編制說明-糧油檢驗 油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定 熒光定量快速檢測法

《糧油檢驗油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定

熒光定量快速檢測法》編制說明

1．工作簡況（包括任務來源、協(xié)作單位、主要工作過程、標準主要起草人

及其所做的工作等）

1.1任務來源（包括標準下達計劃、標準計劃項目調(diào)整、標準制修訂的背景、

必要性和重要意義等）

1.1.1標準下達計劃（包括標準下達計劃文件、標準名稱、第一起草單位等）

糧食行業(yè)標準《糧油檢驗油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定熒光定量快速

檢測法》的任務來源是國糧辦發(fā)〔2020〕403號行業(yè)標準制修訂計劃。標準第一

起草單位是河南工業(yè)大學。

1.1.2標準計劃項目調(diào)整（如有，請寫明申請調(diào)整的具體內(nèi)容、理由和依據(jù)

等）

無。

1.1.3標準制修訂的背景、必要性和重要意義

黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉等在生長繁殖過程中產(chǎn)生的次生有毒代謝

產(chǎn)物，是雙呋喃環(huán)類毒素，其衍生物有約20種，主要是B1、B2、G1、G2、M1、

M2等。黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織癌癥研究機構劃定為一類天然存在的致癌物，

其中以B1的毒性最大，致癌性最強。糧食和植物油料均會受到黃曲霉毒素的污

染，尤其是花生和玉米更容易被污染。在花生油和玉米油的生產(chǎn)中，原料花生仁

和玉米胚中的黃曲霉毒素會轉移至花生油、玉米油和花生餅粕、玉米餅粕中，對

食用油脂和飼料餅粕的質(zhì)量安全造成威脅。GB2761-2017《食品安全國家標準食

品中真菌毒素限量》中對花生和玉米胚及其油脂中AFB1做出≤20μg/kg限量要

求。

GB5009.22-2016《食品安全國家標準食品中黃曲霉毒素B族和G族的測

定》中列出了5種檢測方法，即第一法同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，第二

法高效液相色譜-柱前衍生法，第三法高效液相色譜-柱后衍生法，第四法酶聯(lián)免

疫吸附篩查法，第五法為薄層色譜法。其中的高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法

以高靈敏度、精密度和便于自動化而被應用于油脂企業(yè)。然而，高效液相色譜法

1

檢測成本高，儀器價格高，維護費用高，分析時間長，前處理復雜；酶聯(lián)免疫吸

附法雖然在檢測成本上略好，但準確性和重現(xiàn)性卻有待提高。

近年來，黃曲霉毒素B1快速檢測方法已在油脂生產(chǎn)企業(yè)廣泛使用，它具有

操作簡單、樣品用量少、測定速度快、重現(xiàn)性好、結果可靠等特點，尤其在油料、

油脂、餅粕的日常生產(chǎn)檢驗，特別是其高密度檢測中顯現(xiàn)更大的優(yōu)勢。并且，黃

曲霉毒素B1快檢法也已普遍應用于糧食和飼料領域，并出臺了多個行業(yè)標準和

地方標準，包括：LS/T6111-2015《糧油檢驗糧食中黃曲霉毒素B1測定膠體

金快速定量法》，NY/T2550-2014《飼料中黃曲霉毒素B1的測定膠體金法》，

DB36/T1024-2018《飼料中黃曲霉毒素的快速篩查膠體金快速定量法》。因此，

從生產(chǎn)實際出發(fā)，油料油脂領域也需要把黃曲霉毒素B1快檢法提升為標準方法，

并加以推廣應用，為食用植物油生產(chǎn)中AFB1實時檢測和監(jiān)控提供支持。此外，

糧食和飼料所采用的快檢標準方法多為膠體金法，膠體金法只能實現(xiàn)定性和半定

量，而熒光定量法能夠實現(xiàn)指標定量的快速檢測，能夠更精準的對黃曲霉毒素進

行監(jiān)控。因此制定油料油脂生產(chǎn)中黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測方法是非常

