實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備課件

實(shí)驗(yàn)二、各種生物裝片的制作一.目的與要求1、熟練掌握各種生物裝片的制作。找同學(xué)邊講解邊演示各種生物裝片的制作過程2、學(xué)會(huì)指導(dǎo)學(xué)生制作其裝片3、找同學(xué)講解生物繪圖的要求并讓學(xué)生初步掌握生物繪圖的基本方法。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備二.材料和用具

HB及2H或3H繪圖鉛筆、橡皮、直尺、繪圖紙、鉛筆刀、載玻片，蓋玻片、土豆、洋蔥、顯微鏡。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備三.實(shí)驗(yàn)步驟(一).生物繪圖找同學(xué)講解生物繪圖的要求和方法實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備要求1.具有高度的科學(xué)性，不得有科學(xué)性錯(cuò)誤。形態(tài)結(jié)構(gòu)要準(zhǔn)確，比例要正確，要求真實(shí)感，立體感，精美而美觀。2.圖面要力求整潔，鉛筆要保持尖銳，盡量少用橡皮。3.繪圖大小要適宜，位置略偏左，右邊留著注圖。4.繪圖的線條要光滑、勻稱，點(diǎn)點(diǎn)要大小一致。5.繪圖要完善，字體用正楷，大小要均勻，不能潦草。注圖線用直尺畫出，間隔要均勻，且一般多向右邊引出，圖注部分接近時(shí)可用折線，但注圖線之間不能交叉，圖注要盡量排列整齊。6.繪圖完成后在繪圖紙上方要寫明實(shí)驗(yàn)名稱、班級(jí)、姓名、時(shí)間，在圖的下方注明圖名及放大倍數(shù)。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備方法生物繪圖的方法有多種，最長(zhǎng)見的是點(diǎn)點(diǎn)襯陰法。點(diǎn)點(diǎn)襯陰法即將圖形畫出后，用鉛筆點(diǎn)出圓點(diǎn)，以表示明暗和深淺，給予立體感。在暗處點(diǎn)要密，明處要疏，但要求點(diǎn)要均勻，點(diǎn)點(diǎn)要從明處點(diǎn)起，一行行交互著點(diǎn)，物體上的斑紋描出再點(diǎn)點(diǎn)襯陰，點(diǎn)點(diǎn)襯陰法要求不能用涂抹陰影的方法以代替點(diǎn)點(diǎn)，此點(diǎn)初學(xué)者要尤為注意。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備（二）徒手切片法（同學(xué)講解并演示）用光學(xué)顯微鏡觀察的樣品必須是透明的薄片，因此，要先把觀察的材料制成透明的切片后，才能在顯微鏡下觀察。徒手切片方法是觀察植物內(nèi)部構(gòu)造的方法，徒手切片的重要工具是雙面刀片，每次用后必須擦干凈，注意保護(hù)，以免生銹。徒手切片的過程如下：實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備1、材料的選擇:一般選用軟硬適度的植物根，莖或葉等，材料不宜太硬也不太軟。切較軟的材料時(shí)，可用馬鈴薯、胡蘿卜根或肥皂將欲切的材料夾住；一起進(jìn)行切片。有些葉片亦可卷成筒狀再進(jìn)行切片。欲切之材料應(yīng)先截成適當(dāng)?shù)亩螇K，并削平切面，一般截面的大小以不超過3-5mm2為宜，長(zhǎng)度2-3cm，較便于手持并進(jìn)行切片。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備2、方法和步驟：實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備（1）.切片前，在小培養(yǎng)皿中盛以清水，準(zhǔn)備好毛筆，滴管和刀片等用具和欲切的材料。（2）.切片時(shí)用左手的三個(gè)指頭拿住材料，并使材料稍突出在手指上，以免刀口損傷手指。右手持雙面刀片，把刀刃放在經(jīng)過削平的平面上，輕輕壓住它，刀口向內(nèi)，且與材料斷面平行，然后以均勻的力量和平穩(wěn)的動(dòng)作，自左前方向右后方滑行切片，注意要用整個(gè)手臂向后拉（手腕不必用力）。切片時(shí)動(dòng)作要敏捷，材料要一次切下（整個(gè)過程中應(yīng)用清水濕潤(rùn)材料和刀面，使之潤(rùn)滑，否則材料容易破損）。如此連續(xù)動(dòng)作，切下許多薄片后，就用濕毛筆將這些薄片輕輕移入已盛水的培養(yǎng)皿中備用。徒手切片時(shí)最重要的是切下一小片平而薄的組織，而并不要求切下一個(gè)完整的切片。（3）.用毛筆挑選最薄而透明的切片，取出放在載玻片上，制成臨時(shí)裝片觀察；如標(biāo)本有保留價(jià)值，則可再進(jìn)行以下處理，制成永久標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備A、將切片移入小燒杯中，經(jīng)50％、60％、70％各級(jí)乙醇中進(jìn)行脫水及固定，每級(jí)5分鐘，然后移入1％番紅染液中（用70％乙醇溶液配制）中30分鐘。B、繼續(xù)移入80％、90％、95％各級(jí)乙醇脫水，每級(jí)5分鐘。再移入1％固綠染液（用95％乙醇配制）染色30分鐘，再入95％乙醇中洗去浮色，最后進(jìn)入無水乙醇脫水5分鐘。C、切片置于無水乙醇:二甲苯＝1：1的溶液中5分鐘，再移入純二甲苯中5分鐘，此時(shí)組織切片呈透明狀態(tài)。D、將切片置于載玻片中央，加一滴樹膠，蓋上蓋玻片封片，待干燥后即可使用。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備徒手制片的應(yīng)用和主要特點(diǎn)

