食品中15種酚?。ǚ佣。?、酚酞及其酯類(lèi)衍生物或類(lèi)似物的執(zhí)法檢驗(yàn)方法2025

食品中15種酚汀（酚?。⒎犹捌漉ヮ?lèi)衍生物或類(lèi)似物的執(zhí)法檢驗(yàn)方法本方法規(guī)定了食品中15種酚?。ǚ佣。?、酚酞及其酯類(lèi)衍生物或類(lèi)似物的液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜定性測(cè)定方法。本方法適用于飲料、糖果、果凍、蜜餞、咖啡、茶等食品及片劑、膠囊、口服液等劑型中酚酞、酚丁、雙醋酚丁、雙丙酚丁、雙己酚丁、雙庚酚丁、雙辛酚丁、雙環(huán)丙甲酰酚丁、雙環(huán)己甲酰酚丁、三環(huán)丙甲酰酚丁、6-氟雙丙酚丁、5-氯酚丁、5-氯雙醋酚丁、雙酚沙丁、雙酚沙丁醋酸酯15種物質(zhì)的定性測(cè)定。2原理試樣經(jīng)甲醇超聲提取、過(guò)濾后，濾液供液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜測(cè)定，比較試樣與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、一級(jí)質(zhì)譜圖和二級(jí)質(zhì)譜圖，進(jìn)行目標(biāo)物定性測(cè)定。3試劑與材料除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純；水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1試劑3.1.1乙腈（CH3CN）：色譜純。3.1.2甲酸（HCOOH）：色譜純。3.1.3甲醇（CH3OH）：色譜純。3.1.4甲醇（CH3OH）。3.2試劑配制3.2.10.1%甲酸水溶液：量取1mL甲酸（3.1.2），用水稀釋至1000mL，用濾膜（3.5.1）過(guò)濾。3.2.2甲醇水溶液（1+1）：將甲醇（3.1.3）與水等體積混合。3.3標(biāo)準(zhǔn)品酚酞、酚?。ㄓ置悍油。㈦p醋酚丁、雙丙酚?。ㄓ置弘p丙酚?。?、雙己酚丁、雙庚酚丁、雙辛酚丁、雙環(huán)丙甲酰酚丁、雙環(huán)己甲酰酚丁、三環(huán)丙甲酰酚丁、6-氟雙丙酚丁、5-氯酚丁、5-氯雙醋酚?。ㄓ置?-氯雙醋酚丁）、雙酚沙丁、雙酚沙丁醋酸酯15種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品純度≥98%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS號(hào)及分子式等信息見(jiàn)附錄A。3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制（100μg/mL）分別準(zhǔn)確稱(chēng)取15種標(biāo)準(zhǔn)品（3.3）各10mg（精確至0.01mg用乙腈（3.1.1）溶解，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）定容至刻度，搖勻，配成濃度為100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-18℃避光貯存，有效期3個(gè)月。3.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制（1μg/mL）分別準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.4.1）各1mL于100mL容量瓶中，用甲醇水溶液（1+13.2.2）定容至刻度，搖勻，配成濃度為1μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液?；蛞纼x器響應(yīng)情況配制至適當(dāng)濃度?，F(xiàn)用現(xiàn)配。3.5材料3.5.1微孔濾膜：0.22μm，水相型。3.5.2微孔濾膜：0.22μm，有機(jī)相型。3.5.3具塞離心管：50mL。3.5.4容量瓶：50mL、100mL。4儀器和設(shè)備4.1液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜儀，配有電噴霧（ESI）離子源，分辨率≥20000(m/z等于200，按半峰寬（FWHM）計(jì))。4.2分析天平：感量分別為0.01mg和1mg。4.3粉碎機(jī)。4.4勻漿機(jī)。4.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。4.6超聲波發(fā)生器：功率≥500W，頻率≥37kHz。5分析步驟5.1試樣制備5.1.1固體飲料、糖果、蜜餞、咖啡、茶、片劑取代表性樣品20g或全部試樣（試樣低于20g時(shí)），使用粉碎機(jī)粉碎，充分混勻。5.1.2果凍取代表性樣品20g或全部試樣（試樣低于20g時(shí)），使用勻漿機(jī)勻漿，充分混勻。