熔解溫度試題及答案解析

熔解溫度試題及答案解析

單項選擇題（每題2分，共10題）1.DNA的熔解溫度（Tm）是指？A.雙螺旋結(jié)構(gòu)完全解開時的溫度B.雙螺旋結(jié)構(gòu)開始解開時的溫度C.50%DNA雙鏈被解開時的溫度D.80%DNA雙鏈被解開時的溫度答案：C2.以下哪種因素會使Tm值升高？A.A-T含量增加B.G-C含量增加C.溶液離子強度降低D.有尿素存在答案：B3.一段DNA序列為ATGCTG，其Tm值相對（）。A.較高B.較低C.不變D.無法判斷答案：B4.測定DNA熔解溫度的常用方法是？A.分光光度法B.離心法C.電泳法D.層析法答案：A5.雙鏈DNA的Tm與下列哪項無關(guān)？A.堿基組成B.溶液pHC.引物長度D.離子強度答案：C6.通常情況下，Tm值最高的是？A.大腸桿菌DNAB.噬菌體DNAC.人基因組DNAD.植物DNA答案：B7.在一定條件下，DNA的Tm值是？A.固定不變的B.隨濃度變化C.隨時間變化D.隨儀器不同變化答案：A8.使DNA熔解溫度降低的是？A.增加鹽濃度B.提高pHC.加入二甲基亞砜D.降低溫度答案：C9.Tm值可以反映DNA的？A.純度B.長度C.堿基對排列順序D.分子量答案：A10.以下關(guān)于Tm的說法正確的是？A.Tm就是DNA變性的唯一溫度B.Tm與DNA濃度呈正相關(guān)C.不同來源DNA的Tm不同D.Tm與氫鍵無關(guān)答案：C多項選擇題（每題2分，共10題）1.影響DNA熔解溫度的因素有（）A.堿基組成B.溶液離子強度C.核酸分子長度D.變性劑答案：ABCD2.下列關(guān)于Tm的描述正確的是（）A.Tm是DNA變性過程中紫外吸收值達(dá)到最大值的一半時的溫度B.Tm與G-C含量成正比C.Tm受溶液pH影響D.Tm可用于判斷DNA純度答案：ABCD3.以下哪些方法可用于測定Tm值（）A.紫外分光光度法B.熒光定量法C.差示掃描量熱法D.凝膠過濾法答案：ABC4.關(guān)于DNA熔解溫度，正確的有（）A.雙鏈DNA比單鏈DNATm高B.均一性高的DNATm范圍窄C.鹽濃度升高Tm升高D.有甲酰胺存在時Tm降低答案：ABCD5.與Tm值相關(guān)的是（）A.氫鍵數(shù)量B.磷酸二酯鍵穩(wěn)定性C.堿基堆積力D.溶液的滲透壓答案：AC6.下列因素能使Tm值改變的有（）A.核酸中嘌呤含量B.核酸中嘧啶含量C.加熱速度D.緩沖液成分答案：ABCD7.關(guān)于Tm說法正確的是（）A.Tm反映了DNA雙鏈解鏈的難易程度B.富含A-T的DNATm低C.高離子強度溶液中Tm較高D.Tm與DNA的二級結(jié)構(gòu)有關(guān)答案：ABCD8.可影響Tm的因素包括（）A.DNA分子的堿基組成比例B.樣品的濃度C.環(huán)境溫度變化速率D.有機溶劑的存在答案：ABCD9.以下對Tm理解正確的是（）A.Tm是DNA熱變性的特征參數(shù)B.不同物種DNA的Tm不同C.Tm與DNA雙鏈的穩(wěn)定性有關(guān)D.可以通過Tm篩選合適的引物答案：ABCD10.決定Tm大小的主要因素有（）A.核酸分子大小B.堿基種類C.溶液的離子強度D.核酸的三級結(jié)構(gòu)答案：ABC判斷題（每題2分，共10題）1.DNA的熔解溫度就是DNA完全變性時的溫度。（×）2.G-C含量越高，DNA的Tm值越高。（√）3.溶液離子強度增加，DNA的Tm值降低。（×）4.測定Tm值只能用紫外分光光度法。（×）5.均一性差的DNA，其Tm范圍寬。（√）6.Tm與DNA分子的長度無關(guān)。（×）7.不同來源的DNA，即使堿基組成相同，Tm也可能不同。（√）8.提高溶液pH會使DNA的Tm值升高。（×）9.Tm值可以作為判斷DNA樣品純度的一個指標(biāo)。（√）10.DNA變性過程中，溫度達(dá)到Tm時，雙鏈立即完全解開。（×）簡答題（每題5分，共4題）1.簡述影響DNA熔解溫度的主要因素。答案：主要因素有堿基組成，G-C含量越高Tm越高；核酸分子長度，長度越長Tm越高；溶液離子強度，離子強度增加Tm升高；還有變性劑等，如尿素等會使Tm降低。2.為什么G-C含量高的DNA的Tm值較高？答案：G-C之間形成三個氫鍵，A-T之間形成兩個氫鍵。G-C含量高意味著DNA雙鏈間氫鍵數(shù)量多，維持雙鏈結(jié)構(gòu)的作用力強，解開雙鏈所需能量高，所以Tm值較高。3.說明測定DNA熔解溫度的意義。答案：可判斷DNA純度，純度高Tm范圍窄；能反映DNA堿基組成情況；在分子生物學(xué)實驗中，為核酸雜交、PCR等反應(yīng)條件的優(yōu)化提供參考。4.溶液離子強度對Tm有何影響及原因？答案：離子強度增加，Tm升高。因為溶液中的陽離子可中和DNA磷酸基團的負(fù)電荷，減弱雙鏈間的靜電斥力，使雙鏈更穩(wěn)定，需要更高溫度才能解開，所以Tm升高。討論題（每題5分，共4題）1.在分子生物學(xué)實驗中，如何根據(jù)Tm值來設(shè)計合適的引物？答案：引物Tm值應(yīng)在一定范圍內(nèi)，一般55-65℃?？筛鶕?jù)模板DNA堿基組成計算引物Tm，上下游引物Tm差值不宜過大。保證引物與模板特異性結(jié)合，避免非特異性擴增，使PCR等反應(yīng)順利進(jìn)行。2.當(dāng)DNA樣品中含有雜質(zhì)時，對Tm值會產(chǎn)生怎樣的影響？答案：雜質(zhì)可能改變?nèi)芤涵h(huán)境，如影響離子強度等，進(jìn)而影響Tm。若雜質(zhì)與DNA相互作用，破壞雙鏈穩(wěn)定性，會使Tm降低；若提高雙鏈穩(wěn)定性，則Tm升高。而且雜質(zhì)可能干擾Tm測定，使結(jié)果不準(zhǔn)確。3.結(jié)合Tm的概念，談?wù)凞NA變性與復(fù)性在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用。答案：DNA變性到Tm時雙鏈解開，用于核酸測序、PCR模板制備等。復(fù)性是變性的逆過程，在核酸雜交技術(shù)中，利用復(fù)性特性使互補核酸鏈結(jié)合，可檢測特定核酸序列，用于基因診斷等