義翹講堂《成藥性抗體開發(fā)：從抗原設計到功能活性評價的全流程解析》

成藥性抗體開發(fā)：從抗原設計到功能活性評價的全流程解析任為抗體開發(fā)首席科學家北京義翹神州科技股份有限公司功能活性親和力檢測表位分析生物安全檢測高通量/大規(guī)模生產穩(wěn)定株開發(fā)人源化改造親和力成熟蛋白免疫RNA免疫DNA免疫細胞免疫雜交瘤技術噬菌體技術流式分選技術Beacon?技術抗原制備及免疫抗體制備及篩選抗體工程化及生產抗體功能評價綜合性抗體開發(fā)平臺抗原制備和動物免疫01HEK293/CHO膜蛋白InsectE.coli8,000+高質量現貨蛋白85%真核細胞表達100%自主研發(fā)2,000多種生物活性檢測和分析方法CRO定制服務數量>15,000個覆蓋常見藥物靶點>80%好的抗原是成功的一半重組蛋白類免疫原高純度、高活性、高親和力重組蛋白，支持高質量抗體的研發(fā)親和力HumanTROP-2(Cat:10428-H08H)KD:1.64nM活性EC50:1.6-4.8ng/mLHumanGSK3β(Cat:10044-H07B)SEC-HPLC純度>90%Claudin6(跨膜蛋白)KD:0.536nMEC50:5.4ng/mLCynoTROP-2(Cat:90893-C08H)親和力活性親和力活性EC50:1.3-3.9ng/mLKD:1.53nMEC50:0.8ng/mLMouseTROP-2Claudin18(跨膜蛋白)活性純度活性EC50:0.15-0.35μg/mL活性重組蛋白類免疫原多肽抗原制備特定表位抗體親水性、溶劑可及性免疫原性多肽二級結構、柔韌性AlphaFold結構預測多肽免疫成功開發(fā)特異性磷酸化抗體開發(fā)多肽設計軟件，有效提高抗體開發(fā)成功率多肽類抗原免疫效價好，更易獲得與天然構象蛋白結合的抗體mRNA免疫支持膜蛋白抗體開發(fā)序列設計mRNA合成LNP包封動物免疫抗體篩選僅需提供蛋白序列；RNA-LNP方式遞送，免疫應答效果好;整體開發(fā)周期短、成本優(yōu)勢；適用于各類型單抗篩選平臺。mRNA-LNP免疫案例——GPRC5D靶點雜交瘤融合篩選獲得38株陽性克隆，其中含25株流式優(yōu)勢抗體mRNA免疫17000+不同類型抗原的免疫經驗佐劑儲備庫弗氏佐劑、鋁佐劑、MF59、QS21Titermax、Mn、MPL

