2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

第2章細(xì)胞工程第2節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程Part2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體目錄/CONTENTS0102動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體及其應(yīng)用植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞融合植物組織培養(yǎng)溫故而知新：意義：打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種。

溫故而知新：實(shí)驗(yàn)：人——鼠細(xì)胞熒光標(biāo)記融合實(shí)驗(yàn)501動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。形成具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息的雜交細(xì)胞

細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性1、概念：4、結(jié)果：2、原理：3、誘導(dǎo)方式物理法：電融合法化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法與植物原生質(zhì)體融合的方法相同——?jiǎng)游锛?xì)胞融合特有601動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)5、過(guò)程:動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞增殖701動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理滅活：指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力（不感染細(xì)胞），但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）。

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。【拓展】801動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞7、應(yīng)用：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。6、意義：

至今，種間、屬間、科間，甚至動(dòng)物和植物之間的細(xì)胞融合都已獲得成功。研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。為制造單克隆抗體開(kāi)辟了新途徑。項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理步驟誘導(dǎo)方法結(jié)果意義比較動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性酶解法去掉細(xì)胞壁后，誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，形成雜種體細(xì)胞，再經(jīng)過(guò)植物組織培養(yǎng)形成雜種植株分散成單個(gè)細(xì)胞后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理方法、化學(xué)方法物理方法、化學(xué)方法、滅活病毒形成雜種植株形成雜種細(xì)胞克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙課堂檢測(cè)1.關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合的說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A.動(dòng)物細(xì)胞融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞遺傳信息的多核細(xì)胞稱(chēng)為雜交細(xì)胞B.動(dòng)物細(xì)胞融合己成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段C.常用于誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合手段有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等D.細(xì)胞融合技術(shù)突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能A2.關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的比較,下列敘述合理的是 (

)A.均可使用PEG、電激或滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合B.兩者都可以跨越種屬間的生殖隔離C.兩者都可以體現(xiàn)細(xì)胞的全能性D.在適宜條件下，均可發(fā)育成完整個(gè)體B課堂檢測(cè)121302單克隆抗體及其應(yīng)用1.定義：機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的，能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。2.抗體的分布：1）血清（主要）2）組織液及外分泌液（如乳汁中）體液免疫

抗體1）每個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性的抗體2）體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類(lèi)多達(dá)百萬(wàn)種以上抗體1402單克隆抗體及其應(yīng)用1抗原傳統(tǒng)抗血清（所有抗體混合）免疫

1

1234缺陷：產(chǎn)量低、純度低，特異性差。（不能無(wú)限增殖）動(dòng)物體內(nèi)1抗原注射漿細(xì)胞1抗體

1B淋巴細(xì)胞增殖分化1、傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷

1

1502單克隆抗體及其應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體骨髓瘤細(xì)胞

（能無(wú)限增殖）一種B淋巴細(xì)胞（只分泌一種特異性抗體）雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體一個(gè)極富創(chuàng)造力的方案1975年，米爾斯坦和柯勒1984年，諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)1602單克隆抗體及其應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體骨髓瘤細(xì)胞

（能無(wú)限增殖）一種B淋巴細(xì)胞（只分泌一種特異性抗體）雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體單克隆抗體一個(gè)B淋巴細(xì)胞細(xì)胞群抗體克隆一個(gè)極富創(chuàng)造力的方案1702單克隆抗體及其應(yīng)用注射特定抗原從患骨髓瘤的小鼠體內(nèi)取骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)多種已免疫B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合小鼠的脾臟中獲取2、單克隆抗體的制備過(guò)程1802單克隆抗體及其應(yīng)用2雜交瘤細(xì)胞(多種)13置于選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)