必要的，對可靠監(jiān)控油料油脂生產(chǎn)中黃曲霉毒素B1風險、實現(xiàn)糧油行業(yè)的高質(zhì)

量發(fā)展具有重要意義。

1.2協(xié)作單位（除第一起草單位外的其他起草單位）

費縣中糧油脂工業(yè)有限公司，中糧油脂專業(yè)化公司，河北玉星食品有限公司，

長壽花食品股份有限公司。

1.3主要工作過程（應包括標準起草階段、征求意見階段、審查階段、報批

階段等）

標準起草階段：2020年10月-2021年3月，標準起草工作組就標準制定工

作制定了詳細的工作計劃，主要開展了以下幾個方面的工作：對油料油脂中黃曲

霉毒素B1檢測相關的文獻資料和標準進行查閱和收集整理；對花生油、玉米油

加工企業(yè)就黃曲霉毒素B1檢測的實踐經(jīng)驗進行調(diào)研交流；在實驗室對花生仁、

玉米胚及其油脂和餅粕樣品中的黃曲霉毒素B1進行測定，對檢測方法和檢測條

件進行細化優(yōu)化，通過對檢測數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理分析，建立了利用熒光定量快速檢

測法進行AFB1定量檢測的標準方法。完成了標準文本的起草工作，同時完成了

標準的編制說明。

2

征求意見階段：2021年4月-2021年7月，委托國內(nèi)相關檢測結構對檢測方

法進行試驗驗證，在此基礎上完善修改標準文本內(nèi)容，將標準征求意見稿和標準

編制說明發(fā)送給武漢輕工大學、中糧油脂控股有限公司、山東金勝糧油有限公司、

河北玉星食品有限公司、山東三星玉米產(chǎn)業(yè)科技有限公司、河南工業(yè)大學檢測中

心所等6個相關單位定向征求意見，6個單位均進行了意見回復。

在向上述6個單位征求意見時，其中在油料油脂分技術委員會任職的委員有

鄧斌、張世宏、宋立里等3位委員。

標準起草組對反饋意見進行匯總分析，同時對標準文本和編制說明進行了完

善修改，之后提交給糧標委和油料油脂標準分技術委員會向社會公開征求意見。

1.4標準主要起草人及其所做的工作等

標準主要起草人有：劉玉蘭，劉配蓮，張剛，董迎章，馬宇翔，鄧斌，王月

華，王戩東，裴婭曉。標準主要起草人由科研院所專業(yè)技術人員及知名花生油和

玉米油生產(chǎn)企業(yè)的專業(yè)技術人員組成?？蒲袉挝粚I(yè)技術人員所做的主要工作是

負責對檢測方法的研究、檢測數(shù)據(jù)分析及標準文本編寫和征求意見匯總等。油脂

生產(chǎn)企業(yè)的專業(yè)技術人員所做工作主要是對檢測方法的應用驗證及利用此檢測

方法對生產(chǎn)過程黃曲霉毒素進行風險監(jiān)控，為標準制定提供檢測數(shù)據(jù)和應用情況

的支持。

2．標準編制原則和確定標準主要內(nèi)容（如技術指標、參數(shù)、公式、性能要

求、試驗方法、檢驗規(guī)則等）的論據(jù)（包括試驗、統(tǒng)計數(shù)據(jù)）。修訂標準時，應

列出與原標準的主要差異和水平對比

2.1編制原則

本標準的結構和起草規(guī)則按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：

標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。

標準編制原則是確保標準具有科學性、先進性、適用性和可操作性，對我國

花生油、玉米油生產(chǎn)中AFB1的準確快速定量檢測起到規(guī)范的指導作用。

2.2確定行業(yè)標準主要內(nèi)容

本標準主要內(nèi)容包括：適用范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑、儀器設備

及材料、樣品制備、樣品測定、結果判定、重復性、檢出限。

具體內(nèi)容詳見標準文本。

3

3．主要試驗（或驗證）情況的分析、綜述報告，技術經(jīng)濟論證，預期的經(jīng)