多種屬及品系可選小鼠（BALB/c，C57BL/6,SJL）【兔、羊駝、山羊、雞等】動物數量根據項目難度綜合評估、靈活選擇免疫劑量根據免疫原性、抗原類型、親和力要求調整免疫途徑皮內、皮下、腹腔、靜脈、淋巴結、脾內免疫周期滿足不同時效項目要求常規(guī)（7~12周）、快速（3周、5周）免疫方案設計動物免疫抗體開發(fā)和技術優(yōu)化02雜交瘤噬菌體展示文庫B細胞流式高質量的候選抗體：數百個苗頭分子親和力達到nM-pM水平適用于不同應用場景成藥性抗體制備技術平臺B細胞Beacon?抗體制備技術平臺介紹高效的抗體開發(fā)技術平臺：最全面的技術路線多種早期介入篩選方案分步的抗體開發(fā)技術優(yōu)化YYYYYYYYYYYYYYYYYSplenocytesMyelomaHybridomacellsScreeningAmplification&purification雜交瘤抗體開發(fā)技術技術路線成熟，成本優(yōu)勢；電融合技術大幅提升融合效率；上清介入多功能篩選，提高成功率；自主開發(fā)鼠單抗數量>20,000種700+技術服務項目經驗雜交瘤技術活性蛋白免疫細胞活性等多功能介入篩選13株亞克隆細胞穩(wěn)定株102株主克隆ELISA競爭抑制陽性(抽檢20株，6株細胞活性陽性）重組蛋白（細胞生物活性檢測EC502~8ng/mL）15株亞克隆ELISA競爭陽性40株細胞2~3輪有限稀釋835孔主克隆ELISA結合陽性融合后細胞接種42塊96孔細胞培養(yǎng)板10只小鼠高效價，挑選1只進行融合Balb/c、C57BL/6小鼠各免疫5只抗體親和力達到E-10級別IL15中和抗體開發(fā)案例雜交瘤技術13株抗體均可抑制細胞，其中11株優(yōu)于對照抗體抗體親和E-10~E-11MKD(M)kon(1/Ms)kdis(1/s)2.29E-103.91E+058.94E-05Response(nm)Response(nm)MM03HMM11HMM12HResponse(nm)Positivecontrol雜交瘤技術IL15中和抗體開發(fā)案例KD(M)kon(1/Ms)kdis(1/s)2.47E-101.97E+054.88E-05KD(M)kon(1/Ms)kdis(1/s)8.78E-114.15E+053.64E-05雜交瘤融合&主克隆篩選陽性克隆有限稀釋提基因質控交付：細胞株、抗體、序列亞克隆篩選表達純化生產純化周期節(jié)省20-30天20-30天14天7天7天新路線傳統(tǒng)路線技術路線對比新一代雜交瘤技術ID主克隆檢測亞克隆檢測主克隆提基因結果提基因與主克隆檢測對比1陽性-復測亞型為mIgM放棄mIgG1-陰性一致mIgM-陽性2非競爭，弱IgM,IgG弱交叉競爭非競爭，IgG弱交叉一致3非競爭，弱IgM,IgG弱交叉競爭非競爭，IgG弱交叉一致4非競爭，IgG弱交叉非競爭，IgG交叉非競爭，IgG弱交叉一致5非競爭，IgG弱交叉非競爭，IgG交叉非競爭，IgG弱交叉一致6非競爭，IgG交叉IgG無交叉非競爭，IgG弱交叉一致7非競爭，IgG弱交叉非競爭，IgG交叉非競爭，IgG弱交叉一致8ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致9ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致10ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致11ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致12ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致13ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致14ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致15ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致16ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致17ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陽性，流式陽性一致18非競爭，IgG弱交叉非競爭，IgG交叉ELISA陰性不一致19非競爭，IgG弱交叉二亞轉陰ELISA陰性不一致20ELISA陽性，流式陽性ELISA陽性，流式陰性ELISA陰性不一致21非競爭一亞轉陰ELISA陰性不一致21株有問題細胞，17株提基因結果與主克隆一致，成功率80%主克隆提基因驗證案例新一代雜交瘤技術周期更短直接交付序列通量更高成功率更高比原有雜交瘤周期節(jié)省20-30天提基因替代有限稀釋，一次提取上百個克隆省去雜交瘤篩選后再提基因步驟，避免基因傳代丟失、污染等風險挽救亞克隆轉陰或與主克隆結果不一致的細胞克隆新一代雜交瘤技術平臺優(yōu)勢更好面向工業(yè)客戶藥篩客戶新一代雜交瘤技術篩選方法多樣：固相、液相、細胞篩選；篩選策略靈活：差減、競爭、交叉、夾心；克隆上清介入評價：流式、ELISA、交叉。3,000+株單抗產品；支持多種應用：FACS、WB、IHC、IF抗體；保證高親和力、特異性抗體；新冠中和抗體親和力達E-12M，銷售總量＞800mg。建庫淘篩產品服務豐富的CRO服務經驗：500+服務；5~6周完成建庫、篩選和分子構建；提供多種抗體服務：抗獨特型抗體、中和抗體、納米抗體、

抗體親和力成熟。天然庫和免疫庫，多種免疫方案；多種屬：小鼠、兔子、羊駝、人；免疫庫的庫容高達109以上，序列插入正確率高達100%。噬菌體展示技術噬菌體展示技術篩選CAR-T靶點案例與天然構象結合最好用蛋白+細胞免疫，噬菌體平臺更適合scFv(CAR)篩選Nalm-6cellsJurkatcellsHEK293cellsscFv-1scFv-2scFv-3部分scFv鑒定結果噬菌體展示技術蛋白+細胞免疫細胞淘洗ELSIA陽性127株Nalm-6強陽性48株與293過表達和Nalm-6均結合，與jurkat不結合篩選要點CH2CH3CH2CH3FR1FR2FR3FR4CDR1CDR2CDR3VHH

