江蘇省儀征市儀征中學(xué)2023-2024學(xué)年高二下學(xué)期5月初月考生物試卷（有答案）VIP

江蘇省儀征市儀征中學(xué)2023-2024學(xué)年高二下學(xué)期5月初月考生物試題一、單選題1．SREBP前體由S蛋白協(xié)助從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體，經(jīng)酶切后產(chǎn)生具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的結(jié)構(gòu)域，隨后轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核激活膽固醇合成相關(guān)基因的表達(dá)。白樺醋醇能特異性結(jié)合S蛋白并抑制其活化。下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．膽固醇不溶于水，在人體內(nèi)參與血液中脂質(zhì)的運(yùn)輸B．SREBP前體常以囊泡形式從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)到高爾基體加工C．S蛋白可以調(diào)節(jié)膽固醇合成酶基因在細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄D．白樺醋醇能抑制膽固醇合成并降低血液中膽固醇含量2．下列關(guān)于組成細(xì)胞化合物的敘述正確的是（

）A．tRNA和rRNA都屬于核酸，都參與蛋白質(zhì)的合成B．纖維素和幾丁質(zhì)都屬于多糖，都是細(xì)胞內(nèi)的能源物質(zhì)C．醛固酮和抗利尿激素都屬于脂質(zhì)，都能調(diào)節(jié)水鹽平衡D．血紅蛋白、呼吸酶都屬于蛋白質(zhì)，都直接參與O2的運(yùn)輸3．如圖表示高等植物分泌蛋白質(zhì)的幾種途徑，其中途徑1是經(jīng)典分泌途徑，其余是非經(jīng)典分泌途徑。相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．參與途徑1的細(xì)胞結(jié)構(gòu)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等B．途徑2、3分泌的蛋白質(zhì)包含內(nèi)源蛋白質(zhì)和外源蛋白質(zhì)C．途徑4中雙層膜分泌泡的兩層膜都來自內(nèi)質(zhì)網(wǎng)D．途徑5通過胞吐分泌蛋白質(zhì)，體現(xiàn)了膜的流動性4．下列關(guān)于胚胎工程和細(xì)胞工程的敘述，錯誤的是（

）A．動物細(xì)胞培養(yǎng)和早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)液中通常需要添加血清等物質(zhì)B．植物細(xì)胞培養(yǎng)的目的主要是獲得植物生長和生存所必需的次生代謝產(chǎn)物C．胚胎工程可用于稀有動物的種族延續(xù)和培育生物制藥的反應(yīng)器D．誘導(dǎo)人成纖維細(xì)胞重編程為肝細(xì)胞的成果表明，已分化細(xì)胞的狀態(tài)是可以改變的5．圖1表示神經(jīng)纖維在靜息和興奮狀態(tài)下K+跨膜運(yùn)輸過程，甲、乙為細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。圖2表示興奮在神經(jīng)纖維上傳導(dǎo)過程。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．圖1中M側(cè)為神經(jīng)細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，N側(cè)為神經(jīng)細(xì)胞膜的外側(cè)B．圖2中②處Na+通道開放以形成動作電位，④處K+通道開放以恢復(fù)靜息電位C．若將神經(jīng)纖維放于較高濃度海水中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，圖2中③處值將會變大D．圖2中⑤代表靜息電位重新恢復(fù)，此時對應(yīng)圖1中K+濃度M側(cè)高于N側(cè)6．原發(fā)性醛固酮增多癥（PA）是繼發(fā)性高血壓的常見原因。PA患者糖尿病發(fā)病風(fēng)險較原發(fā)性高血壓患者增加。下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．采用醛固酮拮抗劑治療可適度緩解PA病情B．PA病因可能是基因突變使醛固酮合成酶表達(dá)增加C．PA患者出現(xiàn)醛固酮分泌增多的原因是細(xì)胞外液滲透壓增加D．高醛固酮水平會影響胰島B細(xì)胞功能和組織細(xì)胞對胰島素的敏感性7．生命系統(tǒng)的不同層次都存在著“抑制”現(xiàn)象。下列有關(guān)抑制的敘述正確的是（）A．低溫抑制紡錘體的形成可使細(xì)胞停留在分裂前期B．資源有限條件下，種內(nèi)競爭加劇會抑制種群增長C．生長素在超過最適濃度后，其抑制生長作用增強(qiáng)D．鑒別培養(yǎng)基可抑制或阻止其他種類微生物的生長8．寒冷、緊張時機(jī)體會出現(xiàn)如下圖所示的一系列神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)，相關(guān)敘述正確的是（