第一次篩選融合的細(xì)胞BB132BB瘤瘤瘤瘤√1902單克隆抗體及其應(yīng)用克隆化培養(yǎng)抗體檢測(cè)第二次篩選(抗原-抗體雜交技術(shù))能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞(多種)2002單克隆抗體及其應(yīng)用體外培養(yǎng)單克隆抗體體內(nèi)或體外培養(yǎng)能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔21【培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的方法比較】項(xiàng)目腹腔培養(yǎng)體外培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)易于控制培養(yǎng)條件（如無(wú)需提供無(wú)菌環(huán)境等），操作簡(jiǎn)單，成本較低規(guī)模小，產(chǎn)量少可大規(guī)模培養(yǎng)，大量生產(chǎn)需要人為控制培養(yǎng)條件，成本相對(duì)較高02單克隆抗體及其應(yīng)用2302單克隆抗體及其應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)給小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴細(xì)胞（免疫）骨髓瘤細(xì)胞雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞第一次篩選第二次篩選誘導(dǎo)融合選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)，專(zhuān)一抗體檢驗(yàn)體外培養(yǎng)或小鼠腹腔內(nèi)增殖特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備既能大量繁殖又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體知識(shí)拓展：第一次篩選獲得雜交瘤細(xì)胞①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。②人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒(méi)有S途徑，但能不斷分裂增殖。篩選出雜交瘤細(xì)胞方法？B淋巴細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能無(wú)限增殖，死亡骨髓瘤細(xì)胞及同型融合細(xì)胞不能無(wú)限增殖，死亡雜交瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖，生長(zhǎng)二、單克隆抗體及其應(yīng)用培養(yǎng)基中加入氨基嘌呤2502單克隆抗體及其應(yīng)用陽(yáng)性孔抗體檢測(cè)的方法——抗原-抗體雜交法在單克隆抗體制備過(guò)程中，兩次篩選的目的和方法是不相同的。將雜交瘤細(xì)胞群稀釋?zhuān)s每孔1個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)（克隆化培養(yǎng)）一段時(shí)間后，檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔多孔細(xì)胞培養(yǎng)板抗體檢測(cè)板分泌抗體能跟特定抗原結(jié)合的細(xì)胞即為所需雜交瘤細(xì)胞總結(jié)注射特定抗原的目的是獲得什么細(xì)胞？B淋巴細(xì)胞第一次篩選的目的？如何篩選？

篩選原理是？篩選出雜交瘤細(xì)胞；選擇培養(yǎng)基；在選擇培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是？既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生抗體總結(jié)第二次篩選的目的？如何篩選？篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞；選擇抗體檢測(cè)呈____性的雜交瘤細(xì)胞用96孔板培養(yǎng)，在每一個(gè)孔中盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)抗體和抗原能特異性結(jié)合陽(yáng)抗體檢測(cè)原理是？總結(jié)如何獲取大量所需的雜交瘤細(xì)胞？在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔中如何獲得單克隆抗體？從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取能準(zhǔn)確地識(shí)別抗原的細(xì)微差異，與特定抗體發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以大量的制備。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)單克隆抗體制備過(guò)程的原理細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性和細(xì)胞增殖課堂檢測(cè)B3.如圖所示為雜交瘤細(xì)胞的制備示意圖。骨髓瘤細(xì)胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT-),在HAT選擇培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無(wú)法生長(zhǎng)。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A.可用滅活的病毒誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合B.兩兩融合的細(xì)胞都能在HAT選擇培養(yǎng)液中生長(zhǎng)C.雜交瘤細(xì)胞需進(jìn)一步篩選才能用于生產(chǎn)D.細(xì)胞膜的流動(dòng)性是細(xì)胞融合的基礎(chǔ)課堂檢測(cè)4.如圖2-2-6為單克隆抗體的制備流程示意圖。下列敘述正確的是(