濟效果

3.1主要試驗和驗證情況

（1）檢測材料和檢測儀器

試劑：甲醇

樣品稀釋液：由試劑盒中提供

儀器設備：熒光定量快速檢測儀，型號FD-600（上海飛測生物科技有限公

司或其他）

檢測卡恒溫孵育器：型號FD-2200（上海飛測生物科技有限公司或其他）

粉碎機：可使試樣粉碎后全部通過20目標準篩

離心機；

天平：分度值0.01g

移液器：型號20-200μl、100-1000μl

漩渦振蕩器；

黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡。

（2）方法考察

①與國家標準方法的比較。應用建立的方法與現(xiàn)行GB5009.22-2016《食品

安全國家標準食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》高效液相色譜法進行比較。

應用本方法分析了來自不同糧油產(chǎn)區(qū)的油料和油脂中的AFB1，并與國標方法進

行比較，參考行業(yè)標準LS/T6402-2017《糧油檢驗設備和方法標準適用性驗證

及結果評價一般原則》進行配對T檢驗，結果顯示不存在顯著差異。

附表1與現(xiàn)行國家標準高效液相色譜法進行比較

樣品編號國標方法本方法差值d1樣品編號國標方法本方法差值d1

花生仁12.452.190.26花生油227.85625.4122.444

花生仁210.629.850.77花生油345.23647.125-1.889

玉米油125.12324.1560.967玉米胚芽粕111.579.142.43

玉米油22.893.12-0.23玉米胚芽粕249.21545.2363.979

玉米油35.164.550.61花生粕135.26332.1453.118

花生油14.655.1-0.45花生粕238.25934.5233.736

②方法的驗證

4

本方法已在北京市農(nóng)林科學研究院、北京市糧油食品檢驗所、河南口岸食品

檢測中心、廣西糧油食品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心、河南省糧油飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗

中心、北京國糧局、中儲糧等行業(yè)內(nèi)外7家實驗室驗證。驗證樣品包括空白玉米

油、花生油樣品和有證基體標準物質(zhì)等，其中空白樣品用于加標，加標濃度水平

為0.5倍限量濃度、1倍限量濃度、2倍限量濃度三個水平。對7個實驗室返回

的檢測結果根據(jù)國標GB/T6379.2-2004《測量方法與結果的準確度第2部分：

確定標準測量方法重復性與再現(xiàn)性的基本方法》，采用柯克倫檢驗和格拉布斯檢

驗剔除離群值。重復性的變異系數(shù)小于10%，再現(xiàn)性變異系數(shù)小于15%，HorRat

在2之內(nèi)，均符合《食品法典委員會程序手冊》（第二十版）中關于聯(lián)合驗證的

要求。說明本方法在各實驗室驗證均有很好的重復性和再現(xiàn)性。此外，基于本方

法的產(chǎn)品于2017年3月順利通過了局標準質(zhì)量中心組織的設備和方法標準適用

性驗證。

附表2實驗室間聯(lián)合驗證統(tǒng)計結果

樣品玉米油花生油

濃度低濃度中濃度高濃度有證標物低濃度中濃度高濃度有證標物

參加實驗室

77777777

的數(shù)目

樣品的數(shù)量2020202020202020

去除離群值

后的測試實77777777

驗室數(shù)量

所有可接受

2020202020202020

結果的數(shù)量

平均值/

5.9610.5520.5215.125.0410.120.618.52

（μg/kg）

重復性的標

準偏差，Sr/0.484.223.731.3240.570.442.651.58

（μg/kg）

重復性的變

9.578.185.161.807.598.357.026.90

異系數(shù)/%

重復性限值，

3.075.664.682.720.042.574.283.47

r/（μg/kg）

再現(xiàn)性標準

偏差，SR/4.90.033.932.510.350.91.250.36

（μg/kg）

再現(xiàn)性的變

9.400.057.557.627.917.846.024.59

異系數(shù)/%

再現(xiàn)性限值，3.054.43.376.32.112.735.687.56

5

R/（μg/kg）

HorRat值0.380.451.450.950.630.850.80.75

回收率/%99.59102.73104.18-105.7399.05102.98-

（3）樣品檢出限和定量限

方法檢出限和定量限參考行業(yè)標準LS/T6402-2017《糧油檢驗設備和方法

標準適用性驗證及結果評價一般原則》進行評價。檢出限（LOD）：采用20個

陰性樣品檢測值的均值，加上3倍標準偏差計算；定量限（LOQ）：采用20個

陰性樣品檢測值的均值，加上10倍標準偏差計算；檢測結果見表3；測試結果

表明，黃曲霉毒素B1陰性樣品的檢測限（LOD）為0.7μg/kg，定量限（LOQ）

為2.1μg/kg。

附表3AFB1方法檢出限和定量限（單位：ug/kg）

測定次數(shù)測定值平均值標準偏差檢出限定量限

10

20

30

40

50.327

60

70.114

80.745

90

100

0.0840.2020.72.1

110

120

130

140

150

160

170

180

190

200.492

（4）實驗室間考查

按照行業(yè)標準編制的實施進度，在確立方法后，積極開展了本行業(yè)標準的聯(lián)

合驗證工作。為了使方法科學合理，起草組制備驗證實驗樣品及空白樣品，委托

5家驗證單位（河南工業(yè)大學試驗檢測中心、中糧營養(yǎng)健康研究院、河北玉星集

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團有限公司研發(fā)中心、河北省糧食和物資儲備局、山東三星玉米產(chǎn)業(yè)科技有限公

司）對5個驗證樣品進行實驗室間協(xié)同驗證，測試結果和數(shù)據(jù)分析按GB/T

6379.1-2004《測量方法與結果的準確度（正確度與精密度）第1部分：總則與定

義》和GB/T6379.2-2004《測量方法與結果的準確度第2部分：確定標準測量方

法重復性與再現(xiàn)性的基本方法》進行統(tǒng)計，分析數(shù)據(jù)見附表4。

表4實驗室間聯(lián)合驗證結果

樣品12345

實驗室數(shù)目55555

參加統(tǒng)計實驗室數(shù)目55555

離群實驗室數(shù)目00000

平均值/(μg/kg)5.2610.0615.1824.4129.83

重復性標準偏差，Sr0.4370.3070.2740.4301.609

重復性限，r1.2240.8600.7661.2054.507

重復性變異系數(shù)/%8.553.071.821.775.45

再現(xiàn)性標準偏差，SR0.2570.0880.1740.1901.260

再現(xiàn)性限，R0.7200.2460.4880.5323.528

再現(xiàn)性變異系數(shù)/%4.89%0.87%1.15%0.78%4.22%

3.2技術經(jīng)濟論證及預期的社會經(jīng)濟效果

近年我國食用植物油年消費量超過4700萬噸，其中花生油和玉米油產(chǎn)量分

別超過322萬噸和150萬噸，花生和玉米胚壓榨制油生產(chǎn)量在國產(chǎn)油料加工中占

有相當大的比例。作為食用植物油原料的植物油料尤其是花生和玉米胚更容易受

到黃曲霉毒素的污染，對植物油料原料和加工產(chǎn)品中黃曲霉毒素進行快速檢測，

并以此實現(xiàn)對生產(chǎn)中黃曲霉毒素的實時監(jiān)控對保證花生油和玉米油品質(zhì)安全及

其飼用餅粕安全都是非常重要的。該標準的制定和頒布實施將助力于油料油脂加

工過程對黃曲霉毒素污染物的快速檢測，提升對污染物控制的能力，在油料油脂

加工業(yè)產(chǎn)生顯著的經(jīng)濟社會效益。

4．與國際、國外對比情況（采用國際標準和國外先進標準的程度，以及與

國際、國外同類標準水平的對比情況，或與測試的國外樣品、樣機的有關數(shù)據(jù)的

對比情況等）

未查閱到國外有關植物油料和油脂中黃曲霉毒素快速定量檢測方法。

5．與有關的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強制性國家標準的關系（簡要說明標準與法

7

律、法規(guī)、標準的協(xié)調(diào)性）

GB5009.22-2016《食品安全國家標準食品中黃曲霉毒素B族和G族的測

定》列出了