）A．神經(jīng)沖動以局部電流的形式直接作用于下丘腦中的調(diào)節(jié)中樞B．激素①②③的效應(yīng)只有及時終止才能產(chǎn)生精確的調(diào)節(jié)功能C．作為免疫活性物質(zhì)的細(xì)胞因子和抗體均能與抗原特異性結(jié)合D．長期過度緊張會強(qiáng)化機(jī)體的反饋調(diào)節(jié)能力進(jìn)而使免疫力提升9．下面為四種中樞神經(jīng)元的連接方式示意圖，有關(guān)連接方式的敘述，錯誤的是（

）A．單線式保證了反射活動的高度精確性B．環(huán)路式實(shí)現(xiàn)了機(jī)體中興奮的延長傳遞C．會聚式實(shí)現(xiàn)了神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)沖動的整合D．分散式利于擴(kuò)大神經(jīng)系統(tǒng)的活動范圍10．曲妥珠單抗是抗人表皮生長因子受體（HER2）的單克隆抗體，能競爭性阻止人表皮生長因子與HER2結(jié)合，進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞生長。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．乳腺癌細(xì)胞具有無限增殖的能力，因此體外培養(yǎng)癌細(xì)胞時只需提供血清B．曲妥珠單抗制備時至少需要2次篩選，第2次篩選常用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行C．曲妥珠單抗本身不具備治療乳腺癌的作用，只有攜帶抗癌藥物才起作用D．乳腺癌細(xì)胞中人表皮生長因子受體基因的表達(dá)量一般比正常乳腺細(xì)胞高11．科研人員試圖從土壤中篩選出能高效降解幾丁質(zhì)的菌株，通過微生物培養(yǎng)獲得幾丁質(zhì)酶，用于生物防治。下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．土壤樣品應(yīng)加到以幾丁質(zhì)為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)B．目的菌的純化和計(jì)數(shù)可以使用平板劃線法或稀釋涂布平板法C．可依據(jù)單菌落周圍“水解圈直徑/菌落直徑”的值來篩選目的菌株D．獲得的幾丁質(zhì)酶可用于防治某些有害的甲殼類動物、昆蟲等生物12．某同學(xué)制作果酒果醋的步驟如下：①將發(fā)酵瓶等清洗干凈后用酒精消毒；②清洗葡萄并榨汁裝入發(fā)酵瓶；③將溫度控制在18~30℃發(fā)酵12d；④打開瓶蓋，蓋上一層紗布再發(fā)酵8d。下列說法錯誤的是（

）A．①可殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子B．②葡萄需先用清水沖洗后去枝梗，避免雜菌污染C．③每隔一段時間擰松瓶蓋一次，及時放氣D．④需要調(diào)高溫度至30~35℃，該過程幾乎不產(chǎn)生氣體13．6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G-6PD）有F和S兩種類型，分別由一對等位基因XF和XS編碼。基因型為XFXS的女性體細(xì)胞中的兩個X染色體，會有一個隨機(jī)失活，且這個細(xì)胞的后代相應(yīng)的X染色體均會發(fā)生同樣的變化。將基因型為XFXS的女性皮膚組織用胰蛋白酶處理后先進(jìn)行細(xì)胞的原代培養(yǎng)，再對不同的單細(xì)胞分別進(jìn)行單克隆培養(yǎng)。分別對原代培養(yǎng)和單克隆培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行G-6PD蛋白電泳檢測，結(jié)果如圖。有關(guān)敘述錯誤的是（

）A．該過程用到的細(xì)胞工程技術(shù)主要是動物細(xì)胞培養(yǎng)B．用胰蛋白酶處理皮膚組織可使其分散成單個細(xì)胞C．原代培養(yǎng)細(xì)胞電泳圖有2個條帶是因?yàn)橥瑫r檢測了多個細(xì)胞D．單克隆培養(yǎng)的細(xì)胞1、2、4、5、8、9與3、6、7所含基因不同14．“標(biāo)記”是生物技術(shù)與工程常用的技術(shù)手段，下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合時，通過紅綠熒光蛋白標(biāo)記檢測細(xì)胞融合情況B．分析工程酵母發(fā)酵產(chǎn)物的合成及分泌時，通過同位素標(biāo)記監(jiān)測產(chǎn)物轉(zhuǎn)移路徑C．驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否成功時，通過RNA分子標(biāo)記檢測目的基因是否表達(dá)D．對目的基因進(jìn)行擴(kuò)增時，通過熒光標(biāo)記技術(shù)實(shí)時定量測定產(chǎn)物的量二、多選題15．下圖為生物體內(nèi)“泵”的3種類型，相關(guān)敘述錯誤的是（