效價達到128K，陽性/blank>2倍

庫容達到109

插入率100%，測序正確率>90%噬菌體介入檢測ELISA、種屬交叉、FACS

至少交付20+獨特序列

親和力主要在10-8~10-9

cell-free表達，5天得到VHHBloodCollectionRT-PCRConstructalibraryBiopanningElutionExpressionSDSActivityAffinityVHHELISA納米抗體開發(fā)平臺噬菌體展示技術PD-L1納米抗體篩選親和力檢測

SampleIDIC50(μg/mL）EC50(μg/mL）Benchmark10.144260.38Benchmark20.14190.33Nh3940.083440.23Nh4840.107230.51SampleIDKD(M)Kon(1/MS)Koff(1/S)Benchmark16.60E-096.96E+044.59E-04Benchmark26.37E-101.82E+051.16E-04Nh3941.44E-091.01E+051.45E-04Nh4843.42E-091.75E+055.98E-04Benchmark1Benchmark2Nh394Nh484噬菌體展示技術活性檢測

競爭活性

細胞活性單B細胞技術路線種屬適用范圍廣天然抗體對抗體多樣性高開發(fā)周期短抗體親和力高操作要求高

依賴大型設備VHDJHCY1VKJKCK單個B細胞技術Beacon?BDFACSAriaIIISplenocytes&PBMCSingleBCellSortingRT-PCR&InsertVectorExpressionFunctionAssayBCellCulture流式分選單B細胞技術VH/VL配對成功率達業(yè)內領先水平兔單B細胞培養(yǎng)陽性率高天然抗體序列抗體多樣性好可進行全人源抗體篩選Starkie,D.O.,etal.PLoSONE,2016,11(3):e0152282.Wilson,J.R.,Virology,2014,458-459:114–124.SeeberS.,etal.PLoSONE,2014,9(2):e86184.Chen,Y.,etal.EmergingMicrobes&Infections,2021,10(1),1390–1403.流式分選單B細胞技術BCellLysis成藥性抗體開發(fā)案例流式分選單B細胞技術靶點蛋白與多個因子相互作用并參與三個不同信號通路調控，篩選難度大篩選目標通路1通路2通路3靶點蛋白靶點蛋白靶點蛋白因子A因子C因子D因子E因子F因子B人猴交叉三個信號通路上同時阻斷六個細胞因子與靶點蛋白結合的抗體阻斷活性好于對照藥物24技術路線免疫原制備對照抗體表達純化、細胞系制備、細胞活性方法建立血清效價檢測（ELISA、FACS、競爭活性）流式單B分選分選階段：熒光標記抗原結合；培養(yǎng)上清：抗原/細胞結合、種屬交叉檢測質控階段：抗原結合、細胞結合、細胞活性、親和力檢測兔子免疫

常規(guī)免疫淋巴結鋁佐劑人鼠猴混合免疫人鼠交叉免疫人鼠猴交叉長周期免疫血清效價>62.5萬√√√√√√兔子免疫IgGFSC抗原抗原IgMSSC同時開展>6種免疫方案，有效增加抗體的多樣性多只動物效價良好，可滿足分選要求分選陽性細胞比例流式分選單B細胞技術成藥性抗體開發(fā)案例免疫原再刺激注：紅色箭頭指陽性對照抗體免疫原再刺激親和力檢測Ligandka(1/Ms)kd(1/s)KD(M)Chi2(RU2)U-value對照抗體9.631E+055.337E-055.542E-110.06991R04018.083E+051.022E-041.265E-100.1211R03897.810E+057.231E-059.259E-110.08241R03711.095E+065.356E-054.893E-110.161R03668.800E+053.043E-053.458E-110.05272R03221.77E+069.31E-055.27E-110.05251對照抗體R0401R0389R0371R0366R0322流式分選單B細胞技術與人細胞結合與猴細胞結合成藥性抗體開發(fā)案例注：紅色箭頭指陽性對照抗體流式分選單B細胞技術成藥性抗體開發(fā)案例SampleIC50(ng/mL)R0322/R037121R036616R038939R040139對照抗體