5.1.3膠囊取代表性樣品20g或全部試樣（試樣低于20g時(shí)），將膠囊殼與內(nèi)容物分離，膠囊殼剪碎，與內(nèi)容物充分混勻。5.1.4液體飲料、口服液取代表性樣品20g或全部試樣（試樣低于20g時(shí)），充分混勻。5.2試樣處理準(zhǔn)確稱(chēng)取1g試樣（精確至0.001g）置于50mL具塞離心管（3.5.3）中，加入40mL甲醇（3.1.4超聲提取15min，冷卻至室溫，于4000r/min離心5min，上清液全部轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶（3.5.4）中，用甲醇（3.1.4）定容至刻度，混勻。取適量上清液過(guò)微孔濾膜（3.5.2）過(guò)濾，根據(jù)實(shí)際濃度用甲醇水溶液（1+13.2.2）適當(dāng)稀釋?zhuān)郎y(cè)定。5.3儀器參考條件5.3.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a）色譜柱：C18色譜柱，75mm×3.0mm（內(nèi)徑），2.7μm，或性能相當(dāng)者；b）流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸水溶液（3.2.1），B相為乙腈（3.1.1），梯度洗脫條件見(jiàn)表1。表1液相色譜梯度洗脫條件052255c）流速：0.4mL/min；d）柱溫：30℃;e）進(jìn)樣量：5μL。5.3.2質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：a）電離方式：電噴霧電離（ESI）；b）檢測(cè)方式：MS/MS模式；c）掃描方式：正離子模式；d）毛細(xì)管電壓：5000V；e）干燥氣溫度：325℃;f）干燥氣流量：12L/min；g）霧化氣壓力：345kPa；h）鞘氣溫度：375℃;鞘氣流量：12L/min。5.4定性測(cè)定5.4.1篩查按照儀器參考條件（5.3）測(cè)定混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.4.2）和試樣溶液（5.2記錄各化合物的色譜峰保留時(shí)間及多級(jí)質(zhì)譜圖。當(dāng)試樣中檢出的色譜峰（信噪比≥3），與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中相應(yīng)化合物的色譜峰保留時(shí)間一致（相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)），并且準(zhǔn)分子離子及至少2個(gè)主要碎片離子精確質(zhì)荷比相對(duì)偏差不超過(guò)百萬(wàn)分之十(≤10ppm），可認(rèn)為篩查到疑似陽(yáng)性結(jié)果，須進(jìn)行確認(rèn)。或通過(guò)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.4.2）進(jìn)樣分析獲得化合物的保留時(shí)間、母離子的精確質(zhì)荷比、至少2個(gè)主要碎片離子的精確質(zhì)荷比，從而建立目標(biāo)化合物庫(kù)。當(dāng)試樣中檢出的色譜峰（信噪比≥3與經(jīng)驗(yàn)證的目標(biāo)化合物庫(kù)中相應(yīng)化合物的色譜峰保留時(shí)間一致（相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)），并且準(zhǔn)分子離子及至少2個(gè)主要碎片離子精確質(zhì)荷比相對(duì)偏差不超過(guò)百萬(wàn)分之十(≤10ppm），可認(rèn)為篩查到疑似陽(yáng)性結(jié)果，須進(jìn)行確認(rèn)。5.4.2確認(rèn)取與試樣基質(zhì)基本相同或相近的空白試樣，按5.2同法制備，制得空白基質(zhì)溶液。吸取疑似目標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.4.1）適量，用空白基質(zhì)溶液稀釋并混勻，配成與樣品中目標(biāo)物濃度接近的空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品溶液。按照儀器參考條件（5.3）測(cè)定空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品溶液和試樣溶液，記錄化合物的色譜峰保留時(shí)間及多級(jí)質(zhì)譜圖。當(dāng)試樣中檢出的色譜峰（信噪比≥3與空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品溶液中相應(yīng)化合物的色譜峰比較，符合下列判定條件時(shí)，可確認(rèn)為檢出該化合物。（1）保留時(shí)間：相對(duì)偏差應(yīng)不大于±2.5%。