PRV HeN1和S株 對小鼠的LD50測定,PRV HeN1和SC株Vero細(xì)胞培養(yǎng)液的毒價測定分別為107.6 TCID50/0.1mL; 106.8TCID50/0.1mL。 將原液稀釋為106.0、105.0、104.0、103.0、102.0、101.0TCID50/0.1mL； 30只5周齡BALB/c小鼠，隨機分

7、為6組，每組5只，皮下注射各稀釋度病毒0.1mL； 逐日觀察小鼠癥狀及死亡情況。 PRV- HeN1 株對小鼠的LD50經(jīng)計算為102.4TCID50/只。 PRV-SC株 對小鼠的LD50經(jīng)計算為103.8TCID50 /只。,變異株偽狂犬的致病力更強，致死劑量為國家校檢毒株SC株的1/30,Tong , et al., Vet. Microbiol. 181 (2015) 236240 .,變異株對仔豬的致死率更高,注： 1、實驗設(shè)計、免疫劑量和攻毒劑量均參照Bartha K61疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)； 2、綿羊?qū)慰袢腥臼侵滤佬缘?3、免疫是單針肌注免疫,現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的疫苗對變異株(HeN1)的

8、攻毒保護(hù)效果欠佳,2014年7月-2015年的檢測數(shù)據(jù)統(tǒng)計,2016年檢測數(shù)據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù),偽狂犬變異株的臨床癥狀變化,初次感染場特別是野毒抗體陰性場，損失慘重。 母豬以流產(chǎn)、死胎木乃伊胎為主； 仔豬出生后3-5天神經(jīng)癥狀，腹瀉、嘔吐，死亡率100%； 偽狂犬野毒抗體呈陰性豬場，迅速轉(zhuǎn)陽，一個月內(nèi)gE抗體陽率超過50%。 感染后1年產(chǎn)房逐漸平穩(wěn)（但持續(xù)感染的影響在繼續(xù)） 神經(jīng)癥狀比例減少，腹瀉比例增高； 保育及育肥豬干咳及繼發(fā)感染嚴(yán)重；,長期免疫抑制or傳胸混感？,可致死大量育肥中后期豬 母豬屢配不孕，返情率高 產(chǎn)房仔豬頑固持續(xù)性腹瀉 豬群精神抑郁具有攻擊性,規(guī)?；瘓龊椭行∫?guī)模的豬場表現(xiàn)的問題不同

9、,規(guī)?；瘓鼍哂休^強的處置能力與診斷能力 反復(fù)加強免疫 種豬4次/年，仔豬3次/年 加大劑量免疫 種豬3頭份/次，仔豬2頭份/次 實際效果： 注射時應(yīng)激大，多次注射，操作麻煩； 可控制臨床主要癥狀（如流產(chǎn)及仔豬神經(jīng)癥狀等），但偶有干咳、腹瀉等癥狀 120-150日齡豬群轉(zhuǎn)陽率高居不下。,中小規(guī)模場主要問題誤診為其他疾病,呼吸道癥狀和繁殖障礙（母豬流產(chǎn)、返情）容易誤認(rèn)為是藍(lán)耳和圓環(huán),偽狂犬引起的腹瀉與PEDV癥狀相近，容易被經(jīng)驗所蒙蔽,檢測中心二月份采集很多疑似PEDV的病料，最終檢測結(jié)果為偽狂犬引起的腹瀉,近年來偽狂犬發(fā)病率高，帶毒率高，已成為危害我國生豬養(yǎng)殖的最重大疫病之一； 偽狂犬病在呼吸道

10、、消化道、繁殖障礙類疾病中的病原檢出率較高，部分癥狀與藍(lán)耳和PEDV類似； 偽狂犬變異株發(fā)病重要的特點： 必然的幾個階段：流產(chǎn)-木乃伊和神經(jīng)癥狀-頑固性腹瀉和育肥干咳-長期感染散毒導(dǎo)致育肥期豬群的死亡； 感染后的豬場呈亞臨床發(fā)病，主要問題是仔豬頑固性腹瀉和保育及育肥豬干咳。,小結(jié),三、如何利用實驗室檢測防控偽狂犬,常用的偽狂犬檢測方法： ELISA：gB抗體，gE抗體 中和抗體檢測 病原檢測：普通PCR與熒光定量PCR 病理切片,三、如何利用實驗室檢測防控偽狂犬,偽狂犬疫苗是少有的可通過抗體檢測區(qū)分野毒和疫苗毒的疫苗,目前大多數(shù)偽狂犬疫苗是缺失gE基因的，因此疫苗免疫不會產(chǎn)生針對gE基因的抗體