）

A．P型質(zhì)子泵中的Ca2+泵磷酸化后運(yùn)輸Ca2+時構(gòu)象不改變B．神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)高Na+低K+的環(huán)境依靠P型泵來維持C．溶酶體膜上存在的V型質(zhì)子泵將H+運(yùn)入溶酶體D．F型質(zhì)子泵廣泛分布于線粒體內(nèi)膜和類囊體薄膜上16．重癥肌無力是自身免疫病，致病機(jī)理如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的有（

）A．細(xì)胞a、b、c均起源于造血干細(xì)胞，細(xì)胞b發(fā)育成熟的主要場所是胸腺B．細(xì)胞b、c、d、e表面形成了特異性抗原受體，識別相同抗原的受體相同C．圖中起抗原呈遞作用的是細(xì)胞a，能分泌免疫活性物質(zhì)的有細(xì)胞a、b、d等D．引起重癥肌無力自身免疫的抗原可能是乙酰膽堿受體或肌肉細(xì)胞膜蛋白17．研究小組采用預(yù)加菌液法探究氮芐青霉素（Amp）和卡那霉素（Kan）對大腸桿菌的選擇作用，即將菌液直接加入培養(yǎng)基中，搖勻倒平板，冷卻后在相應(yīng)區(qū)域放置圓形濾紙片，一段時間后測量抑菌圈直徑，I、Ⅱ、Ⅲ代篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖所示。下列相關(guān)敘述正確的有（

）A．為防止培養(yǎng)基凝固，加入菌液時培養(yǎng)基溫度不得低于65℃B．抑菌圈內(nèi)有兩個菌落，可能是具有抗藥性的大腸桿菌或其他雜菌形成的C．Kan較Amp對大腸桿菌的抑菌效果強(qiáng)，且隨培養(yǎng)代數(shù)增多兩者抑菌效果減弱D．一定濃度的抗生素會誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的變異，故使用抗生素時需適量18．下列關(guān)于哺乳動物胚胎工程和細(xì)胞工程的敘述，正確的是（

）A．細(xì)胞培養(yǎng)和早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)液中通常需要添加血清等物質(zhì)B．胚胎移植前細(xì)胞和囊胚的培養(yǎng)都要放在充滿CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行C．移植后胚胎的發(fā)育受母體激素影響，也影響母體激素分泌D．胚胎干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞功能不同，是因?yàn)楸磉_(dá)的基因都不同19．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（