徒手制片（徒手切片）一般指徒手用刀片（常用單面刀片）把新鮮的植物材料切成薄片的制片方法。此法在植物制片中具有十分重要的地位，是一種普遍應(yīng)用的制片方法。比如在研究花芽分化、新梢、新根及葉片等解剖構(gòu)造以及貯藏營(yíng)養(yǎng)等方面時(shí)，常采用徒手切片法。此外，在進(jìn)行植物組織顯微化學(xué)鑒定以及制作永久制片之前，也經(jīng)常先用徒手切片進(jìn)行觀察，以檢查材料是否合乎要求而決定取舍。因此徒手制片技術(shù)是科研人員必須學(xué)習(xí)和掌握的基本技術(shù)之一。徒手制片的主要優(yōu)點(diǎn)是：（1）能及時(shí)觀察研究植物生活組織的結(jié)構(gòu)和天然色彩；（2）方法及用具簡(jiǎn)單，不需切片機(jī)等機(jī)械設(shè)備，短時(shí)間即可完成，這是其他方法所不及的；主要缺點(diǎn)是（3）對(duì)于微小、柔軟、水分過多以及堅(jiān)硬的材料，難以用徒手切成薄片；（4）對(duì)于操作不熟練者，往往切成厚薄不勻或不完整的切片。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備徒手制片的方法和注意事項(xiàng)