)圖2-2-6A.甲是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的致敏T淋巴細(xì)胞B.①表示將骨髓瘤細(xì)胞去核后進(jìn)行細(xì)胞融合C.乙為融合細(xì)胞，同時(shí)具有細(xì)胞甲和骨髓瘤細(xì)胞的特性D.②表示篩選能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞D課堂檢測(cè)5.犬細(xì)小病毒(CPV)單克隆抗體(CpvMcAb)可抑制病毒對(duì)宿主細(xì)胞的侵染及病毒的復(fù)制，進(jìn)而殺滅幼犬體內(nèi)病毒。下列相關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是()A．在Cpv、McAb的制備過(guò)程中用到了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)B．給幼犬注射CPV后，CPV抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，說(shuō)明發(fā)生了體液免疫反應(yīng)C．經(jīng)選擇性培養(yǎng)基篩選出來(lái)的雜交瘤細(xì)胞即可直接生產(chǎn)CpvMcAbD．對(duì)雜交細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要無(wú)菌無(wú)毒環(huán)境，且溫度、氣體環(huán)境等要適宜C單克隆抗體應(yīng)用（1）診斷試劑——最廣泛應(yīng)用

在受精后不久，胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞就會(huì)分泌人絨毛膜促性腺激素(HCG)，是由受孕婦女體內(nèi)胎盤(pán)產(chǎn)生的一種糖蛋白類(lèi)激素，在孕婦的尿液中大量存在。而在非妊娠婦女尿液中幾乎不含有?？梗ㄈ私q毛膜促性腺激素）單克隆抗體資料1

用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，在妊娠第8天就可以作出診斷，這比原來(lái)的診斷方法提前了10d左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對(duì)胎兒造成不利影響。該方法檢測(cè)的準(zhǔn)確率在90%以上。3302單克隆抗體及其應(yīng)用1、診斷試劑——最廣泛應(yīng)用抗原-抗體雜交法抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體在妊娠第8天就可以作出診斷，比原來(lái)診斷方法提前了10d左右，準(zhǔn)確率在90﹪以上。具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速特點(diǎn)診斷優(yōu)點(diǎn)：3、單克隆抗體的應(yīng)用3402單克隆抗體及其應(yīng)用乙肝測(cè)定試劑艾滋病檢測(cè)試劑血型檢測(cè)試劑新冠病毒檢測(cè)試劑（2）用于治療疾病和運(yùn)載藥物單克隆抗體應(yīng)用資料2

使用高效的細(xì)胞毒素類(lèi)藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞。但細(xì)胞毒素沒(méi)有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)還會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害，這限制了它在臨床上的應(yīng)用?？贵w一藥物偶聯(lián)物（antibody-drugconjugate,ADC）通過(guò)將細(xì)胞毒素與能特異性識(shí)別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機(jī)制如下圖所示?？贵w藥物接頭細(xì)胞凋亡ADC被細(xì)胞吞噬3602單克隆抗體及其應(yīng)用主要用于癌癥治療。2、運(yùn)載藥物優(yōu)點(diǎn)：位置準(zhǔn)確、療效高、副作用小單克隆抗體+接頭+藥物（如細(xì)胞毒素）=ADC（抗體-藥物偶聯(lián)物）單克隆抗體+藥物=“生物導(dǎo)彈”討論：ADC的抗體和藥物各具有什么作用？

抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用，即通過(guò)特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞；藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞。3802單克隆抗體及其應(yīng)用單克隆抗體+同位素（熒光標(biāo)記）2、運(yùn)載藥物在特定組織中成像的技術(shù)，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病。結(jié)合熒光標(biāo)記的單克隆抗體藥物3、治療疾病醫(yī)藥領(lǐng)域，單抗類(lèi)藥物占用重要地位練習(xí)與應(yīng)用

一、概念檢測(cè)1.下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交比較的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A.它們的原理都涉及細(xì)胞膜的流動(dòng)性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細(xì)胞D.前者主要是為了獲得細(xì)胞產(chǎn)品，后者主要是為了獲得雜種植株2.科學(xué)家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養(yǎng)單個(gè)B淋巴細(xì)胞可以獲得針對(duì)SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合，經(jīng)誘導(dǎo)后融合