）A．若某基因是從人的細(xì)胞內(nèi)提取mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的，則該基因中不含啟動子序列B．?dāng)U增目的基因時，利用耐高溫的DNA連接酶從引物a、b的3'-端進(jìn)行子鏈合成C．導(dǎo)入人血清白蛋白基因的綿羊受體細(xì)胞是乳腺細(xì)胞D．利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將含有目的基因的重組質(zhì)粒整合到植物受體細(xì)胞的染色體DNA上三、解答題20．過量飲食等不健康生活習(xí)慣往往會引起肥胖。在哺乳類動物下丘腦的結(jié)節(jié)區(qū)存在著與攝食活動反應(yīng)有關(guān)的食欲中樞，其中LHA為攝食中樞，起著決定發(fā)動攝食活動的作用，VMH為飽食中樞，起著決定停止進(jìn)食活動的作用。(1)圖1為下丘腦結(jié)節(jié)區(qū)橫切面，若內(nèi)側(cè)（ⅠOP）損傷，會引起動物多食肥胖，若外側(cè)（ⅡOP）損傷，會引起動物厭食，則可以判斷內(nèi)側(cè)（ⅠOP）為中樞，若動物血糖較高，會抑制中樞興奮。(2)嗅覺傳入重要的食物信號，會引起中樞興奮，并刺激胃壁分泌腺分泌胃酸。電刺激下丘腦前部，引起胃酸分泌的迅速增加，切斷迷走神經(jīng)以后，這種反應(yīng)消失（圖2）；電刺激下丘腦后部，引起胃酸分泌緩慢地增加，摘除雙側(cè)腎上腺皮質(zhì)而消失（圖3）。據(jù)上述分析可知圖2路徑引起胃酸分泌可能為神經(jīng)調(diào)節(jié)，理由，圖中迷走神經(jīng)為（傳入/傳出）神經(jīng)。圖3路徑調(diào)節(jié)方式為調(diào)節(jié)。具體路徑為：刺激—下丘腦——胃壁分泌腺（用“—”“器官或組織”填寫）。(3)某團(tuán)隊(duì)研究針刺穴位對肥胖者下丘腦食欲中樞的影響。選取大鼠50只，用高脂飼料喂養(yǎng)3個月，養(yǎng)成肥胖鼠，然后將肥胖鼠隨機(jī)分為針刺治療組、肥胖對照組，另設(shè)一組以普通飼料喂養(yǎng)的大鼠作為正常對照組。分組后實(shí)驗(yàn)過程中，三組大鼠轉(zhuǎn)喂普通飼料，正常飲食。針刺組針刺大鼠“后三里”“內(nèi)庭”兩穴，然后連續(xù)電刺激5min，12天為一療程，肥胖對照組和正常對照組不做針刺處理。相關(guān)數(shù)據(jù)見下表：三組大鼠針刺前后體重變化（g）和攝食中樞（LHA）、飽食中樞（VMH）放電頻率（Hz）分組數(shù)量針刺前（g）針刺后（g）LHA（Hz）VMH（Hz）針刺組13只469.7±11.1411.0±18.29.4±3.721.1±4.3肥胖組13只470.1±8.8481.8±18.021.4±6.85.0±1.3正常組11只398.0±15.7410.4±16.29.1±5.214.5±2.2分析上表數(shù)據(jù)，針刺治療（能/否）降低體重，試著分析具體原因。(4)從上表中可以看出，肥胖組在實(shí)驗(yàn)過程中改喂食普通飼料，大鼠體重仍然繼續(xù)增加，說明高脂飼料激起強(qiáng)烈食欲，中樞興奮性占優(yōu)勢，即使非饑餓狀態(tài)仍有過量取食行為，由此可以判斷出攝食中樞和飽食中樞興奮性往往呈（正/負(fù)）相關(guān)。21．膽固醇O?；D(zhuǎn)移酶1(SOAT1)與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)，可作為潛在的肝癌生物標(biāo)志物?？蒲腥藛T從肝癌細(xì)胞Huh7中獲取SOAT1基因，經(jīng)原核表達(dá)、蛋白質(zhì)純化后免疫小鼠制備單克隆抗體。請回答下列相關(guān)問題：(1)從肝癌細(xì)胞Huh7中提取，通過獲得SOAT1的cDNA。(2)根據(jù)SOAT1的編碼序列設(shè)計(jì)的兩個引物如下圖1。引物F加入的EcoRⅠ酶切位點(diǎn)位于端，引物R上添加的XhoⅠ酶識別的回文序列的6個堿基是。(3)利用上述引物對SOAT1基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的擴(kuò)增程序中熱循環(huán)次數(shù)為30次，一般PCR反應(yīng)中設(shè)計(jì)的熱循環(huán)次數(shù)不超過40次，原因是。PCR反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠后，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行膠回收。(4)將膠回收后的PCR產(chǎn)物和載體pET32a分別用EcoRⅠ和XhoⅠ雙酶切，加入DNA連接酶后在冰面上過夜。在冰面上操作的目的是。在將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌前用CaCl2處理大腸桿菌，使其處于的生理狀態(tài)，以提高轉(zhuǎn)化效率。(5)將測序正確的重組載體誘導(dǎo)表達(dá)并進(jìn)行電泳，實(shí)驗(yàn)部分結(jié)果見下圖2，SOAT1重組蛋白的相對分子質(zhì)量為50kD左右，下圖中基本符合要求的條帶包括。(6)用純化的SOAT1重組蛋白免疫小鼠，利用技術(shù)獲得SOAT1單克隆抗體細(xì)胞株以制備單克隆抗體。22．葉用萵苣（如生菜）是大眾喜愛蔬菜，夏季高溫極易引起先期抽苔造成減產(chǎn)，泛素連接酶（LsE3）是研究人員在萵苣高溫抽苔植株中篩選得到的。LsE3基因受溫度調(diào)控，影響萵苣抽苔，但是LsE3基因作用機(jī)制尚不清楚。研究人員用無縫克隆技術(shù)構(gòu)建萵苣LsE3基因的表達(dá)載體用于研究其分子機(jī)理。無縫克隆技術(shù)是構(gòu)建表達(dá)載體的一種技術(shù)如圖2。