11、，因此可以通過鑒別診斷技術(shù)確定豬場的感染情況。 那么檢出野毒抗體意味著什么？是不是豬群在發(fā)病或者仔豬感染？,野毒抗體檢測的誤區(qū),陽性豬場檢母豬的抗體 偽狂犬一旦感染終生帶毒，野毒抗體持續(xù)為陽性母豬，不可能通過免疫將野毒陽性的母豬轉(zhuǎn)陰，更不能因為母豬野毒抗體是陽性就判斷豬場有問題； 陽性場90日齡之前的仔豬判斷為偽狂犬感染 偽狂犬的母源抗體持續(xù)期長，母豬野毒抗體陽性仔豬必為陽性，但不能確診為野毒感染；,野毒抗體檢測的應(yīng)用范圍,接種PRV HeN1后，第5天部分豬PRV gE抗體開始陽轉(zhuǎn)，第7天全部陽轉(zhuǎn)。 豬場檢測PRV野毒是否正在流行應(yīng)以檢測后備豬(14-18周)gE抗體為主，超過15%為正在流

12、行。 陽性的母豬可產(chǎn)出陰性的后備，通過這一指標(biāo)可評價疫苗的保護(hù)效果,陽性場,野毒抗體檢測的應(yīng)用范圍,野毒陰性場可用于監(jiān)測 新引進(jìn)種豬：凡陽性必淘汰，剩余公豬可反復(fù)間隔2周檢測，均為陰性可用； 仔豬按日齡采血，確定豬場的感染階段，采取針對性措施；,普通PCR和熒光定量PCR 樣品：扁桃體（持續(xù)帶毒），肺臟（呼吸道癥狀），腦組織（神經(jīng)癥狀），鼻腔試子（育肥期檢測），精液（如血清抗體gE陽性，必檢） 感染壓力評估時用熒光定量PCR 誤區(qū)： 偽狂犬的病毒血癥期極短，血清樣本往往檢測不到病原； 公豬精液的病原檢測容易被忽視 病原檢測是測序的基礎(chǔ),病原檢測的誤區(qū)及應(yīng)用范圍,四、偽狂犬疫苗的作用及正確應(yīng)用,

13、1、偽狂犬病疫苗可有效保護(hù)強毒的攻擊而免于臨床發(fā)病。 2、弱毒疫苗的保護(hù)效果比滅活苗好且免疫持續(xù)期長 3、偽狂犬活苗注射免疫會受到母源抗體的干擾，滴鼻免疫是有效的免疫途徑（1）不受母源抗體干擾；（2）建立黏膜免疫阻止病原經(jīng)過呼吸道傳播途徑； 4、偽狂犬的母源抗體持續(xù)期特別長，在感染壓力比較大的場，為盡早肌注免疫，建議在妊娠中后期母豬不要免疫偽狂犬疫苗； 5、偽狂犬是少有的幾個可以做緊急免疫的疫苗，斷奶后仔豬出現(xiàn)偽狂犬引起的干咳及腹瀉癥狀或瘙癢癥狀，緊急注射偽狂犬可有效縮短病程和發(fā)病率； 6、對育肥豬注射偽狂犬疫苗，特別是一點式豬場；,五、偽狂犬“五步轉(zhuǎn)陰”法,偽狂犬溫和凈化的關(guān)鍵點,1、疫苗株要能有效壓制散毒-不擴大感染壓力 2、快速產(chǎn)生主動保護(hù)-通過佐劑縮短空窗期 3、陽性母豬可產(chǎn)陰性后備-陰性后備補充 4、控制公豬精液傳播-預(yù)防再次感染母豬群 5、按照產(chǎn)次自然淘汰-逐漸降低豬群的風(fēng)險 6、生物安全滅鼠工作-保衛(wèi)凈化成果 7、配套的檢測方法-評估豬場感染壓力,感染壓力分析,保證后備的陰性,陽性母豬隨產(chǎn)次自然淘汰,定期抗體監(jiān)測,1,2,3,4,5,偽狂犬“五步轉(zhuǎn)陰”步驟,活躍度評估,壓制散毒,后備凈化期,穩(wěn)定自然淘汰期,驗收監(jiān)測期,公豬淘汰及疫苗壓制（包括育肥