《豬細(xì)管凍精解凍復(fù)蘇及深部輸精技術(shù)規(guī)程》

ICS65.020.30

B43

DB52DB52/TXXXX—XXXX

貴州省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB52/TXXXX—XXXX

豬細(xì)管凍精解凍復(fù)蘇及深部輸精技術(shù)規(guī)程

Technicalprotocolfordeepspermdeliveryofporcinefinetubefrozensemen

(征求意見(jiàn)稿)

2022-XX-XX實(shí)施

2022-XX-XX發(fā)布

貴州省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

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豬細(xì)管凍精解凍復(fù)蘇及深部輸精技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件制定了豬細(xì)管冷凍精液深部輸精的技術(shù)程序，規(guī)定了發(fā)情鑒定、凍精解凍、稀釋分裝、深

部輸精、妊娠檢查等技術(shù)環(huán)節(jié)要求等。

本文件適用于豬細(xì)管冷凍精液（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“豬凍精”）深部輸精操作。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可缺少的條款。其中，注日期的引用

文件，僅注日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件,其最新版本（包括所有的修改單）適

用于本文件。

GB/T5458液氮生物容器

GB23238—2021種豬常溫精液

NY/T636豬人工授精技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1冷凍精液frozensemen

經(jīng)特殊方法處理的精液超低溫冷凍后在液氮中（-196℃）長(zhǎng)期保存。

[來(lái)源：GB20557-2006，3.5]

3.2細(xì)管冷凍精液Frozensperminfinetubes

原精經(jīng)過(guò)特殊處理液灌注到細(xì)管中，再通過(guò)超低溫冷凍程序處理制成的凍精產(chǎn)品，簡(jiǎn)稱(chēng)“細(xì)管凍

精”。細(xì)管凍精可以在液氮中（-196℃）長(zhǎng)期保存。

3.3細(xì)管冷凍精液解凍Thawingoffrozensperminfinetubes

細(xì)管凍精使用前迅速放入一定溫度的水浴鍋解凍，使其精子快速?gòu)?fù)蘇的方法。

3.4深部輸精DeepSpermTransfusion

通過(guò)人工采用套管式輸精管將精液通過(guò)子宮頸皺褶輸配到子宮內(nèi)，使其受孕的輔助技術(shù)，稱(chēng)深部

輸精。

4.豬冷凍精液深部輸精技術(shù)的構(gòu)成

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豬冷凍精液深部輸精技術(shù)程序包括發(fā)情鑒定、精液解凍、稀釋分裝、深部輸精、妊娠檢查等5個(gè)

技術(shù)環(huán)節(jié)，其中母豬發(fā)情鑒定細(xì)分有3個(gè)階段。深部輸精技術(shù)流程見(jiàn)圖1。

發(fā)情初期（見(jiàn)5.1）

1.母豬發(fā)情鑒定（見(jiàn)第5部分）發(fā)情中期（見(jiàn)5.2）

發(fā)情末期（見(jiàn)5.3）

2.凍精解凍（見(jiàn)第6部分）

3.稀釋、分裝（見(jiàn)第7部分）

4.深部輸精（見(jiàn)第8部分）

5.母豬妊娠檢查（見(jiàn)第9部

分）

圖1豬冷凍精液深部輸精流程圖

（見(jiàn)9）

5母豬發(fā)情鑒定

5.1發(fā)情初期

發(fā)情初期主要表現(xiàn)如下：

a）外觀表現(xiàn)興奮不安，不停發(fā)出叫聲，游走，采食量減少，追逐、爬跨其它母豬。公豬試情不

接受其豬爬跨，手用力按壓發(fā)情母豬的背部，此時(shí)母豬會(huì)表現(xiàn)不停走動(dòng)。

b）生殖器官變化陰戶(hù)腫脹、松弛、翻開(kāi)充血、發(fā)亮，有稀薄透明黏液流出，黏液不呈牽絲。

5.2發(fā)情中期

發(fā)情中期主要變化如下：

a）外觀表現(xiàn)不愿意采食，多表現(xiàn)呆立不動(dòng)，愿意接受其它豬爬跨，即靜立反射。公豬試情愿意

接受公豬爬跨、驅(qū)趕不走，手用力按壓發(fā)情母豬的背部，此時(shí)母豬會(huì)站立不動(dòng)。這是配種的最佳時(shí)期。

b）生殖器官變化陰戶(hù)腫脹、紅潤(rùn)，有大量透明而黏稠的黏液流出，呈牽絲狀。

貴州省標(biāo)準(zhǔn)化公共服務(wù)平臺(tái)注：如流出的黏液為化膿狀、呈豆腐渣樣、顏色偏黃或帶有血絲、氣味臭等癥狀，則為嚴(yán)重炎癥，應(yīng)采取先