徒手制片最主要的工具就是刀片，?？捎脝蚊姹０驳镀Ｒ@得良好的切片，首先要保持刀口的鋒利，因此在進(jìn)行材料的截取、削平切面時(shí)，可以用解剖刀或用過的刀片，不要用新刀，以免鈍化刀口。切片前，先準(zhǔn)備好一個(gè)培養(yǎng)皿盛好清水，同時(shí)準(zhǔn)備好顯微鏡、載玻片、蓋玻片、刀片等用具，然后拿取材料進(jìn)行切片。材料可以是新鮮的材料，也可以是經(jīng)過固定的材料（若材料取回后，因各種原因不能及時(shí)切片，可將材料保存在F.A.A固定液中，而后可隨取隨做切片）。切片時(shí)，將欲切材料斷面和刀片上滴上清水以保持材料濕潤(rùn)（整個(gè)切片過程中均應(yīng)用清水潤(rùn)濕材料和刀面，以減小切片時(shí)材料與刀片間的摩擦力）。以左手拇指、食指、中指捏住材料，拇指應(yīng)低于食指，以免切傷手指；材料高出指尖（不要高出太多，否則不易掌握切片厚薄）。右手執(zhí)刀，將刀平放在食指上，刀口朝內(nèi)，刀面與材料斷面平行，然后以均勻快捷的動(dòng)作自左前方向右后方以臂力帶動(dòng)刀片水平切割移動(dòng)（不要用腕力）。切片時(shí)還要注意：兩只手要能自由活動(dòng)而不要靠在身上或桌子上；切實(shí)動(dòng)作要迅速，材料一次切下，切忌停頓或拉鋸式切割。連續(xù)切數(shù)片后，用濕毛筆將切下的薄片輕輕移入盛水的培養(yǎng)皿中（或?qū)⒌镀谂囵B(yǎng)皿水中稍一晃動(dòng)，切片即可飄落于水中）備用。做連續(xù)徒手切片時(shí)，會(huì)因用力不均或刀不鋒利而出現(xiàn)切面傾斜的現(xiàn)象，要及時(shí)修正。然后用鑷子或毛筆在培養(yǎng)皿中挑選薄而透明的切片（形狀不要求非常完整），放在載玻片上的水滴中，加上蓋玻片制成臨時(shí)制片進(jìn)行觀察。在加蓋玻片時(shí)，要使蓋玻片的一側(cè)邊緣與水滴邊緣接觸，然后慢慢向下放蓋玻片，若蓋玻片下有氣泡應(yīng)重新放置蓋玻片。要區(qū)分氣泡和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的差別，氣泡呈圓形，中間亮，邊緣是黑圈，而且隨著顯微鏡調(diào)焦的變化黑圈大小也隨之變化。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備用徒手切片的材料不宜過大，一般以表面不超過5~8mm2為宜。對(duì)于過于柔軟或微小的材料（如葉片、細(xì)小的根尖等），難以用手拿住來做切片，需要借助一些夾持物方可進(jìn)行切片，一般可采用馬鈴薯塊莖或胡蘿卜直根（將中間硬心切去）作夾持物。先把夾持物切一縱向切口，然后把材料夾于夾持物中，然后進(jìn)行徒手切片。夾持物的大小、夾縫（甚至夾溝）等應(yīng)視材料具體情況而定。另外，像觀察植物表皮結(jié)構(gòu)，可以不用切片，撕取表皮后制成臨時(shí)裝片觀察。如果臨時(shí)制片需保存一段時(shí)間，（1）將材料封在水中，每隔20~30分鐘再加一滴水，此法可保持?jǐn)?shù)小時(shí)；（2）用10%~30%的甘油水溶液代替清水封片，并將制片放在鋪有濕濾紙的大培養(yǎng)皿中保存，或用石蠟或指甲油封邊保存，可保存1~2周或更長(zhǎng)時(shí)間?？傊畬?duì)于徒手制片來說，在正確掌握操作的基礎(chǔ)上，反復(fù)訓(xùn)練，最終可以使徒手切片達(dá)到薄、正、精美的程度。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備（三）臨時(shí)裝片的制作（同學(xué)講解并演示）背景知識(shí)1.玻片標(biāo)本類型：按照制作標(biāo)本可保存的時(shí)間長(zhǎng)短，可分為兩類。（1）臨時(shí)玻片標(biāo)本：是實(shí)驗(yàn)中觀察標(biāo)本常采用的方法，保存時(shí)間不長(zhǎng)久是本法的缺點(diǎn)。如：草履蟲形態(tài)及應(yīng)激性、口腔上皮細(xì)胞、植物細(xì)胞質(zhì)壁分離及復(fù)原、洋蔥根尖有絲分裂、病原體觀察等。（2）永久玻片標(biāo)本：如洋蔥根尖固定裝片、蛔蟲受精卵固定裝片等。2.制片法：中學(xué)常用的四種制片法是:石蠟切片法（如制作植物莖橫斷面的切片）；涂片法（制作衣藻、細(xì)菌、原生動(dòng)物、酵母菌口腔上皮細(xì)胞臨時(shí)裝片）；壓片法（植物幼根根尖有絲分裂、洋蔥根尖有絲分裂、蠶豆根尖有絲分裂、早期花蕾觀察花粉母細(xì)胞、蝌蚪尾部細(xì)胞有絲分裂、雙翅目幼蟲唾液腺染色體、洋蔥鱗片葉表皮等臨時(shí)裝片的制作）；徒手切片法（如雙子葉植物夾葉桃、桂花葉片橫切及木本植物大葉黃楊莖的橫切）。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備制作洋蔥表皮細(xì)胞臨時(shí)裝片實(shí)驗(yàn)用品滴管、紗布、鑷子、吸水紙、載玻片、蓋玻片、清水、刀片、染液（碘液）實(shí)驗(yàn)材料洋蔥表皮細(xì)胞、其他感興趣的生物材料實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備實(shí)驗(yàn)步驟

1．擦拭載玻片、蓋玻片

2、在載玻片的中央滴一滴清水實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備3．在洋蔥內(nèi)表皮用刀片劃出一個(gè)約1cm2的正方形（在使用刀片時(shí)注意安全），用鑷子撕取洋蔥內(nèi)表皮

實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備4．將內(nèi)表皮置于載玻片的清水中，并使之鋪開

實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備5．從一側(cè)開始慢慢蓋上蓋玻片，不能有氣泡產(chǎn)生

實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備6．在蓋玻片的一側(cè)滴一滴染液7．然后用吸水紙從另一側(cè)吸取多余的染液，使洋蔥表皮細(xì)胞均勻染色8．顯微鏡下觀察.

