DB11-T 1648-2019 櫻桃砧木組培快繁技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20

B05

備案號(hào)：63653-2019DB11

北京市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB11/T1648—2019

櫻桃砧木組培快繁技術(shù)規(guī)程

Technicalregulationforcherryrootstocksmicropropagation

2019-06-18發(fā)布2019-10-01實(shí)施

北京市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB11/T1648—2019

櫻桃砧木組培快繁技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了櫻桃砧木組培快繁過(guò)程中容器、工具的清洗與滅菌、培養(yǎng)基的配制、外植體的選取及

清洗、接種、初代培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽過(guò)渡等技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于海櫻系列、藍(lán)丁系列和吉塞拉系列櫻桃砧木苗的組織培養(yǎng)快速繁殖。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

NY/T2306—2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

外植體explant

從自然生長(zhǎng)的活體植物上獲取的用于建立植物組培快繁體系的起始材料。

[NY/T2306—2013，定義3.8]

3.2

接種inoculation

將消毒后的外植體在無(wú)菌條件下接入培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基中的過(guò)程。

改寫(xiě)NY/T2306—2013，定義3.3。

3.3

初代培養(yǎng)primaryculture

消毒后的外植體接種在無(wú)菌培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，獲得初級(jí)無(wú)菌植物材料的培養(yǎng)階段。

3.4

繼代subculture

將培養(yǎng)材料從老培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)接入新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)的過(guò)程。

[NY/T2306—2013，定義3.2]

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3.5

叢生芽clusterbuds

組織培養(yǎng)過(guò)程中誘導(dǎo)植物器官或愈傷組織產(chǎn)生的簇狀芽。

3.6

瓶苗invitroplantlet

組織培養(yǎng)過(guò)程中生長(zhǎng)在培養(yǎng)容器中的無(wú)菌苗。

4容器、工具的清洗與滅菌

培養(yǎng)容器和接種工具的清洗應(yīng)符合NY/T2306—2013中6.1、6.2的要求，滅菌應(yīng)符合NY/T2306—2013

中8.1、8.2、8.4的要求。

5培養(yǎng)基的配制

櫻桃砧木組培快繁所選用的基本培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，MS培養(yǎng)基的成分和含量參見(jiàn)附錄A。不同培養(yǎng)

階段添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基配方參見(jiàn)附錄B。培養(yǎng)基的配制和滅菌應(yīng)符合NY/T2306—2013第7章

的要求。

6外植體的選取及清洗

6.1外植體母株選取

選擇品種純正、來(lái)源可靠、生長(zhǎng)旺盛、無(wú)病蟲(chóng)害的優(yōu)良植株作為外植體的母株。

6.2外植體采集

6.2.1可于2～3月從母株上選取健壯的一年生枝條，放在20℃～25℃的房間內(nèi)水培，每天換水，待

枝條上葉芽萌發(fā)至2cm以上時(shí)，剪下作為外植體備用；也可于5～9月選取母株上半木質(zhì)化的新梢作為

外植體備用，宜在植物表面露水干后采集新梢。

6.2.2采集的外植體宜用塑料袋包裝并做好品種標(biāo)記，低溫儲(chǔ)運(yùn)。

6.3外植體清洗

去除外植體葉片，根據(jù)節(jié)間長(zhǎng)短剪取帶1～2個(gè)芽的2cm～3cm莖段，用中性洗滌劑溶液將外植體表

面洗凈，流水沖洗10min～30min，備用。

7接種

7.1接種前準(zhǔn)備

提前30min打開(kāi)超凈工作臺(tái)、操作間、緩沖間和更衣間等處的紫外燈進(jìn)行消毒，同時(shí)打開(kāi)電熱滅菌

器。關(guān)掉紫外燈后，超凈工作臺(tái)宜開(kāi)啟10min～20min后使用。

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DB11/T1648—2019

接種人員穿戴好專(zhuān)用鞋、工作服、帽子和口罩進(jìn)入接種室。將手、臺(tái)面、接種工具用75%酒精擦拭，

將接種工具插入電熱滅菌器滅菌，滅菌后置于擱置架上冷卻、備用。

7.2接種操作

7.2.1將清洗后的外植體轉(zhuǎn)移到無(wú)菌瓶中，倒入75%酒精直至沒(méi)過(guò)外植體表面，輕搖瓶身30s～60s

后將酒精倒去，用無(wú)菌水沖洗外植體1～2遍。

7.2.2用0.1%升汞消毒液浸沒(méi)外植體材料，消毒5min～10min，浸泡過(guò)程中不斷輕搖瓶身，消毒結(jié)

束后，倒出并回收消毒液，外植體材料用無(wú)菌水清洗3～4遍。

7.2.3消毒后的外植體置于放有消毒濾紙的培養(yǎng)皿中，待吸干表面水分后，底端向下豎直插入到芽誘

導(dǎo)培養(yǎng)基上，及時(shí)蓋緊瓶蓋或封口并扎緊。培養(yǎng)基配方參見(jiàn)附錄B。

7.2.4將植物品種代號(hào)、培養(yǎng)基代號(hào)、接種日期及接種人等信息標(biāo)示到培養(yǎng)瓶上。

8初代培養(yǎng)

將接種好外植體的培養(yǎng)瓶放入溫度為25℃±2℃的培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，光照強(qiáng)度1500Lux～2500

Lux，光照時(shí)間10h/d～12h/d，培養(yǎng)周期為30d左右。

培養(yǎng)過(guò)程中每周要檢查1～2次，發(fā)現(xiàn)外植體褐化、污染、死亡時(shí)應(yīng)立即剔除。

9繼代增殖培養(yǎng)