治療，治愈后再進(jìn)行輸精。

5.3發(fā)情末期

發(fā)情末期主要變化如下：

a）外觀表現(xiàn)母豬興奮度降低，神情表現(xiàn)平靜，開(kāi)始正常采食。不接受其他豬爬跨，手用力按

壓發(fā)情母豬的背部，此時(shí)母豬會(huì)表現(xiàn)不停走動(dòng)。

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b)生殖器官變化外陰陰戶(hù)腫脹、紅潤(rùn)，有大量透明而黏稠的黏液流出，呈牽絲狀。

6細(xì)管凍精解凍

6.1解凍前準(zhǔn)備

6.1.1細(xì)管冷凍精液的貯存

貯存細(xì)管冷凍精液的液氮生物容器性能完好，符合GB/T5458的規(guī)定。由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，及時(shí)補(bǔ)充液

氮的消耗，確保細(xì)管冷凍精液始終浸泡在液氮中。

6.1.2稀釋液的配制

稀釋液現(xiàn)配現(xiàn)用，使用前應(yīng)置于37℃水浴中預(yù)熱待用。稀釋液配方見(jiàn)附錄A，商品稀釋液的使用

按說(shuō)明書(shū)要求。

6.2解凍

6.1測(cè)算受體母豬需要解凍細(xì)管冷凍精液的數(shù)量

6.1.1確定母豬輸配的頭數(shù)

根據(jù)受體母豬發(fā)情數(shù)量確定母豬輸配的頭數(shù)。

6.1.2受體母豬需要輸配有效精子數(shù)

根據(jù)受體母豬品種，確定需要輸配有效精子數(shù)，參照GB232382021.4.表1。

6.1.3每頭母豬輸精需要的細(xì)管冷凍精液數(shù)量

根據(jù)細(xì)管冷凍精液的質(zhì)量參數(shù)（精子活力、每劑量中前向運(yùn)動(dòng)精子數(shù)）、受體母豬需要輸配的有

效精子數(shù)及輸精方式等綜合因素，具體測(cè)算每頭母豬輸精需要的細(xì)管冷凍精液數(shù)量。參照附錄B。

6.2解凍操作

用長(zhǎng)柄鑷子將細(xì)管冷凍精液從液氮容器中快速取出，冷凍精液離開(kāi)液氮低溫環(huán)境不得超過(guò)5s。取

出的細(xì)管冷凍精液應(yīng)迅速置于37℃水浴中晃動(dòng)3s，立即移至50℃水浴中輕微晃動(dòng)13s取出，用吸水

紙擦干管壁上的水珠，查看封口是否嚴(yán)密，管壁有無(wú)破損。

貴州省標(biāo)準(zhǔn)化公共服務(wù)平臺(tái)7稀釋、分裝

7.1稀釋

凍精解凍后，用20倍的稀釋液去稀釋精液。

7.2分裝

細(xì)管冷凍精液解凍后，剪去細(xì)管封口端，用細(xì)管推針將精液分別推至已預(yù)熱的輸精瓶（袋）中，

受體為外來(lái)品種或培育品種的稀釋至60mL/瓶（袋）；受體母豬為本地品種的，稀釋至40mL/瓶（袋），

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搖勻后放入17℃待用。

7.3貼上標(biāo)簽

及時(shí)將配好的輸精瓶或輸精袋上標(biāo)記公豬品種、耳號(hào)等相關(guān)信息，放入17℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

7.4使用要求

細(xì)管冷凍精液解凍輸配要求現(xiàn)配現(xiàn)用；輸配前精液從17℃恒溫箱中取出，需要用毛巾包住輸精瓶

使其保溫。

8深部輸精

8.1輸精時(shí)間確定

發(fā)情母豬出現(xiàn)靜立反射后8h～12h進(jìn)行第一次輸精，之后間隔8h～12h進(jìn)行第2次輸精。

8.2輸精前準(zhǔn)備

8.2.1輸精人員需要經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)訓(xùn)練，并具有一定的專(zhuān)業(yè)知識(shí)。

8.2.2輸精工作時(shí)應(yīng)穿著潔凈工作衣、帽，洗凈雙手。

8.2.3確認(rèn)與配母豬的耳號(hào)

從精液貯存箱取出解凍分裝好的輸精瓶（20mL精液），確認(rèn)母豬品種、耳號(hào)及配種方案后，

開(kāi)始輸配。

8.2.4母豬輸精前應(yīng)用潔凈水清洗外陰、尾根及臀部周?chē)?，再用溫水浸濕的毛巾熱敷，擦干外陰?/p>

8.2.5深部輸精

可采用單只獨(dú)立包裝的一次性深部輸精管，其外套管、內(nèi)導(dǎo)管及海綿頭的組成，見(jiàn)NY/T636-

2021中8.3的結(jié)構(gòu)圖示。經(jīng)產(chǎn)母豬采用輸精頭直徑20mm(大號(hào))輸精管，后備母豬采用輸精頭直徑

15mm(小號(hào))輸精管。

8.3輸精操作

8.3.1輸精操作按以下步驟

a)從密封袋中取出輸精管，檢查海綿頭是否松動(dòng)，海綿頭涂潤(rùn)滑劑，手不得接觸輸精管前2/3

部分。

貴州省標(biāo)準(zhǔn)化公共服務(wù)平臺(tái)b）輸精管以45°角向上插入母豬生殖道內(nèi)，當(dāng)有阻力時(shí)，緩慢逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，同時(shí)前后移動(dòng)，直