染色后的洋蔥細(xì)胞(示細(xì)胞核)（圖）

實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備“擦、滴、撕、展，蓋、滴、吸染”的臨時(shí)裝片制作順口溜制作人的口腔上皮細(xì)胞臨時(shí)裝片時(shí)的前四個(gè)步驟可簡(jiǎn)單記作：一漱、二擦，三滴、四刮等順口溜。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備改進(jìn)霉菌臨時(shí)裝片制法霉菌臨時(shí)裝片的制法沒作介紹，教參上的制法又不很實(shí)用。為此，在對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行不斷摸索、探討后，對(duì)霉菌臨時(shí)裝片的制作方法進(jìn)行了改進(jìn)。改良后的方法步驟如下：經(jīng)改進(jìn)的實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單明了，學(xué)生一學(xué)就會(huì)，一次成功率可達(dá)80%，其余學(xué)生重做后即可成功。（1）在載玻片中央滴一滴清水。（2）用解剖針或解剖剪取少許培養(yǎng)好的霉菌，放入載玻片上的清水中。（3）蓋上蓋玻片。（4）用解剖針輕壓并敲擊蓋玻片。（5）把臨時(shí)裝片豎著稍傾斜，用滴管吸清水從蓋玻片一側(cè)小心沖洗霉菌。（6）重復(fù)4、5兩步，直到裝片內(nèi)的霉菌呈薄霧狀。（7）擦干臨時(shí)裝片周圍的水分，臨時(shí)裝片即制好。用上述方法制作的臨時(shí)裝片，因經(jīng)過“敲擊”，霉菌被分散，克服了菌絲大量重疊的缺點(diǎn)，又進(jìn)行了“沖洗”，散落的孢子大多被沖走，避免了孢子太多，遮蓋菌絲的情況。所以鏡檢時(shí)，霉菌的菌絲分布均勻、孢子梗清楚，無論是青霉的掃帚狀結(jié)構(gòu)，還是曲霉的球形放射狀結(jié)構(gòu)都清晰可辨。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備（四）水螅整體裝片的制作實(shí)驗(yàn)前的思考整體裝片制作法，可以用于封固小形動(dòng)、植物的整個(gè)身體，或個(gè)別組織和器官，所需的儀器、藥品及方法都比較簡(jiǎn)單，制成永久裝片后能長(zhǎng)期保存。材料器具水螅；玻璃缸，表面皿，吸管；70%無水乙醇，氨水，1%鹽酸，二甲苯，波因（Bouin）氏固定液，硼砂洋紅染液。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備步驟1．波因氏固定液的配制75毫升苦味酸飽和水溶液中加入25毫升甲醛，在臨用時(shí)再加入5毫升冰乙酸。2．固定固定水螅時(shí)，先在表面皿里面放少量水，然后用吸管把水螅從培養(yǎng)缸中吸出，放在表面皿內(nèi)。等水螅身體和觸手慢慢伸展后，用加熱的波因氏液（30～34℃）固定。固定液要多一些，傾倒時(shí)要迅速，也可用吸管吸取加熱的波因氏液澆射在水螅上，澆射的方向必須從基部到觸手端，澆射的時(shí)間必須極短，不要把固定液滴入水內(nèi)，這樣水螅才不至于收縮。在波因氏固定液中固定4～8小時(shí)。3．浸入70%乙醇中，每天更換一次70%乙醇，直到洗去標(biāo)本上因固定液而染上苦味酸的黃色為止。如果需要快一些去色，可以加1～2滴氨水。如果使用氨水去色，則在黃色除去后，仍應(yīng)該換兩次70％乙醇，以除去氨水的堿性。4．染色浸入硼砂洋紅染液（配制方法參見本書第836頁(yè)）中，染24小時(shí)。5．褪色用1%鹽酸乙醇褪色，時(shí)間為0．5～1分鐘，褪到內(nèi)部器官能看清楚為止。6．脫水依次浸入70％乙醇、80%乙醇、95%乙醇及無水乙醇。7．透明用二甲苯透明。中途更換一次新液，至透明為止。8．封片用樹膠封片，樹膠可以濃一些。實(shí)驗(yàn)二各種生物裝片的制備注意事