9.1繼代前準(zhǔn)備

將要繼代的培養(yǎng)瓶表面用75%的酒精擦拭消毒。其它準(zhǔn)備見(jiàn)7.1。

9.2繼代操作

9.2.1在超凈工作臺(tái)臺(tái)面上距外側(cè)邊緣10cm～20cm處打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶蓋，從母瓶中取出要繼代的瓶苗，

去除基部褐化的組織和部分葉片。

9.2.2把大的叢生芽團(tuán)切割成單芽或含2～4個(gè)芽的芽叢，轉(zhuǎn)接到新配制的增殖培養(yǎng)基上。單芽高度為

1cm左右；芽叢每個(gè)芽高可小于1cm。

9.2.3每個(gè)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)接芽的數(shù)量因培養(yǎng)容器大小而異，直徑7.5cm～8cm、容積350mL～370mL

的培養(yǎng)瓶中可轉(zhuǎn)接8株/瓶或5叢/瓶左右。轉(zhuǎn)接芽基部插入培養(yǎng)基0.5cm左右，分布均勻，及時(shí)蓋緊瓶

蓋或封口并扎緊。

9.2.4將植物品種代號(hào)、培養(yǎng)基代號(hào)、繼代日期及人員信息標(biāo)示到培養(yǎng)瓶上。

9.3增殖培養(yǎng)

將繼代轉(zhuǎn)接好的瓶苗放入溫度22℃±2℃的培養(yǎng)室培養(yǎng)，光照強(qiáng)度1500Lux～2500Lux，光照時(shí)間

10h/d～12h/d左右，培養(yǎng)周期為30d左右。

培養(yǎng)過(guò)程中每周至少檢查1次，發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)立即剔除；在下次繼代前記錄增殖倍數(shù)。

10壯苗培養(yǎng)

對(duì)生根培養(yǎng)前高度小于2cm的瓶苗，可進(jìn)行一次壯苗培養(yǎng)。其它操作見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第9章。

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11生根培養(yǎng)

將高度為2.0cm～3.0cm的單芽轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，直徑7.5cm～8cm、容積350mL～370mL的培

養(yǎng)瓶中可轉(zhuǎn)接10株/瓶左右。其它操作見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)第9章。

12移栽過(guò)渡

12.1移栽前準(zhǔn)備

宜選擇溫度、光照、濕度可調(diào)控的溫室作為移栽過(guò)渡的場(chǎng)所。移栽前應(yīng)對(duì)環(huán)境進(jìn)行消毒，消毒方法

參見(jiàn)附錄C。

宜選擇草炭和蛭石作為基質(zhì)。在容器中先裝入1/2草炭，上面再鋪一層蛭石，用0.5g/L的多菌靈溶

液將基質(zhì)澆透后備用。

12.2移栽

12.2.1將長(zhǎng)出3～5條不定根的瓶苗從培養(yǎng)容器中取出，放入清水中洗去培養(yǎng)基，瀝水后進(jìn)行移栽。

12.2.2移栽時(shí)在基質(zhì)上打孔，孔距2cm左右，孔大小以可容納組培苗根系為宜。將根系植入孔內(nèi)，覆

土至組培苗根頸處，稍壓實(shí)，保持苗不傾斜。

12.2.3栽好后插上牌子，寫(xiě)明品種和移栽日期。

12.3管理

12.3.1溫室內(nèi)溫度宜控制在20℃～28℃。

12.3.2移栽后2周內(nèi)相對(duì)濕度宜控制在90%左右，移栽后3～4周可逐漸降低相對(duì)濕度，4～6周后相

對(duì)濕度可保持在60%左右。

12.3.3移栽后4周內(nèi)光照強(qiáng)度宜為4000Lux～7000Lux，之后可逐漸增大光照強(qiáng)度至自然光。

12.3.4每周?chē)娛?0%多菌靈可濕性粉劑1500倍液1次，于苗上方15cm處均勻懸掛誘蟲(chóng)板。

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附錄A

（資料性附錄）

MS培養(yǎng)基成分和含量

MS培養(yǎng)基成分和含量見(jiàn)表A.1。

表A.1MS培養(yǎng)基成分和含量

含量

名稱(chēng)MS培養(yǎng)基成分

（mg/L）

硝酸鉀KNO31900

大

硝酸銨NH4NO31650

量

氯化鈣CaCl2·2H2O440

元

硫酸鎂MgSO4·7H2O370

素

磷酸二氫鉀KH2PO4170

鐵乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA37.3

鹽硫酸亞鐵FeSO4·7H2O27.8

硫酸錳MnSO4·4H2O22.3

硫酸鋅ZnSO4·7H2O8.6

微

硼酸H3BO36.2

量

碘化鉀KI0.83

元

鉬酸鈉NaMoO4·2H2O0.25

素

硫酸銅CuSO4·5H2O0.025

氯化鈷CoCl2·6H2O0.025

肌醇C6H12O6100

有甘氨酸C2H5NO22.0

機(jī)煙酸C6H5NO20.5

物鹽酸吡哆辛（VB6）C8H11NO3-HCl0.5

鹽酸硫胺素（VB1）C12H17ClN4OS-HCl0.1

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附錄B

（資料性附錄）

組培各階段的培養(yǎng)基配方

組培各階段的培養(yǎng)基配方見(jiàn)表B.1.

表B.1組培各階段的培養(yǎng)基配方

6-BANAA糖瓊脂

用途基本培養(yǎng)基注意事項(xiàng)

（mg/L）（mg/L）（g）（g）

宜用不透

芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS0.50306.0

氣膜封瓶

增殖培養(yǎng)基MS0.5～1.00～0.1306.0口

宜用透氣

壯苗培養(yǎng)基MS0～0.50.1～0.2306.0

膜封瓶口

生根培養(yǎng)基1/2MS00.5～1.0206.0

瓊脂的強(qiáng)度為