TZHCA 032-2024 駐留類化妝品溫和性評價 重建表皮模型組織活力法

.S0SY2.團 體 標 準A4駐留類化妝品溫和性評價重建表皮模型組織活力法—yl5發(fā)布 5實施浙江省健康產(chǎn)品化妝品行業(yè)協(xié)會 發(fā)布中 國 標 準 出 版 社 出版A4前 言本文件按照標準化工作導則 第1部分標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由浙江省食品藥品檢驗研究院提出。本文件由浙江省健康產(chǎn)品化妝品行業(yè)協(xié)會歸口。本文件起草單位浙江省食品藥品檢驗研究院廣東博溪生物科技有限公司珀萊雅化妝品股份有限公司杭州捷諾飛生物科技有限公司上海家化聯(lián)合股份有限公司。本文件主要起草人何立成匡榮張艷云金洋伊歐陽楊賈海東。Ⅰ駐留類化妝品溫和性評價重建表皮模型組織活力法范圍本文件描述了采用重建表皮模型對駐留類化妝品溫和性功效的評價方法。本文件適用于駐留類化妝品溫和性功效的評價。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中注日期的引用文件僅該日期對應的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件。2分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。

駐留類化妝品t除淋洗類化妝品外的化妝品。溫和性 s經(jīng)過安全評估的受試物在正常合理及可預見的使用條件下未引起皮膚異常反應的特性。重建表皮模型l分離人包皮表皮細胞作為種子細胞經(jīng)過體外培養(yǎng)制備成與人表皮組織具有相似結(jié)構(gòu)及功能的三維組織模型。試驗原理將經(jīng)安全性評價為無刺激性的受試樣品均勻涂抹在重建表皮模型上經(jīng)過比刺激性測試更長的暴露時間或更高暴露量后根據(jù)模型細胞的存活率評價受試樣品的溫和性。試劑和材料除非另有說明本方法所用試劑均為分析純水為2規(guī)定的三級水。聚乙二醇單辛基苯基醚n。十二烷基硫酸鈉。異丙醇。1A4噻唑藍。磷酸鹽緩沖液H不含鈣鎂離子。0 n0溶液吸取n0溶于0L水中配制成體積分數(shù)為0 的n0溶液。1 S溶液稱取0溶于0L水中配制成質(zhì)量分數(shù)為1 的S溶液。T溶液稱取噻唑藍0溶于0L中配制成質(zhì)量濃度為1L的溶液臨用現(xiàn)配。 : 。重建表皮模型試劑盒E模型及其培養(yǎng)液或其他經(jīng)驗證的等效模型及其培養(yǎng)液 收時模型與培養(yǎng)基接觸界面不應有明顯氣泡或固體培養(yǎng)基變色情況如黑紫色。死亡組織模型將重建表皮模型置于0℃環(huán)境下冷凍h以上。儀器設(shè)備天平分度值為。二氧化碳培養(yǎng)箱7℃1℃2體積分數(shù)范圍為)相對濕度5。超凈工作臺或生物安全柜。外置活塞式移液器最大量程為。連續(xù)分液器最大量程為5。計時器。微孔板振蕩器。酶標儀配m波長濾光片。測試方法干擾因素排查當受試樣品與T有反應時取T溶液0加入受試樣品液體0分別在0、2h和時觀察樣品周邊溶液顏色變化情況。當溶液顏色變成藍紫色應增加死亡組織模型組。當受試樣品有顏色時取受試樣品加入2L異丙醇中受試樣品不溶于異丙醇無須增加死亡組織模型對照組受試樣品溶于異丙醇在m波長處測定吸光度0若0應增加死亡組織模型組。測試步驟重建表皮模型復蘇在超凈工作臺或生物安全柜中將合格的模型轉(zhuǎn)移至含9L培養(yǎng)液的無菌6孔培養(yǎng)板放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。更換全部培養(yǎng)液放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。模型底部與培養(yǎng)液間不應出現(xiàn)氣泡。,試,試驗分為陰性對照組水陽性對照組0 n0溶液或1 S溶液和受試樣組當出現(xiàn)1中的情況時增加死亡組織模型陰性對照組和死亡組織模型受試樣品組每組平行使用3個模型。加樣前更換全部培養(yǎng)液采用外置活塞式移液器吸取受試樣品0L均勻涂抹在模型表面放入二氧化碳培養(yǎng)箱暴露。2沖洗

A4暴露結(jié)束后采用連續(xù)分液器吸取5LS將模型逐個進行沖洗每次2未沖洗干凈應增加沖洗次數(shù)直至沖洗干凈吸干殘余的。甲瓚提取將模型轉(zhuǎn)移至含LT溶液的4孔培養(yǎng)板中模型底部與T溶液間不應出現(xiàn)氣泡。放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)h后轉(zhuǎn)移至新的4孔培養(yǎng)板中每孔加入2L異丙醇用封口膜密封培養(yǎng)板間隙。室溫條件下將培養(yǎng)板固定在微孔板振蕩器上振搖2h提取甲瓚或在4℃條件下提取過夜。0的測定提取結(jié)束后用移液器吸頭戳破模型將模型內(nèi)外提取液混合均勻并轉(zhuǎn)移至6孔培養(yǎng)板中每個組織模型取2個復孔孔。用異丙醇作為溶劑對照取6個復孔在m波長處讀取吸光度0計算組織的存活率。數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析無死亡組織模型對照組的存活率按式計算。存活率AB0 1)式中:

CBA受試樣品的0;B溶劑對照異丙醇的0平均值;C陰性對照的0。

() 。有死亡組織模型對照組的存活率按式2計算存活率=AB-DE0 2)式中:

CBA受試樣品的0;B溶劑對照異丙醇的0平均值;C陰性對照的0;D受試樣品死亡組織的0;E陰性對照死亡組織的0。結(jié)果判定試驗成立條件陰性對照組的0范圍為0~。陽性對照組的存活率5。同一樣品復孔間8。結(jié)果評價溫和性存活率0。不判定存活率0需結(jié)合其他試驗進一步確認。3A4試驗報告試驗報告至少應給出以下幾個方面的內(nèi)容:檢驗依據(jù);樣品和陽性對照組的信息包括與試驗操作相關(guān)的理化性狀;重建表皮模型來源質(zhì)檢報告等相關(guān)信息;試驗條件和方法包括試驗具體