24SampleIC50(ng/mL)R0322/R037154R036619R038981R040174對照抗體

37SampleIC50(ng/mL)R04151106R0411562R0408/R0389157R0366186對照抗體

459成功篩選到在三個信號通路上活性均不低于對照抗體、且親和力好的單抗分子SampleIC50(ng/mL)R032230R037145R036624R038958R040173對照抗體

27SampleIC50(ng/mL)R03229R037124R036612R038928R040153對照抗體

18SampleIC50(ng/mL)R032212R037131R036626R038966R040168對照抗體

21信號通路1因子A與靶蛋白的阻斷活性信號通路1因子B與靶蛋白的阻斷活性信號通路2因子C與靶蛋白的阻斷活性信號通路3因子D與靶蛋白的阻斷活性信號通路3因子E與靶蛋白的阻斷活性信號通路3因子F與靶蛋白的阻斷活性27Beacon?光導單B細胞克隆技術ImmunizationandASCEnrichmentNanopenLoadOEPGravityIn-ChannelFluorescent”Bloom”AssayOEPNanopenExportVH/VLrecovery,cloning,expression30-60minutes30-60minutes3-4minutesperNanopenImportExport天然抗體序列；抗體多樣性好；實驗周期短，節(jié)省研發(fā)時間；高效篩選，1天內可完成高達5種功能檢測；非競爭競爭非競爭競爭通過技術優(yōu)化，有效提高beacon?競爭檢測靈敏度競爭方法優(yōu)化Beacon?光導單B細胞克隆技術編號人蛋白猴蛋白EC50(ng/mL)M010135.1334.39M0121154.33110.37M01667.326.51NBL-02028.506.08LBL-01920.107.73編號IC50(ng/mL)M0101357.14M01211644.20M016667.42NBL-020169.44TNFR2成藥性抗體篩選1.克隆M0166結合活性和競爭活性均好于對照抗體Beacon?光導單B細胞克隆技術與人TNFR2結合競爭活性與猴TNFR2結合編號細胞活性ED50(μg/mL)ADCC活性ED50(ng/mL)M01011.321.53M01211.113.26M01660.73.96NBL-0201.25.84LBL-0191.319.752.克隆M0166細胞活性和ADCC均好于對照抗體編號蛋白KD(M)kon(1/Ms)kdis(1/s)M0101人蛋白3.68E-092.70E+059.93E-04M01216.84E-092.70E+051.85E-03M01665.35E-091.74E+059.33E-04NBL-0207.73E-092.69E+052.08E-03M0101猴蛋白3.18E-093.90E+051.24E-03M01216.39E-094.30E+052.75E-03M01663.75E-092.79E+051.05E-03NBL-0205.22E-094.39E+052.30E-033.克隆M0166親和力檢測結果Beacon?光導單B細胞克隆技術細胞活性ADCC活性GPRC5D-NanoDisc蛋白篩選抗體GPRC5D結構VLP平臺Nanodisc平臺Beacon?光導單B細胞克隆技術VLP平臺Nanodisc平臺EC50:3-10ng/mLEC50:20.6ng/mLEC50(ng/mL)M0165M0173對照抗體GPRC5D-VLP1.682.736.88GPRC5D-Disc2.233.535.33細胞結合1.5472.1682.835ADCC0.550.831.51.在與GPRC5D-VLP和GPRC5D-Disc的結合檢測上，M0165和M0173結合活性均優(yōu)于對照抗體2.M0165和M0173細胞結合和ADCC殺傷活性均優(yōu)于對照抗體IDkon(1/Ms)kdis(1/s)KD(M)對照抗體4.91E+055.24E-041.07E-09M01651.98E+062.85E-041.44E-10R01734.03E+054.15E-041.03E-093.M0173親和力與對照抗體親和力水平相當，M0165親和力比對照抗體約高10倍細胞結合ADCCBeacon?光導單B細胞克隆技術GPRC5D-VLP結合GPRC5D-Disc結合生物活性(EC50)親和力檢測抗體生產和工程化改造03優(yōu)勢：方法成熟，臨床療效良好問題：仍有親和力降低或潛在的免疫原性抗體人源化方法