(1)目的基因獲取，在條件下，提取先期抽苔萵苣細(xì)胞中，經(jīng)獲得cDNA，再以cDNA為模板，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增LsE3基因。PCR擴(kuò)增除了圖1標(biāo)出的物質(zhì)以外，還需加入（至少寫兩種）。LsE3基因兩端序列如圖1所示，PCR中需要兩種引物F（左側(cè)）、R（右側(cè)）選用（選項(xiàng)中為引物部分序列，方向?yàn)?'→3'）。A．GATTAG------TGTTGGB．CCAACA------CTAATCC．TAGGTG------AGACCTD．AGGTCT------CACCTA(2)表達(dá)載體構(gòu)建，近年來新一代無縫克隆技術(shù)發(fā)展迅猛，基于T4DNA聚合酶和T5核酸外切酶成為目前研究的熱點(diǎn)。早在1990年，Aslanidis等便提出基于T4DNA聚合酶(LIC)技術(shù)（如圖2）。T4DNA聚合酶在反應(yīng)體系中沒有添加dNTP情況下具有3'→5'外切酶活性；在反應(yīng)體系中添加dNTP情況下具有5'→3'聚合酶活性；在反應(yīng)體系中僅添加某種特定的dNTP原料（如dATP），T4DNA聚合酶也具有3'→5'外切酶活性，且外切到dATP時，外切酶活性和聚合酶活性同時發(fā)揮作用，從而競爭性終止反應(yīng)，產(chǎn)生指定長度的單鏈黏性末端。請結(jié)合圖1和圖2回答下列問題：①LIC技術(shù)構(gòu)建表達(dá)載體，圖1中利用PCR擴(kuò)增LsE3基因，反應(yīng)液中加入T4DNA聚合酶和處理。用EcoRⅤ酶（GAT↓ATC）切割圖1所示質(zhì)粒獲得末端，后加T4DNA聚合酶和處理質(zhì)粒。處理后將兩者混合、退火并導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)完成重組克隆。②LIC技術(shù)依賴特定同源序列，2007年Li等建立了不依賴特定序列的克隆(SLIC)技術(shù)，后經(jīng)過多次改進(jìn)，Qi等建立了RQ-SLIC技術(shù)，用EcoRⅤ酶切割質(zhì)粒后與LsE3基因混合，加入T4DNA聚合酶處理適當(dāng)時間，將混合物加熱到72℃，目的是，緩慢降溫（退火）后移入細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化修復(fù)形成完整重組質(zhì)粒，細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化修復(fù)過程中用到酶。(3)導(dǎo)入受體細(xì)胞，取葉用萵苣幼芽經(jīng)（過程）形成愈傷組織備用，用處理農(nóng)桿菌后導(dǎo)入重組質(zhì)粒，再感染葉用萵苣愈傷組織，將感染后的愈傷組織置于加入植物組織培養(yǎng)基中培養(yǎng)，篩選出成功導(dǎo)入質(zhì)粒的植物細(xì)胞。23．全球每年約200萬人需要器官移植，而器官捐獻(xiàn)數(shù)量遠(yuǎn)低于需求。因此，來源于豬等動物的異種器官被視作人類供體器官短缺的希望。相比同種器官，異種器官移植面臨受體對植入器官更嚴(yán)重的免疫排斥等難題。通過基因敲除手段獲得基因敲除豬，可獲得消除或減弱排斥反應(yīng)的適合人體移植的豬器官，如圖1。基因敲除是指通過一定的途徑使機(jī)體特定的基因失活或缺失的技術(shù)，主要利用DNA同源重組原理，用設(shè)計(jì)的同源片段(兩端序列與靶基因相同或相近)替代靶基因片段，從而使目的基因功能喪失，如圖2，該技術(shù)的缺點(diǎn)是重組載體也會隨機(jī)插入基因組的其他序列，而達(dá)不到目的。注：neo基因(新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因)，能催化將ATP的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到新霉素的特定羥基，從而抑制新霉素與核糖體結(jié)合，保持核糖體的活性；HSV-tk基因(單純皰疹病毒胸腺嘧啶激酶基因)，表達(dá)產(chǎn)生的胸苷激酶蛋白(TK)可使無毒的丙氧鳥苷轉(zhuǎn)變?yōu)橛卸拘院塑账岫鴼⑺兰?xì)胞。(1)運(yùn)用基因同源重組進(jìn)行基因敲除：①胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)的獲得：基因敲除細(xì)胞一般采用ES細(xì)胞，ES細(xì)胞培養(yǎng)在中，該儀器內(nèi)部提供恒定的5%的CO?濃度，調(diào)節(jié)pH的相對穩(wěn)定。培養(yǎng)過程中ES細(xì)胞(填“會”或“不會”)出現(xiàn)接觸抑制。②重組載體的構(gòu)建：把具有與細(xì)胞內(nèi)靶基因同源序列的DNA分子重組到帶有標(biāo)記基因的載體上，使之成為重組載體，該過程需要利用酶。