（2）一級(jí)及二級(jí)質(zhì)譜質(zhì)量準(zhǔn)確性：一級(jí)母離子及至少2個(gè)主要碎片離子精確質(zhì)荷比相對(duì)偏差不超過(guò)百萬(wàn)分之五(≤5ppm）；當(dāng)m/z<200時(shí)，其絕對(duì)偏差應(yīng)＜1mDa。（3）同位素峰：同位素峰分布應(yīng)一致，精確質(zhì)荷比應(yīng)符合上述質(zhì)量準(zhǔn)確性要求。（4）碎片相對(duì)離子豐度比：至少2個(gè)主要碎片的相對(duì)離子豐度比偏差不超過(guò)表2規(guī)定的范圍。表2定性確認(rèn)時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差>50>20~50>10~20如有檢出，酚酞可按照食品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法BJS201701定量測(cè)定，雙醋酚丁可按照食品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法BJS202209定量測(cè)定，雙丙酚丁可按照市監(jiān)稽發(fā)〔2023〕95號(hào)附件1定量測(cè)定。其余化合物可參照上述方法建立定量方法，并按照GB5009.295進(jìn)行方法確認(rèn)。推薦使用非靶向檢測(cè)模式，如發(fā)現(xiàn)某化合物不是上述15種化合物，但部分碎片離子與表3中所列特征碎片離子一致，應(yīng)考慮可能為酚丁、酚酞新型酯類(lèi)衍生物或鹵代類(lèi)似物，建議進(jìn)一步結(jié)構(gòu)鑒定。表3具有以下結(jié)構(gòu)母核的化合物特征碎片離子5.5空白試驗(yàn)除不加試樣外，完全按照上述操作步驟進(jìn)行。6方法靈敏度、特異性當(dāng)取樣量為1g，定容體積為50mL時(shí)，飲料、糖果、果凍、蜜餞及茶等食品及片劑、膠囊、口服液等劑型基質(zhì)中15種化合物的檢出限為1.0mg/kg；咖啡基質(zhì)中15種化合物的檢出限為2.0mg/kg?？瞻自囼?yàn)應(yīng)無(wú)干擾。附錄A酚酞等15種標(biāo)準(zhǔn)品的基本信息酚酞等15種標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、分子式、CAS號(hào)見(jiàn)表A.1。表A.1酚酞等15種標(biāo)準(zhǔn)品的基本信息1C20H14O42C20H15NO33C24H19NO54C26H23NO55C32H35NO5/6C34H39NO5/7C36H43NO5/8OxyphenisatindicyclopropaneC28H23NO59OxyphenisatindicyclohexanecC34H35NO5/OxyphenisatintricyclopropaneC32H27NO6/6-Fluoro-oxyphenisatindipC26H22FNO5/C20H14ClNO35-Chloro-oxyphenisatC24H18ClNO5C20H15NO4C24H19NO6雙己酚丁C32H35NO5雙庚酚丁C34H39NO5雙辛酚丁C36H43NO5雙環(huán)己甲酰酚丁C34H35NO5三環(huán)丙甲酰酚丁C32H27NO66-氟雙丙酚丁C26H22FNO5（資料性）酚酞等15種化合物高分辨質(zhì)譜參考信息酚酞等15種化合物名稱(chēng)、分子式、準(zhǔn)分子離子、保留時(shí)間、碰撞電壓及主要碎片離子參考信表B.1酚酞等15種化合物高分辨質(zhì)譜參考信息1C20H14O42C20H15NO33C24H19NO54C26H23NO55C32H35NO56C34H39NO57C36H43NO58C28H23NO59C34H35NO5C32H27NO6C26H22FNO5C20H14ClNO3258.0316,230.0373,223.06C24H18ClNO5258.0316,230.0373,223.06C20H15NO4C24H19NO6液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜提取離子色譜圖及高分辨二級(jí)質(zhì)譜圖15種化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（1μg/mL）的液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜提取離子色譜圖見(jiàn)圖C.1。15種化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（1μg/mL）的高分辨二級(jí)質(zhì)譜圖見(jiàn)圖C.2。圖C.115種化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液（1μg/mL）的液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜提取離