–CDR移植CDR移植FR替換核心氨基酸保留CDR親本抗體FR人源抗體FR核心氨基酸抗體人源化TargetIDConc.(mg/L)HumannessSars-Cov2-SpikeMM57-C1-mAb249.5/MM57-C2-chAb141/MM57-436597%MM57-624897.4%MM57-1316596.10%MM57-1419097%MM57-1519897.4%MM57-1810097%MM57-2510697.8%MM57-3017397.8%MM57-3418497.8%MM57-3826797.8%mAb_humanized_VLmAb_humanized_VH抗體人源化鼠抗人源化案例表達量和同源性MM57-C1-mAb:親本鼠抗；MM57-C2-chAb:人鼠嵌合抗體。mAb_VLmAb_VHTargetIDInhibition(%)IC50(μg/ml)(Pseudovirus)Sars-Cov2-SpikeMM57-C1-mAb87%0.548MM57-C2-chAb85%0.341MM57-487%0.268MM57-685%0.685MM57-1381%<0.1MM57-1480%0.41MM57-1581%0.375MM57-1876%0.148MM57-2572%0.458MM57-3074%0.784MM57-3474%0.307MM57-3875%0.438鼠抗人源化案例抗體人源化中和活性檢測MM57-C1-mAb:親本鼠抗；MM57-C2-chAb:人鼠嵌合抗體。TargetIDKD(M)Kon(1/Ms)Koff(1/s)Sars-Cov2-SpikeMM57-C1-mAb1.74E-103.30E+055.74E-05MM57-C2-chAb2.51E-112.79E+056.99E-06MM57-47.52E-122.01E+051.51E-06MM57-6<1.0E-121.91E+05<1.0E-07MM57-13<1.0E-121.91E+05<1.0E-07MM57-14<1.0E-121.89E+05<1.0E-07MM57-154.31E-112.16E+059.30E-06MM57-182.83E-111.73E+054.89E-06MM57-254.85E-112.17E+051.05E-05MM57-301.38E-101.92E+052.65E-05MM57-349.54E-112.07E+051.98E-05MM57-388.53E-111.98E+051.69E-05抗體人源化鼠抗人源化案例親和力檢測MM57-C1-mAb親本鼠抗MM57-C2-chAb嵌合抗體MM57-4MM57-6MM57-13MM57-14MM57-15MM57-18MM57-25MM57-34MM57-38MM57-30納米抗體人源化案例ELISAEC50FACSEC50抗體人源化結合活性和細胞活性檢測Ligandka

(1/Ms)kd

(1/s)KD

(M)SJ-2-14.835E+058.440E-041.746E-09SSJ8-H-24.043E+058.550E-042.114E-09SSJ8-H-33.900E+059.460E-042.426E-09SSJ8-H-84.368E+058.290E-041.898E-09SSJ8-H-94.255E+058.140E-041.913E-09SSJ8-H-104.206E+058.440E-042.006E-09SSJ8-H-154.483E+058.540E-041.905E-09SSJ8-H-164.641E+058.820E-041.901E-09SJ-2-1SSJ8-H-2SSJ8-H-3SSJ8-H-8SSJ8-H-9SSJ8-H-10SSJ8-H-15SSJ8-H-16抗體人源化親和力檢測納米抗體人源化案例納米抗體親和力成熟······GSTSSEDAMG······AISWTHNMEPYYAD······YSSPLIEYGY······VHH“l(fā)ying”ratherthan“onto”theepitopeVHHresidueswithin5AfromtheantigenarehighlightedResiduesthatareclosetotheantigenbutnotyetestablishedinteractionshavethepotentialtoincreasebindingaffinity.要求：親和力提升5~10倍抗體親和力成熟CDR-H126