常用的標(biāo)記基因有neo基因和HSVtk基因，前者位于同源序列內(nèi)部，后者位于同源序列外部。重組載體可通過PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，將加入反應(yīng)成分的離心管放入PCR儀前，需進(jìn)行操作，使反應(yīng)液集中于離心管底部。③同源重組：常采用法將重組載體導(dǎo)入ES細(xì)胞，使重組載體與ES細(xì)胞基因組中相應(yīng)部分發(fā)生同源重組，從而敲除靶基因。④篩選已表達(dá)的細(xì)胞：由于同源重組的概率極低，常利用正負(fù)篩選法(PNS法，即利用neo基因和HSV-tk基因)，需要在培養(yǎng)基中加入，存活的細(xì)胞就是基因敲除的ES細(xì)胞。基因敲除的ES細(xì)胞可通過法進(jìn)一步判斷目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)，若結(jié)果為陰性，說明ES細(xì)胞基因敲除成功。(2)通過核移植獲得基因敲除豬：①核移植需要借助精密的和高效的細(xì)胞融合法，核移植前，基因敲除的ES細(xì)胞需要進(jìn)行培養(yǎng)，以提高核移植的成功率。選擇胚胎細(xì)胞而不是體細(xì)胞進(jìn)行核移植的原因是。②圖1過程五利用胚胎工程中的技術(shù)，這一期間必須配制一系列含有不同成分的培養(yǎng)液，以滿足不同發(fā)育時期生理代謝的需求；過程六需對代孕豬進(jìn)行處理，使胚胎能正常著床并發(fā)育。(3)異種器官移植除了嚴(yán)重的免疫排斥外，可能還有(寫出1點(diǎn))等難題需要解決。四、實(shí)驗(yàn)題24．惡性腫瘤往往先向淋巴結(jié)初始轉(zhuǎn)移形成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤，再經(jīng)淋巴結(jié)實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移?？茖W(xué)家開展實(shí)驗(yàn)探索腫瘤初始轉(zhuǎn)移的機(jī)制以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的影響。(1)正常情況下，原位瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)會激活NK細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞，前者非特異性殺傷瘤細(xì)胞，后者則在輔助T細(xì)胞分泌的的作用下，經(jīng)過程產(chǎn)生新的細(xì)胞毒性T細(xì)胞裂解瘤細(xì)胞。(2)將原位瘤細(xì)胞FO和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的瘤細(xì)胞LN6等量接種于同一健康小鼠體內(nèi)進(jìn)行研究，過程如圖1。①已知FO和LN6的增殖能力無顯著差異，圖1結(jié)果說明向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的能力更強(qiáng)。②為排除紅綠熒光蛋白可能存在的檢測差異干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需增設(shè)一組實(shí)驗(yàn)，大致思路為。(3)為探究原位瘤細(xì)胞初始轉(zhuǎn)移的機(jī)制，科研人員又開展了如下實(shí)驗(yàn)：①將FO中編碼MHC-1分子關(guān)鍵蛋白的基因敲除，再將其接種于小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)其向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的能力降低，但去除該小鼠的NK細(xì)胞后其轉(zhuǎn)移能力恢復(fù)。說明NK細(xì)胞通過識別（高表達(dá)/低表達(dá)）的MHC-1殺傷瘤細(xì)胞。②PD-L1可與T細(xì)胞表面的特定蛋白結(jié)合，抑制其殺傷作用。進(jìn)一步研究表明原位瘤細(xì)胞通過調(diào)節(jié)MHC-1分子和PD-L1的表達(dá)量，抑制NK和T細(xì)胞的殺傷作用，以增強(qiáng)轉(zhuǎn)移能力。請?jiān)诒砀裰刑顚憽案摺被颉暗汀?，將支持上述結(jié)論的實(shí)驗(yàn)結(jié)果補(bǔ)充完整。腫瘤細(xì)胞的類型MHC-1分子表達(dá)量PD-L1分子表達(dá)量來自于正常小鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤來自于T細(xì)胞缺失小鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤低來自于T和NK細(xì)胞缺失小鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)