(高清版)DB32∕T 2792-2015 南粳9108原種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程　

備案號(hào)：47706-2015DB32BasicSeedProducingTechnologyofRiceVarietyNanjing9108江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：周麗慧、陳濤、趙慶勇、姚姝、趙春芳、趙凌、朱鎮(zhèn)、張亞東、王才1南粳9108原種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適2選擇標(biāo)準(zhǔn)和決選標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合DB32/T2791—2015水稻品種南粳9108的規(guī)定。株行選擇標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合DB32/T27913儲(chǔ)藏和檢驗(yàn)按GB/T3543.1～7-1995進(jìn)行，符合GB4404.1-2008之規(guī)定的原種種子4(資料性附錄)南粳9108是含有暗胚乳突變基因Wx-mq和香米基因fgr的水稻品種，可針對(duì)這兩個(gè)基因進(jìn)行分子標(biāo)記檢測(cè)，輔助辨別品種的真?zhèn)?。A.2PCR反應(yīng)體系。20μLPCR反應(yīng)體系包括：DNA(10ng/μL)2.0μL,Primer(4pmol/μL)2.0μL,10×PCRBuffer(含MgCl?)2.0μL,dNTP(2.5mmol/L)0.4ResearchPTC-200熱循環(huán)儀上進(jìn)行，反應(yīng)程序如下：94℃下預(yù)變性5min,每個(gè)循環(huán)94℃下變性30s,65℃下退火30s,72℃下延伸1min,共35個(gè)循環(huán)，最后72℃下延伸10min,4℃下保存待用。A.1.3產(chǎn)物分析反應(yīng)產(chǎn)物在質(zhì)量比濃度為1.5%的瓊脂糖凝膠上電泳，經(jīng)溴化乙錠染色并于凝膠成像系統(tǒng)下觀察分292bp和200bp的DNA條帶。(M:分子量標(biāo)準(zhǔn)；1、2、5、7、8、9、10為南粳9108稻谷標(biāo)準(zhǔn)帶型，3、4、6為非標(biāo)準(zhǔn)帶型。)A.2.1fgr標(biāo)記序列20μLPCR反應(yīng)體系包括：DNA(10ng/μL)2.0μL,Primer(4pmol/μL)2.0μL,10×PCRBuffer(含5DB32/T2792-2015ResearchPTC-200熱循環(huán)儀上進(jìn)行，反應(yīng)程序如下：94℃下預(yù)變性5min,每個(gè)循環(huán)94℃下變性30s,55℃下退火30s,72℃下延伸1min,共35個(gè)循環(huán)，最后72℃下延伸10min,4℃下保存待用。A.2.3產(chǎn)物分析反應(yīng)產(chǎn)物在8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳，經(jīng)硝酸銀染色并于凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。利用fgr基因InDel分子標(biāo)記擴(kuò)增水稻品種的基因組DNA,南粳9108標(biāo)準(zhǔn)稻谷能擴(kuò)增出100bp的DNA條帶，而非南粳9108標(biāo)準(zhǔn)稻谷則擴(kuò)增出107bp或同時(shí)具有100bp和107bp的帶型。