G27

S28T29S30S31E32D33A34M35G-

PTAINDRKEQASFNHGWKQ-AE----ACDR-H250A51I52S52AW52BT53H54N55M56E57P58Y59Y60A61D---INDHYSPTAEQEQFLNHYQ----S

-CDR-H394Y95S96S97P98L99I100E100AY101G102Y---ARKESTDEAVGQ----······GSTSSEDAMG······AISWTHNMEPYYAD······YSSPLIEYGY

······組合突變建庫抗體親和力成熟親和力檢測結果IDKD(M)byBLI(HEK293)AffinityincreaseSAF51-N0631.22E-099.7foldSAF51-N0832.00E-095.9foldSAF51-N0532.11E-095.6foldSAF51-N0942.46E-094.8foldSAF51-C22.52E-094.7foldSAF51-N0932.61E-094.5foldSAF51-N0452.98E-094.0foldSAF51-N0883.29E-093.6foldSAF51-N2394.01E-092.9foldSAF51-N0234.54E-092.6foldSAF51-N2694.50E-092.6foldWT1.18E-08-抗體親和力成熟哺乳動物細胞高通量瞬轉表達抗體抗體序列引物載體構建293/CHO瞬時表達抗體純度>90%放大生產新冠康復病人B細胞測序表達>1000抗體14株中和抗體結構解析動物實驗活性驗證GeniRobot“全自動分子構建平臺”親和純化中和活性驗證放大生產自主研發(fā)的無血清培養(yǎng)基高通量：每周>1000個抗體/項目的生產覆蓋不同規(guī)模：0.1mg-千克級抗體生產高通量瞬轉表達抗體構建和表達技術優(yōu)化線性表達框制備96孔板培養(yǎng)抗體表達上清活性檢測不需要質粒構建、測序、質粒提取可保持所表達抗體的功能活性2天快速完成線性框制備工作高通量的抗體表達初篩成功合成細胞無法表達的抗體片段活性與細胞表達相當3個小時完成VHH&scFv合成高通量的抗體表達初篩抗體構建和表達線性表達框制備抗體無細胞表達平臺Top3minipool1-2萬個cells/孔生長培養(yǎng)基生長培養(yǎng)基表達量評估0.5個cells/孔克隆培養(yǎng)基克隆培養(yǎng)基克隆培養(yǎng)基補料表達量評估細胞成像篩選擴增單克隆60個PDL傳代穩(wěn)定性測試PCB表達量評估表達量評估電轉染篩選擴增MSX加壓MSX加壓表達量評估表達量評估CHO-K1來自英國衛(wèi)生局完整的運送追蹤支持文件合規(guī)完整的實驗報告和原始記錄生產用CHO-K1穩(wěn)定株穩(wěn)定株開發(fā)服務上、下游工藝開發(fā)和放大擁有完善的細胞培養(yǎng)工藝開發(fā)平臺，通過DOE軟件對工藝開發(fā)方案輔助設計。有豐富的瞬轉和穩(wěn)轉工藝開發(fā)和放大經驗。上游工藝開發(fā)/放大具備完善的蛋白質純化工藝開發(fā)技術平臺，多套國際一流的工藝設備。可提供小試工藝到中試放大工藝階段的技術服務，滿足客戶在藥物開發(fā)和產品申報各階段的需求。下游工藝開發(fā)/放大Applikon8聯罐反應器Applikon15L反應器全自動細胞計數儀生化分析儀STR200一次性反應器AKTApure150德國L?ser冰點滲透壓儀Thermo紫外檢測儀上、下游放大生產原核車間真核車間5000多平米的GMP潔凈車間，同時擁有原核、真核生產車間GMP級別生產抗體功能性、安全性評價04?抗體與抗原?抗體與FcγRs/FcRn/C1q?蛋白與蛋白?蛋白與小分子?親和力排序?表位分析廣泛的檢測范圍豐富的產品支持親和力檢測SPR案例展示BLI案例展示OCTETBiacore8KBiacoreT200JToxicolPathol.2015Jul;28(3):133–139.中和活性ADCC(ADCP)CDC內吞活性報告基因酶活因子釋放增殖抑制分化凋亡趨化粘附體外藥效評價Anti-CD38抗體酶活抑制檢測Anti-Nectin4抗體內化Anti-OX40誘導CD4+T分泌IL2檢測細胞遷移抑制試驗血管生成