中藥制劑高效液相色譜法-高效液相色譜法的原理與儀器構(gòu)成

中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法的原理和儀器構(gòu)造案例導(dǎo)入固本咳喘片中補骨脂素和異補骨脂素的含量測定本品是由黨參、白術(shù)（麩炒）、茯苓、麥冬、鹽補骨脂、炙甘草、醋五味子加工而成的片劑采用高效液相色譜法進行含量測定，本品中含補骨脂的量以補骨脂素和鹽補骨脂素的含量計算含量測定使用的儀器是高效液相色譜儀，使用前先要進行色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，隨后還要用配制好的流動相對高壓輸液泵及其管路進行排氣、平衡等操作，將供試品和對照品依次進樣，在色譜柱上進行分離，設(shè)置檢測器參數(shù)，由檢測器對色譜行為進行分析并在色譜工作站中呈現(xiàn)出來高效液相色譜法如何進行中藥制劑中活性成分的測定?案例導(dǎo)入固本咳喘片中補骨脂素和異補骨脂素的含量測定高效液相色譜儀由哪些部分組成？高壓輸液泵、進樣器、色譜柱和檢測器等分別發(fā)揮了什么作用？中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法一、概述高效液相色譜法（HPLC）是一種現(xiàn)代色譜分析法，其基本方法是采用高壓輸液泵將流動相泵入到裝有填充劑的色譜柱中，注入的供試品被流動相帶入色譜柱內(nèi)進行分離后，各組分先后進入檢測器中檢測，最后由數(shù)據(jù)分析處理系統(tǒng)對各數(shù)據(jù)進行記錄和處理，從而完成定性和定量分析工作隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，為高效液相色譜法控制中藥及中藥制劑的質(zhì)量提供了更廣闊的前景，高效液相色譜法現(xiàn)已成為中藥及中藥制劑含量測定最常用的分析方法方法類型含量測定方法品種數(shù)儀器分析法高效液相色譜法1388氣相色譜法58薄層色譜法46紫外-可見分光光度法19化學(xué)分析法滴定分析、揮發(fā)油測定法等52中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法高效液相色譜法用于含量測定有外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法、加校正因子的主成分自身對照法、不加校正因子的主成分自身對照法和面積歸一化法中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法

《中國藥典》一部收載的中藥制劑的含量測定絕大多數(shù)采用的是高效液相色譜法中的外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法，其中外標(biāo)法最為常用含量測定方法中藥活性成分代表中藥制劑高效液相色譜外標(biāo)法黃芩苷柴黃片、防風(fēng)通圣丸、健兒消食口服液等大黃素和大黃酚黃連上清丸、復(fù)方大青葉合劑、冰黃膚樂軟膏等綠原酸金嗓開音丸、小兒咽扁顆粒、銀翹解毒顆粒等丹皮酚六味地黃丸、桂枝茯苓膠囊、杞菊地黃丸等二、儀器組成與工作原理

1.儀器組成高效液相色譜儀一般由高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、色譜系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)分析處理系統(tǒng)共同組成。所用儀器應(yīng)定期檢定并符合規(guī)定中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法

2.儀器構(gòu)造與功能中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法（1）高壓輸液系統(tǒng)由儲液瓶、過濾裝置、脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置等組成儲液瓶由化學(xué)惰性、耐腐蝕材料制成，有無色和棕色兩種。位置一般高于高壓輸液泵，在使用過程應(yīng)密閉流動相進入色譜柱前，先經(jīng)過過濾器，微孔濾膜將直徑大于0.45μm的固體顆粒雜質(zhì)攔截中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法高壓輸液泵是高效液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一，用以完成流動相的輸送任務(wù)柱塞往復(fù)泵：輸送流動相高壓輸液泵耐腐蝕、耐高壓、無脈沖、輸出流量范圍寬，流速恒定，泵體易于清洗和維修高壓輸液泵可分為恒壓泵和恒流泵兩類，常使用恒流泵，即壓力隨系統(tǒng)阻力改變而流量不變。泵性能的好壞直接影響到系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可靠性中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法（2）進樣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)的作用是將試樣引入色譜柱，要求進樣系統(tǒng)具有使用方便、重復(fù)性好、進樣量可變范圍大、不影響柱分離效能等特點常用進樣器有高壓進樣閥、六通進樣閥以及自動進樣器等裝置中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法（3）色譜分離系統(tǒng)由保護柱、色譜柱、恒溫裝置和連接閥組成保護柱是裝在進樣器與色譜柱之間的消耗性柱，具有防止供試品和進樣閥墊圈中的固體顆粒進入分析柱的作用。保護柱的填料與分析柱的填充劑相同，柱長為5cm左右，在分析50~100個供試品后需要更換保護柱芯中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法色譜柱是高效液相色譜儀的重要部件，由柱管、接頭和過濾片組成品牌填料C18/C8（直徑×長度，粒徑）如：AgilentZorbaxSB-C18(4.6×250mm,5μm)柱規(guī)格：一般采用直形柱管，標(biāo)準(zhǔn)填充柱柱管內(nèi)徑為1.6mm或3.9mm，長10cm~50cm，填料粒度5~10μm中藥制劑的定量分析中多使用十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）為填充劑的色譜柱、極性溶劑為流動相的反相色譜系統(tǒng)柱填料：基本材料多為粒度5~10μm或3~5μm的全多孔球形或無定型硅膠；化學(xué)鍵合相中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法（4）檢測系統(tǒng)用于檢測經(jīng)色譜柱分離后的組分濃度的變化，并由記錄儀繪出譜圖來進行定性、定量分析通用型檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器ELSD、示差折光檢測器選擇型檢測器：紫外檢測器UVD、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器、質(zhì)譜檢測器中藥制劑含量測定技術(shù)——高效液相色譜法（5）數(shù)據(jù)分析和處理系統(tǒng)由電腦控制色譜儀進行數(shù)據(jù)采集和處理的系統(tǒng)，具有色譜峰識別、基線校正、峰解析、計算保留時間、峰高、峰面積以及定量計算組分含量的功能鏈接未來崗位中藥制劑中有效成分或特征性指標(biāo)成分含量的測定對于評價中藥質(zhì)量的優(yōu)劣具有重要意義，同時也是藥品質(zhì)量檢驗中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本講內(nèi)容既是知識體系中的重點內(nèi)容，也是崗位工作中的重要技能作為一名藥品檢驗人員，須牢固樹立“質(zhì)量第一、安全操作”的意識，牢固掌握高效液相色譜法測定中藥制劑含量的操作