到輸精管被子宮頸鎖定(輕輕回拉不動(dòng))。

c）待母豬平靜5min左右后，將內(nèi)管緩慢向前推送，如遇阻力時(shí)可等待20s～30s繼續(xù)向前推

送，通過(guò)3～5個(gè)褶皺，感覺(jué)前方空曠即可，插入深度一般為10～15cm。

d)從精液貯存箱取出解凍并分裝好的精液瓶（袋），再次確認(rèn)公豬品種、耳號(hào)及配種預(yù)案。搖

均精液，剪去瓶嘴（或袋口），連接內(nèi)接內(nèi)導(dǎo)管輸精口。

e)通過(guò)母豬子宮收縮自動(dòng)吸收精液或緩慢擠壓輸精液瓶（袋）向子宮內(nèi)輸入精液，如果出現(xiàn)擠

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壓困難，可適當(dāng)回撤內(nèi)導(dǎo)管或暫停緩解母豬緊張片刻，再次擠壓精液瓶（袋），精液輸入過(guò)程約

3min～5min。

注：如發(fā)生回流，可能輸精管未處于正確位置，需要輕輕抽出內(nèi)管再重新插入。

f)輸精完成后，將內(nèi)管連同輸精瓶（袋）一并緩慢抽出，內(nèi)管抽出外管抬高保持30s左右，再

順時(shí)針輕輕拔出外管。

g)為防止精液倒流可采取人工強(qiáng)制驅(qū)趕母豬前行活動(dòng)、雙手按壓撫摸母豬背部?jī)蓚?cè)或驅(qū)趕公豬

與母豬產(chǎn)生性刺激，促使子宮收縮、蠕動(dòng)形成負(fù)壓減少精液倒流。

8.3.2記錄母豬深部輸精的相關(guān)信息，記錄表見(jiàn)附錄C。

9妊娠檢查

9.1通過(guò)外部觀察，母豬配種后第2個(gè)發(fā)情期內(nèi)未出現(xiàn)返情，則可初步判定為母豬已妊娠。

9.2必要時(shí)采用B超檢查判斷母豬是否妊娠。

10生產(chǎn)記錄表

輸精后應(yīng)記錄輸精母豬的品種、耳號(hào)、發(fā)情日期、輸精日期、輸精操作人員及使用細(xì)管冷凍精液

的公豬耳號(hào)等信息，具體見(jiàn)附錄C.2。

貴州省標(biāo)準(zhǔn)化公共服務(wù)平臺(tái)

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附錄A

（資料性附錄）

凍精解凍后稀釋液的配制

解凍后稀釋液配方

葡萄糖（C6H12O6）3.7g

檸檬酸鈉（C6H5Na3O70.6g

碳酸氫鈉(NaHco2)0.125g

乙二胺四乙酸（EDTA）0.125g

氯化鉀（KCL2）0.075g

雙蒸水（ddH2O）100mL

解凍后稀釋液配制：電子天平分別稱(chēng)取葡萄糖37g、無(wú)水檸檬酸鈉6g、碳酸氫鈉1.25g、乙二胺四乙

酸（EDTA1.25g）、氯化鉀0.75g放入潔凈的錐形瓶中，慢慢加新鮮制取的雙蒸水1000mL，攪拌均勻，

用過(guò)濾紙過(guò)濾入另一錐形瓶中，煮沸15分鐘，放置至常溫備用，用前置于36℃水浴鍋中加熱。

商品解凍稀釋液按說(shuō)明書(shū)稀釋使用

貴州省標(biāo)準(zhǔn)化公共服務(wù)平臺(tái)

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附錄B

（規(guī)范性附錄）

細(xì)管冷凍精液深部輸精劑量

表1細(xì)管冷凍精液深部輸精劑量要求

供體公豬供體公豬

項(xiàng)目劑量為引入品種、為地方品種（推

備注

培育品種廣利用）

劑量（mL）/支中型0.5mL≥0.45

活力（前向運(yùn)動(dòng)精子％）≥45≥40

前向運(yùn)動(dòng)精子數(shù)/（108個(gè)/

細(xì)管冷凍精液N≥2.0N≥1

支）

質(zhì)量

精子畸形率％≤20

受體母豬

受體母豬

項(xiàng)目劑量為引入品種、

為地方品種

培育品種

GB232382021.4.

母豬需要輸配的有效目標(biāo)精

≥12個(gè)億≥10個(gè)億表1。

子數(shù)（108個(gè)/劑）

每個(gè)輸精瓶需要解凍稀釋細(xì)

深部輸精12個(gè)億/N10個(gè)億/N

管凍精數(shù)(支)

GB232382021.4.

深部輸精量劑量（mL）/份4040表1。